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三氮唑并噻二唑类DOT1L抑制剂的结构修饰及活性

徐晓明 ,  郭思岐 ,  张静 ,  陈彦韬 ,  康亚青 ,  刘娜 ,  刘俊芳 ,  罗成 ,  陈示洁 ,  陈华

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引用本文: 徐晓明, 郭思岐, 张静, 陈彦韬, 康亚青, 刘娜, 刘俊芳, 罗成, 陈示洁, 陈华. 三氮唑并噻二唑类DOT1L抑制剂的结构修饰及活性[J]. 有机化学, 2020, 40(5): 1345-1354. doi: 10.6023/cjoc201911012 shu
Citation:  Xu Xiaoming, Guo Siqi, Zhang Jing, Chen Yantao, Kang Yaqing, Liu Na, Liu Junfang, Luo Cheng, Chen Shijie, Chen Hua. Structural Modifications of the Triazolo-thiadiazole Derivatives as DOT1L Inhibitors and Their Activities[J]. Chinese Journal of Organic Chemistry, 2020, 40(5): 1345-1354. doi: 10.6023/cjoc201911012 shu

三氮唑并噻二唑类DOT1L抑制剂的结构修饰及活性

  • a.

    河北大学化学与环境科学学院 河北省化学生物学重点实验室 河北保定 071002

  • b.

    中国科学院上海药物研究所 新药研究国家重点实验室 上海 201203

  • c.

    南昌大学药学院 南昌 330006

    • 通讯作者: 陈示洁, shijiechen@simm.ac.cn; 陈华, hua-todd@163.com
  • 基金项目:

    河北大学自然科学多学科交叉研究计划（No.DXK201903）资助项目

  • †共同第一作者(These authors contributed equally to this work)
摘要: 以DOT1L（Disruptor of telomeric silencing 1-like）抑制剂（8）为母体结构，对其核心骨架三氮唑并噻二唑两端的取代基进行结构修饰，设计合成了两个系列的三氮唑并噻二唑类结构衍生物，并测试了化合物在浓度为50 μmol/L时的DOT1L酶抑制活性.结果表明，所测化合物均表现出一定的酶抑制活性，其中N，N-二甲基-4-（6-甲基-[1, 2, 4]三唑并[3，4-b][1, 3, 4]噻二唑-3-基）苯胺（14b）和（R）-{1-{{3-[4-（二甲基氨基）苯基]-[1, 2, 4]三唑并[3，4-b][1, 3, 4]噻二唑-6-基叔丁基}甲基}哌啶-3-基}氨基甲酸叔丁酯（16a）具有显著的DOT1L抑制活性，IC50值分别为7.37和7.84 μmol/L，与阳性对照化合物8的酶抑制活性相当.构效分析表明，当苯基连三氮唑并噻二唑部分占据S-腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）结合位点时，R1为4-N，N-二甲基、分子尾部R2基团为疏水基团，适宜于分子与酶的结合，且其体积对活性影响较小.

English

  • DOT1L (Disruptor of telomeric silencing 1-like)是一类组蛋白赖氨酸甲基转移酶(HKMTs)[1].它以S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)为甲基供体, 特异性将甲基转移至位于核小体中的组蛋白H3赖氨酸79 (H3K79)上, 使其单、双和三甲基化, 并生成相应的酶促反应产物S-腺苷-L-高半光氨酸(SAH) (图 1)[2]. DOT1L的活性异常, 可以导致致癌因子HOXA9与MEIS1的高表达, 诱发混合谱系白血病(Mixed Lineage Leukemia, MLL), 被认为是导致MLL白血病发生的催化驱动因子[3, 4].因此, 通过靶向DOT1L, 抑制其催化域或干扰它与融合蛋白的结合, 有望实现混合谱系白血病MLL的治疗[5~7].

