化疗是肿瘤临床治疗中最常用的手段，然而化疗药物往往缺乏肿瘤选择性，其非特异性的细胞毒性常导致正常组织的损伤，极大限制了其临床应用[1]。近年来，化学动力学治疗(chemodynamic therapy，CDT)作为一种新兴的肿瘤治疗策略，因其独特的肿瘤微环境(tumor microenvironment，TME)响应特性而备受关注。CDT利用TME中过表达的过氧化氢(H2O2)和弱酸性条件，通过芬顿(Fenton)或类芬顿反应将H2O2转化为具有细胞毒性的羟基自由基(·OH)，从而对肿瘤细胞造成特异性杀伤[2]。例如，Gérard Jaouen等报道的Ferrocifen系列衍生物和本课题组报道的二茂铁-多巴胺衍生物，利用二茂铁催化芬顿反应产生·OH触发肿瘤细胞凋亡，是有效的CDT抗癌候选前药[3-6]。Yang等报道了一种具有超氧化物歧化酶活性的纳米酶，通过促进超氧阴离子(O2-)的转化，升高肿瘤部位H2O2含量，提高CDT效率，有效抑制肿瘤细胞生长[7]。与传统化疗相比，CDT具有两大优势：其一，CDT治疗中活性氧(ROS) 的产生依赖于肿瘤区域特有的H2O2富集和酸性，因而可有效提高治疗选择性，减少对正常组织的损伤[8-9]。其二，ROS通过氧化损伤直接破坏生物大分子(如脂质、蛋白质和DNA)，可规避部分化疗药物耐药机制，为克服化疗耐药提供了新思路。因此，开发基于CDT的策略对于提高肿瘤治疗的安全性与可靠性具有重要意义。
荧光成像由于具有灵敏度高、选择性好、无损伤、时空分辨率高等优点，可协助精确监测疾病治疗过程中药物的递送、释放过程，并评估药物治疗的活性[10]。将治疗药物与成像试剂集合于一体的前药，可同时实现疾病的诊断、治疗以及疗效评估[11-13]。苯并[c][1, 2, 5]硒二唑(SeNBD)及其衍生物作为一类强电子受体，具有较窄HOMO-LUMO能带隙。其荧光发射可在可见光至近红外光的波长范围间灵活调制，具有光毒性低、组织穿透能力强、背景干扰低的特点，特别适合活细胞成像[14-16]。例如，SeNBD与L-异丝氨酸偶联后，可用于可视化跟踪乳酸在活细胞中的转运过程[17-18]。Zhou等制备了一种基于SeNBD与萘苯二酰亚胺偶联物的探针，可用于癌细胞凋亡过程中硫氧还蛋白(TXNRD)还原酶活性的实时跟踪[19]。因此，本研究拟利用SeNBD荧光团构建具有化学动力学诊疗活性的前药分子。
本研究中，我们开发了一种基于二茂铁与SeNBD偶联物的响应性化学动力学诊疗前药 FcNH-SeNBD(图 1)。FcNH-SeNBD可响应肿瘤细胞中过表达的H2O2，在二茂铁的催化作用下通过芬顿反应，生成具细胞毒性的·OH，实现前药的活化并诱导肿瘤细胞凋亡。在此过程中，二茂铁被H2O2氧化，导致其与SeNBD间的光致电子转移(PET)效应受阻[20-22]，因此，二茂铁对SeNBD荧光的猝灭作用被抑制，Se-NBD荧光发射得以恢复，形成“turn-on”荧光信号。FcNH-SeNBD巧妙地利用了二茂铁的芬顿反应催化活性以及荧光调节性能，通过荧光信号的增强实现前药活化过程的实时监测，因而可协助评估CDT的治疗效果，具有个性化抗肿瘤诊疗的应用潜力。
合成 FcNH-SeNBD的原料及溶剂均购买自供应商，使用前未作进一步纯化。紫外可见吸收光谱测量使用UV 1050 Spectrophotometer(Perkin Elmer)。荧光光谱测量使用FS5 Spectrophotometer (Edinburgh)。1H NMR、13C NMR和 77Se NMR测试分别使用400、101和76 MHz NMR spectrometer(Bruker Avance)。ESI-HRMS测量使用Q-Exactive mass spec- trometer(Thermo UPLC H-Class/Xevo G2-XS)。所有光学测试均采用色谱级二甲亚砜(DMSO)与超纯水配制样品溶液。结直肠癌细胞(HCT116)、肝癌细胞(HepG2)和正常结肠上皮细胞(NCM-460)在培养基(DMEM，含10% 胎牛血清和1% 青霉素+链霉素)中培养。培养箱内温度为37 ℃，二氧化碳体积分数为5%。荧光成像使用倒置荧光显微镜(LV100ND，NIKON)。蛋白印迹实验使用电泳仪(DYY-6C)、转移电泳仪槽(DYCZ-400D)、垂直电泳槽(DYCZ-24DN)、台式离心机(TGL-16c，上海安亭)、冷冻离心机(TGL- 16，湖南湘仪)、暗匣(AX-Ⅱ，广东粤华)以及扫描仪(LiDE110，Canon)完成。