    图 1

    图 1.  SAM、SAH以及DOT1L抑制剂结构
    Figure 1.  Structures of SAM, SAH, and known DOT1L inhibitors
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    现有的DOT1L抑制剂按其结构可分为两大类, 一类是核苷类DOT1L抑制剂[8~15], 如化合物1~4(图 1), 其结构是基于SAM和SAH结构设计的; 另一类则是非核苷类DOT1L抑制剂[16~24], 如化合物5~8(图 1), 多通过高通量筛选获得, 化合物6是目前报道活性最好的DOT1L抑制剂, 其Ki (DOT1L SPA)为0.002 nmol/L[19].化合物8[23]是中国科学院上海药物研究所最近报道的三氮唑并噻二唑类DOT1L抑制剂.分子模拟结果表明, 化合物8中的三氮唑并噻二唑部分可以有效占据SAM的结合位点, 且呋喃环与酶活性中心的酪氨酸残基Y136有Pi-Pi (π-π)作用, 从而表现出良好的DOT1L抑制活性.此外, 构效分系表明, 当苯环上含吸电子取代基时, 该类化合物酶抑制活性降低[23].基于以上前期研究信息, 为进一步完善构效、寻找发现高效的DOT1L抑制剂, 对三氮唑并噻二唑类结构进行优化修饰(图 2), 设计合成了系列新衍生物, 并测试了化合物的DOT1L酶抑制活性.

    图 2

    图 2.  三氮唑并噻二唑类结构修饰
    Figure 2.  Structural modification of the triazolothiadiazole derivatives
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    1.   结果与讨论

    1.1   三氮唑并噻二唑类结构衍生物12、14、16和17的合成

    设计了两类三氮唑并噻二唑类衍生物, 其结构模型如图 2所示.其中Model A结构与化合物8相似, 重点探讨不同的芳环及取代基对化合物抑酶活性的影响; Model B类结构保留了占据SAM结合位点的苯基连三氮唑并噻二唑部分, 用于探讨尾部R2基团为其它疏水基团时对化合物活性的影响.化合物的合成按常规方法进行, 简述如下:以含不同取代的苯甲酸9为起始原料, 经酯化、肼解、二硫化碳(CS2)成盐及水合肼关环四步反应, 得到化合物4-氨基-5-巯基-1, 2, 4-三唑衍生物10[25].在三氯氧磷条件下, 化合物10与芳基丙烯酸11脱水环合, 得到结构如Model A (图 2)所示的目标化合物12a~12l (Scheme 1).

    图式 1

    图式 1.  化合物12a~12l的合成
    Scheme 1.  Synthesis of compounds 12a~12l
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    相同条件下, 化合物10与脂肪烷基酸13缩合得到结构如Model B(图 2)所示的目标化合物14a~14o (Scheme 2).进一步, 分别以含苄氯结构的化合物14a、14f和14k为原料, 与叔丁氧羰基(Boc)保护的3-氨基哌啶(15)发生取代反应, 得到化合物16a~16c, 酸性条件下, 脱除Boc基团化合物17a~17c (Scheme 3).

    图式 2

    图式 2.  化合物14a~14o的合成
    Scheme 2.  Synthesis of compounds 14a~14o
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    图式 3

    图式 3.  化合物16a~16c和17a~17c的合成
    Scheme 3.  Synthesis of compounds 16a~16c and 17a~17c
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    1.2   化合物12、14、16和17的DOT1L抑制活性

    对所合成的化合物12a~12l、14a~14o、16a~16c和17a~17c进行了DOT1L酶抑制活性测试[24], 化合物8为阳性对照. 50 μmol/L浓度时抑制率75%以上的化合物, 进一步测试了其IC50值, 结果见表 1~3.由表 1可知, 结构如Model A所示化合物12a~12l中, R1为间甲氧基的化合物12g~12i普遍表现为中等的酶抑制活性, 在测试浓度为50 μmol/L时, 对DOT1L的抑制率在70%以上.抑制活性最好的是R1为2-甲基、芳基为苯基的化合物12j, 其半数抑制浓度(IC50)值为12.88 μmol/L, 但仍低于阳性对照化合物8的酶抑制活性(IC50＝7.25 μmol/L).其它化合物12a~12f、12k和12l的抑酶活性较弱.

    表 1

    表 1  化合物12a~12l的DOT1L抑制活性a
    Table 1.  DOT1L inhibitory activities of compounds 12a~12l
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    Compd. R1 Aryl Inhibition
    rate/%    		 IC50/(μmol·L－1)
    12a H Ph 19.03 —
    12b H 2-Thienyl 3.46 —
    12c H p-ClC6H4 58.18 —
    12d p-N(CH3)2 Ph 10.71 —
    12e p-N(CH3)2 2-Thienyl 22.91 —
    12f p-N(CH3)2 p-ClC6H4 29.64 —
    8 H Furyl 86.71 7.25
    12g m-OCH3 Ph 74.31 —
    12h m-OCH3 2-Thienyl 79.34 32.25
    12i m-OCH3 p-ClC6H4 77.06 ＞50
    12j o-CH3 Ph 100.48 12.88
    12k o-CH3 2-Thienyl 49.03 —
    12l o-CH3 p-ClC6H4 12.07 —
    a The tested concentration is 50 μmol/L, “—”: Not determined.

    表 2

    表 2  化合物14a~14o的DOT1L抑制活性a
    Table 2.  DOT1L inhibitory activities of compounds 14a~14o
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    Compd. R1 R2 Inhibition
    rate/%    		 IC50/(μmol·L－1)
    14a p-N(CH3)2 Cl 40.25 —
    14b p-N(CH3)2 H 83.14 7.37
    14c p-N(CH3)2 CH3 67.87 —
    14d p-N(CH3)2 CH2CH3 53.25 —
    14e p-N(CH3)2 CH2(CH2)2CH3 79.62 11.74
    14f m-OCH3 Cl 85.50 32.50
    14g m-OCH3 H 69.47 —
    14h m-OCH3 CH3 49.47 —
    14i m-OCH3 CH2CH3 52.67 —
    14j m-OCH3 CH2(CH2)2CH3 21.48 —
    14k o-CH3 Cl 22.28 —
    14l o-CH3 H 39.67 —
    14m o-CH3 CH3 47.99 —
    14n o-CH3 CH2CH3 59.66 —
    14o o-CH3 CH2(CH2)2CH3 33.97 —
    a The tested concentration is 50 μmol/L, “—”: Not determined.

    表 3

    表 3  化合物16a~16c和17a~17c的DOT1L抑制活性a
    Table 3.  DOT1L inhibitory activities of compounds 16a~16c and 17a~17c
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    Compd. R2 R1 Inhibition
    rate/%    		 IC50/(μmol•L－1)
    16a p-N(CH3)2 88.90 7.84
    16b m-OCH3 18.37 —
    16c o-CH3 27.32 —
    17a p-N(CH3)2 53.79 —
    17b m-OCH3 4.24 —
    17c o-CH3 5.04 —
    a The tested concentration is 50 μmol/L, “—”: Not determined.

    表 2是结构如Model B所示化合物14a~14o的活性测试结果.其中, DOT1L抑制活性最高的两个化合物均是R1为4-N, N-二甲基、R2分别为甲基和正丁基的化合物14b和14e, IC50值分别为7.37和11.74 μmol/L, 且14b与阳性对照化合物8的活性相当, 表现出显著的DOT1L抑制活性. R1为3-甲氧基、R2为氯原子的化合物14f, 50 μmol/L时对DOT1L的抑制率为85%、IC50值为32.50 μmol/L, 活性中等.该系列其它化合物活性中等偏弱.构效分析表明当苯基连三氮唑并噻二唑部分占据SAM结合位点时, 以简单的烷基(Model B)代替芳基乙烯基(Model A), 可以得到高活性的DOT1L抑制剂(14b), 即分子尾部R2为疏水基团适宜于分子与酶的结合, 但受到R1基团(电性及位置)的影响; 而疏水基链R2的长短对活性影响不大.

    表 3是结构如Model B所示, R2为Boc保护的3-氨基哌啶及其脱保护的化合物16a~16c和17a~17c的活性测试结果.其中, DOT1L抑制活性最高的化合物是R1为4-N, N-二甲基、R2分别为Boc保护的3-氨基哌啶的化合物16a的IC50值为7.84 μmol/L, 与阳性对照化合物8的活性相当, 具有显著的酶抑制活性.其它化合物活性较弱.初步的构效分析提示, R1基团相同时, R2疏水基团上适度引入亲水性原子, 如哌啶环上的氮原子, 对化合物的酶抑制活性影响不大, 如16a、17a与14a~14e比较.