4-氯苯并硒二唑(2)的合成：将二氧化硒(0.499 g，4.5 mmol)加入到含3-氯邻苯二胺(1)(0.525 g，3.7 mmol)的乙醇溶液(20 mL)中。反应体系在85 ℃下回流反应3 h，然后减压蒸发除去溶剂。残余固体经柱层析(V正己烷: V乙酸乙酯=7:1)洗脱分离后，得到白色固体(0.717 g，89%)。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)：δ 7.84 (dd，J=8.9，1.0 Hz，1H)，7.70(dd，J=7.1，1.0 Hz，1H)，7.53(dd，J=9.0，7.2 Hz，1H)。13C NMR(101 MHz，DMSO-d6)：δ 160.24，156.76，129.74，128.48，126.94，123.03。77Se NMR(76 MHz，DMSO-d6)：δ 1 534.89。
SeNBD-Cl (3)的合成：取 2(0.501 g，2.3 mmol)溶于5 mL H2SO4中，在0 ℃下滴加1.5 mL HNO3。搅拌30 min后，缓慢滴加100 mL H2O猝灭反应，生成大量黄色沉淀。固体用乙酸乙酯和水萃取，有机相使用无水MgSO4干燥后，减压蒸发除去溶剂。粗产物经乙酸乙酯重结晶纯化得到黄色固体(0.573 g，95%)。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)：δ 8.50(d，J=8.1 Hz，1H)，7.94(d，J=7.9 Hz，1H)。13C NMR(101 MHz，DMSO-d6)：δ 157.24，150.59，140.33，133.65，127.87，126.50。77Se NMR(76 MHz，DMSO-d6)：δ 1 573.48。
FcNH - SeNBD的合成：称取 3(26.2 mg，0.1 mmol)、氨基二茂铁(20.1 mg，0.1 mmol)、碳酸氢钠(16.8 mg，0.2 mmol)，加入3 mL DMF，于80 ℃下搅拌反应12 h，溶液变为黑色。结束后反应液经乙酸乙酯与水萃取，有机相再经过无水MgSO4干燥，减压蒸发除去溶剂。粗产物经过柱层析(V石油醚: V乙酸乙酯=5: 1)洗脱分离，得到暗红色固体(22.7 mg，53%)。1H NMR(400 MHz，CDCl3)：δ 8.70(d，J=8.7 Hz，1H)，7.59 (s，1H)，6.84(d，J=8.8 Hz，1H)，4.54(s，2H)，4.32(s，5H), 4.28(s，2H)。13C NMR(101 MHz, CDCl3)：δ 152.43，145.23，134.84，130.66，100.04，94.33，69.54，66.25，63.57。77Se NMR(76 MHz，CDCl3)：δ 1 522.64. ESI - HRMS(m/z)：C16H12FeN4O2Se+[M+]计算值427.947 6，实验值427.946 6。
单线态氧检测：采用9，10-蒽二基-双(亚甲基) 二甲酸(ABDA)为单线态氧检测探针。在ABDA溶液(100 μmol·L-1)中分别加入 SeNBD-Cl和 FcNH-SeNBD(10 μmol·L-1)，随后置于白光下(30 mW·cm-2) 照射，检测378 nm处溶液的紫外吸收峰变化。
羟基自由基检测：在具塞比色管中加入1 mL 150 μmol·L-1的亚甲蓝(MB)溶液、1 mL 7.5 mmol·L-1的H2O2溶液、0.9 mL DMSO、0.1 mL磷酸盐缓冲液(PBS，pH=7.2)。上述溶液作为空白对照。之后在避光条件下加入与空白等量的MB、H2O2以及PBS(pH= 7.2)，再分别加入0.9 mL FeSO4溶液(浓度33 μmol· L-1)、0.9 mL FcNH-SeNBD(33 μmol·L-1)的DMSO溶液，其中 FcNH-SeNBD溶液设置白光光照组(30 mW·cm-2，10 min)与避光组对比实验，检测反应液在665 nm处的吸光度(A)。羟基自由基生成效率(η)计算式：η=(A空白-A样品)/(A空白-AFeSO4)×100%。
采用色谱级DMSO与超纯水体积比为9:1的混合溶剂配制样品溶液，浓度为10 μmol·L-1，荧光光谱激发波长为λex=467 nm，狭缝宽度为8 nm。
FcNH - SeNBD随过氧化氢浓度响应：在10 μmol·L-1的 FcNH-SeNBD中加入过氧化氢，使得溶液中的过氧化氢最终浓度分别为0、5、10、20、40、60、80、100 μmol·L-1，室温下放置15 min。然后将溶液转移至石英比色皿(1 cm)中测量荧光光谱。另外，向10 μmol·L-1的 FcNH-SeNBD加入40 μmol· L-1 H 2O2，测定其荧光发射光谱随不同放置时间(5、10、15、30、60 min)的变化情况。
FcNH-SeNBD的细胞毒性通过CCK-8测试进行评价。在96孔无菌板中，每孔加入100 μL的HCT116、HepG2细胞或NCM-460悬液，并置于CO2培养箱中孵化24 h。配制质量浓度梯度依次为0、3.125、6.250、12.50、25.00、50.00、100.0、200.00 μg· mL-1的前药溶液，并依次加入96孔板中。各个浓度重复6孔，其中3孔作为光照组，另3孔作为对照组不进行光照。光照组在30 mW·cm-2的白光下照射10 min并孵化24 h后，弃去前药溶液，每孔中加入100 μL 5% CCK-8溶液，继续孵化2 h，使用酶标仪测量450 nm处的吸光度(即光密度OD)。
相对细胞活力计算公式：Rcv=ODtreated/ODcontrol× 100%=Atreated/Acontrol×100%，其中Atreated、Acontrol分别是在前药和空白样品的情况下获得的吸光度。
将HCT116细胞接种在20 mm培养皿中(5×105个)并置于培养箱中培养。12 h后弃去皿中培养基，用PBS淋洗细胞1~2次。将细胞分为实验组与对照组。其中，实验组加入培养基配制的5、10、20、40 μmol·L-1 FcNH-SeNBD溶液；对照组加入纯培养基。2组在相同条件下孵化3 h后均用PBS润洗细胞3次，置于倒置显荧光显微镜下进行细胞成像(λex=450 nm，λem=600~700 nm)。
向6孔板中加入100 μL的HCT116细胞悬浊液(每孔5×105个HCT116细胞)并置于CO2培养箱中孵化24 h。随后，向各孔加入前药 FcNH-SeNBD溶液(12.50 μg·mL-1)并分别继续孵化0、24和48 h。孵化结束后，弃去培养基，取细胞置于离心管中。向离心管中加入适量的RIPA蛋白裂解液及相应比例的蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂并混合均匀，置于冰上裂解30 min。随后在4 ℃低温下离心(12 000 r· min-1，15 min)，取上清液。向上清液中加入蛋白上样缓冲液并于100 ℃孵化10 min。使用SDS-PAGE分离胶(12%)分离样品(电压U=70 V，30 min；110 V，90 min)。电泳结束后将蛋白转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，随即用5% 脱脂奶粉溶液于室温下封闭1 h并洗涤。根据供应商说明书分别配制一抗(GAPDH：Proteintech，60004-1-Ig；Caspase3：Protein- tech，19677 - 1 - APg；cleaved Caspase3：Proteintech，25128-1-AP)及辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠二抗或兔二抗(鼠二抗：Cell Signaling Technology，7076S；兔二抗：Cell Signaling Technology，7074S)溶液。将一抗溶液与PVDF膜在4 ℃孵化过夜。回收一抗，使用TBST缓冲液(Tris-HCl+Tween)洗涤PVDF膜3次，每次5 min。室温下，将PVDF膜与二抗溶液孵化1~ 2 min。回收二抗，再次用TBST缓冲液洗涤PVDF膜3次，每次5 min。使用新鲜配制的电化学发光显影液(苏州新赛美生物科技，P2300)于暗室中曝光和定影。
如图 2所示，4-氯苯并硒二唑(4-chlorobenzo[c] [1, 2, 5]selenadiazole，2)和6-氯-7-硝基苯并硒二唑(6- chloro- 7 -nitrobenzo[c][1, 2, 5]selenadiazole，SeNBD-Cl，3)参考已有文献合成[17]。SeNBD-Cl (3)进一步和二茂铁胺发生取代反应，得到 FcNH-SeNBD。相关 1H NMR、13C NMR及 77Se NMR表征谱图见图 3。图 3A为2的 1H NMR谱图，其中化学位移δ=7.84、7.70、7.53处的峰分别对应4-氯苯并硒二唑芳环2位、3位以及1位的氢原子。硝基化反应后的产物 SeNBD-Cl的1位氢原子对应的信号峰消失(图 3D)。FcNH-SeNBD的 1H NMR谱图中可观察到茂环的特征信号，分别为δ=4.54、4.32、4.28的峰(图 3G)，证实了产物 FcNH-SeNBD结构。13C NMR(图 3B、3E和3H)与 77Se NMR(图 3C、3F与3I)进一步佐证了由2和 SeNBD-Cl制备FcNH-SeNBD过程中碳原子与硒原子的化学环境变化。FcNH-SeNBD的高分辨质谱中观察到m/z=427.946 6的分子离子峰，这与 FcNH-SeNBD的理论模拟m/z及同位素峰分布吻合(图 4)。综上，波谱分析确证了产物FcNH-SeNBD的结构及纯度。
在紫外可见吸收光谱中可观察到SeNBD-Cl在380 nm处具有较强吸收峰(图 5A)。与 SeNBD-Cl相比，FcNH-SeNBD在431、510 nm处的新吸收峰为二茂铁的特征吸收。在荧光光谱中(图 5B和5C)，以最大激发波长460 nm激发 SeNBD-Cl，可观察到其位于511 nm处的荧光发射。然而在相似条件下，未观察到FcNH-SeNBD的荧光发射，这可能是由于二茂铁与SeNBD之间的光诱导电子转移(PET)效应猝灭了其荧光发射。
c SeNBD-Cl=10 μmol·L-1, cFcNH-SeNBD=10 μmol·L-1, DMSO/H2O (9∶1, V/V), λex=460 nm, λem=511 nm.
为了探究FcNH-SeNBD前药的CDT潜力，我们探究了其产生ROS的能力。我们首先使用单线态氧(1O2)探针ABDA与 SeNBD-Cl或 FcNH-SeNBD混合，之后光照(30 mW·cm-2)30 min，以探究二者的 1O2产生能力[23]。由图 6A可知，在光照条件下，可观察到对照组中ABDA的特征的多重吸收峰(360、378和400 nm)，且并未观察到吸收峰强度随光照时间的变化，表明光照ABDA本身不会导致 1O2产生。与之类似，加入SeNBD-Cl(图 6B)或FcNH-SeNBD(图 6C)后ABDA的吸收峰亦保持稳定。然而，当ABDA与阳性参照物玫瑰红(rose bengal，图 6D)混合并光照时，ABDA在360、378和400 nm处的特征吸收峰均显著降低。这表明SeNBD-Cl与FcNH-SeNBD在光照条件下不具备显著的催化产生 1O2能力。
1O2 indicator: 100 μmol·L-1 ABDA.
随后，我们采用MB降解法测定了FcNH-SeN-BD催化生成·OH的效率。该方法基于·OH可特异性降解MB的特性，通过监测MB在665 nm处吸光度的变化以定量·OH的生成效率[24]。如图 7A所示，在避光条件下，FcNH-SeNBD导致MB的吸收峰减弱，这表明 FcNH-SeNBD可促使·OH产生，生成效率为28%。在光照条件下(FcNH-SeNBD+hν，白光，30 mW·cm-2)，MB吸收峰进一步降低，·OH生成效率达52%。该现象表明，光照可有效促进芬顿反应的进行[25]，意味着 FcNH-SeNBD具有潜在的光照增强CDT活性。
为了评估 FcNH-SeNBD在癌细胞中的荧光成像潜力，我们将 FcNH-SeNBD加入H2O2溶液，考察其荧光性质的变化。如图 7B所示，SeNBD基团在530和570 nm处的荧光发射展现出随H2O2浓度的依赖性增强。动力学分析显示，H2O2诱导的荧光发射可在5 min内迅速增强，并在15 min后达到稳定(图 7C和7D)。荧光信号的快速增强可能是由于二茂铁与过氧化氢间的芬顿反应，阻断了二茂铁与SeNBD的PET效应，从而导致SeNBD的荧光发射恢复。这意味着FcNH-SeNBD可作为一种快速、灵敏的“Off-On”型探针，具有监测 FcNH-SeNBD前药在肿瘤细胞微环境中活化过程的潜力。
为评估FcNH-SeNBD的抗肿瘤活性，我们采用CCK-8法检测了其对不同细胞系的毒性，结果见图 8和表 1。在避光条件下(图 8A)，FcNH-SeNBD对2种肿瘤细胞系(HCT116和HepG2)均表现出一定的暗毒性，其IC50分别为(28.02±1.1) μg·mL-1和(11.56± 1.3) μg·mL-1。而在光照条件下(图 8B)，其细胞毒性进一步增强，对HCT116细胞和HepG2细胞的IC50分别降至(15.74±1.5) μg·mL-1和(7.95±0.98) μg·mL-1。值得注意的是，HepG2细胞对FcNH-SeNBD的敏感性显著高于HCT116细胞，表明该化合物可能具有肿瘤类型依赖效应。此外，FcNH-SeNBD对正常结肠上皮细胞NCM-460呈现较低的毒性(IC50>100 μg· mL-1)，未观察到显著的细胞活性降低。上述结果表明，FcNH-SeNBD作为一种前药，可在肿瘤细胞环境中被选择性激活并发挥抗肿瘤活性。同时，FcNH-SeNBD对正常细胞NCM-460表现出低毒性，展现出良好的特异性治疗潜力。
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| Condition | IC50 / (μg·mL-1) | ||
| HCT116 | HepG2 | NCM-460 | |
| Dark | 28.02±1.1 | 11.56±1.3 | > 100 |
| Light | 15.74±1.5 | 7.95±0.98 | > 100 |
为验证 FcNH-SeNBD在肿瘤细胞中的荧光成像能力及摄取效率，我们将不同浓度的FcNH - SeNBD溶液分别与HCT116细胞孵化，并通过倒置显微镜观察细胞内荧光信号。如图 8C所示，经 FcNH-SeNBD处理的细胞内出现明显的红色荧光，并且荧光强度呈现 FcNH-SeNBD浓度依赖性。这表明 FcNH-SeNBD可被细胞有效摄取并在肿瘤细胞微环境下激活，产生SeNBD荧光发射。这些结果揭示FcNH-SeNBD可作为一种潜在的诊疗前药，其可激活的荧光发射性质能够辅助跟踪其在肿瘤细胞的富集与活化，用于治疗效果的预判及评估。
为深入探究FcNH-SeNBD的抗癌机制，我们通过免疫印迹实验检测了caspase 3及其活化形式cleaved caspase 3的表达水平变化[26]。作为凋亡执行的关键效应蛋白，caspase 3通常以酶原(procas- pase)形式存在，经蛋白水解切割后形成具有蛋白酶活性的cleaved caspase 3，进而启动凋亡级联反应[27-28]。如 图 9所示，经 FcNH - SeNBD处理后，HCT116细胞内cleaved caspase 3水平呈现出显著的时间依赖性升高，说明FcNH-SeNBD可能通过激活凋亡通路发挥抗癌作用，鉴于有研究报道焦亡(pyroptosis)可能参与该过程[22, 29]，其具体作用机制有待后续研究验证。
综上所述，本研究成功设计并构建了一种基于二茂铁-苯并硒二唑偶联物的肿瘤细胞微环境响应型化学动力学前药 FcNH-SeNBD。FcNH-SeNBD可在肿瘤细胞中富集并产生强红色荧光，用于协助监测前药的活化与疗效的评估。体外实验表明，FcNH-SeNBD具有良好的肿瘤选择性，对肝癌细胞HepG2[IC50= (7.95±0.98) μg·mL-1]和结直肠癌细胞HCT116[IC50=(15.74±1.5) μg·mL-1]表现出选择性杀伤作用，而对正常结肠上皮细胞NCM-460无显著毒性(IC50>100 μg·mL-1)。细胞毒性机制分析显示，FcNH-SeNBD通过激活caspase-3依赖性凋亡通路发挥对肿瘤细胞的杀伤作用。FcNH-SeNBD兼具过氧化氢激活的化学动力学治疗与荧光成像活性，具有肿瘤特异性诊疗一体化的应用潜力，为多功能抗肿瘤前药的开发提供了新的思路。
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图 1 FcNH-SeNBD过氧化氢激活的CDT活性及荧光成像示意图
Figure 1 Scheme illustration of the H2O2-activated CDT activity and fluorescence imaging capability of FcNH-SeNBD
图 3 化合物2 (A~C)、SeNBD-Cl (D~F)与FcNH-SeNBD (G~I)的 1H NMR、13C NMR及 77Se NMR谱图
Figure 3 1H NMR, 13C NMR, and 77Se NMR spectra of compounds 2 (A-C), SeNBD-Cl (D-F), and FcNH-SeNBD (G-I)
图 5 SeNBD-Cl和FcNH-SeNBD的紫外可见吸收光谱(A)、荧光激发光谱(B)和荧光发射光谱(C)
Figure 5 UV-Vis absorption spectra (A), fluorescence excitation spectra (B), and fluorescence emission spectra (C) of SeNBD-Cl and FcNH-SeNBD
c SeNBD-Cl=10 μmol·L-1, cFcNH-SeNBD=10 μmol·L-1, DMSO/H2O (9∶1, V/V), λex=460 nm, λem=511 nm.
图 6 紫外可见吸收光谱用于检测不同化合物产生的 1O2: (A) 对照组; (B) FcNH-SeNBD; (C) SeNBD-Cl; (D) 阳性对照组玫瑰红
Figure 6 UV-Vis absorption spectra for detecting 1O2 generated by various compounds: (A) control group; (B) FcNH-SeNBD; (C) SeNBD-Cl; (D) positive control rose bengal
1O2 indicator: 100 μmol·L-1 ABDA.
图 7 FcNH-SeNBD与过氧化氢的反应检测: (A) 以不同化合物处理MB后, MB的可见吸收谱图; (B) 不同浓度的过氧化氢处理FcNH-SeNBD(10 μmol·L-1)15 min后的荧光光谱; 40 μmol·L-1过氧化氢处理FcNH-SeNBD (10 μmol·L-1)不同时间时的(C) 荧光光谱和(D) 最大发射强度
Figure 7 Detection of the reaction between FcNH-SeNBD and hydrogen peroxide: (A) visible absorption spectra of methylene blue (MB) treated with different compounds; (B) fluorescence spectra of FcNH-SeNBD (10 μmol·L-1) treated with different concentrations of hydrogen peroxide for 15 min; (C) fluorescence spectra and (D) maximum emission intensities of FcNH-SeNBD (10 μmol·L-1) treated with 40 μmol·L-1 hydrogen peroxide at different times
图 8 分别在(A) 避光和(B) 光照下孵化24 h(光照条件: 白灯30 mW·cm-2, 光照时间10 min)后, FcNH-SeNBD对不同细胞系的毒性; (C) 分别用2.14、4.27、8.54和17.08 μg·mL-1 FcNH-SeNBD处理后, HCT116细胞在倒置显微镜下的明场、荧光和叠加图(比例尺: 100 μm)
Figure 8 Cytotoxicity of FcNH-SeNBD against various cell lines after incubation for 24 h in the (A) absence of light irradiation or (B) presence of light irradiation under 30 mW·cm-2 white light for 10 min; (C) Bright field, fluorescence, and overlay images of HCT116 cells treated with 2.14, 4.27, 8.54, and 17.08 μg·mL-1 FcNH-SeNBD under an inverted microscope (Scale bar: 100 μm)
图 9 FcNH-SeNBD诱导凋亡通路分析: (A) 免疫印迹法检测不同时间内caspase 3及cleaved caspase 3表达水平; (B) caspase 3定量分析; (C) cleaved caspase 3定量分析
Figure 9 Analysis of apoptosis induced by FcNH-SeNBD: (A) detecting the expression levels of caspase 3 and cleaved caspase 3 by Western blotting; (B) quantitative analysis of caspase 3; (C) quantitative analysis of cleaved caspase 3
表 1 FcNH-SeNBD对不同细胞系的细胞毒性
Table 1. Cytotoxicity of FcNH-SeNBD against various cell lines
| Condition | IC50 / (μg·mL-1) | ||
| HCT116 | HepG2 | NCM-460 | |
| Dark | 28.02±1.1 | 11.56±1.3 | > 100 |
| Light | 15.74±1.5 | 7.95±0.98 | > 100 |
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