    1.3   化合物12j、14b、14e、16a和DOT1L的结合模式分析

    为进一步阐明化合物12j、14b、14e、16a和DOT1L的可能结合模式, 测试了化合物与DOT1L (PDB ID: 3QOW)的分子对接[26~28], 结果见图 3.

    图 3

    图 3.  活性化合物可能的结合模式
    Figure 3.  Putative binding poses of the active compounds

    (A) Compounds 12j, 14b, 14e and 16a were aligned with SAM (salmon) in the SAM binding pocket of DOT1L (3QOW), (B) 12j, (C) 14b. (D) 14e, (E) 16a

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    如图 3A, 化合物12j、14b、14e和16a均能较好地占据DOT1L的SAM结合口袋.其中, 12j和14b的结构在口袋中的延伸方向与SAM的相同.化合物12j结构中的苯/杂环与F233、F245以及P133的侧链之间, 可能存在π-π相互作用及疏水相互作用.化合物14b结构中的苯/杂环能与DOT1L的F223侧链苯环形成Pi-Pi相互作用, 同时14b与F223之间能形成极性相互作用.极性相互作用较Pi-Pi相互作用强, 这与实验测得的14b活性优于12j的结果一致. 14e和16a在口袋中的延伸方向与SAM的延伸方向不同, 其R2基团伸入DOT1L的底物结合口袋.与14b和12j类似, 14e和16a均可能与F223和F245等的侧链形成π-π相互作用. 16a与V135之间还能形成氢键相互作用.从16a、14e与DOT1L可能的结合模式可得出16a的活性较14e的强, 这也同我们的实验结果一致.由此可见, 我们通过对接得到的结合模式是合理的, 能够为构效关系分析提供比较直观的依据.

    2.   结论

    设计合成了两个系列Models A和B的三氮唑并噻二唑类结构衍生物12a~12l、14a~14o、16a~16c和17a~17c, 并测试了化合物的DOT1L酶抑制活性.部分化合物表现出显著的DOT1L抑制活性, 如Model B系列的化合物14b和16a, 其IC50值分别为7.37和7.84 μmol/L, 与阳性对照化合物8的酶抑制活性相当. Model A系列的化合物活性最高的为12j, IC50值为12.88 μmol/L.构效分析表明, 当苯基连三氮唑并噻二唑部分占据SAM结合位点时, R1为4-N, N-二甲基、分子尾部R2为疏水基团时, 可能更适于分子与酶的结合, 且体积影响较小, 这为进一步的高效DOT1L抑制剂的设计提供思路.

    3.   实验部分

    3.1   仪器与试剂

    熔点由SGW® X-4显微熔点仪(温度计未校正)测定; 核磁共振谱用BRUKER AC-P600 (600 MHz)型核磁共振仪、Brucker advance Ⅱ 400 FT-NMR型核磁共振仪, 内标为TMS; 质谱(ESI)用Agilent G6300离子阱液相质谱联用仪; 高分辨质谱(ESI)用FTICR-MS (Ionspec 7.0T)型质谱仪测定; 层析用硅胶(200~300目)为青岛海洋化工厂产品.本文所用其他试剂均为分析纯, 无水试剂均按常规方法处理, 水为二次蒸馏水.

    3.2   实验方法

    3.2.1   化合物12a~12l和14a~14o的合成

    化合物10[25] (3.8 g, 20 mmol)和60 mL三氯氧磷置于250 mL圆底烧瓶中, 加入1.2 equiv苯丙烯酸11升温至100 ℃反应10 h.待薄层色谱(TCL)检测反应完全, 加50 mL水淬灭三氯氧磷, 然后用40%氢氧化钠溶液中和溶液至中性, 析出棕黄色固体, 减压抽滤.滤饼用水(10 mL×2)洗涤, 然后柱层析分离(乙酸乙酯/二氯甲烷, V:V＝1:10), 得到化合物13a.

    按相同的方法, 分别以不同的芳基丙烯酸11和脂肪酸13为原料, 得到了相应的产物12b~12l和14a~14o.

    苯基-6-苯乙烯基-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]噻二唑(12a):白色固体, 产率54.9%. m.p. 185.4~186.7 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 8.31 (d, J＝7.2 Hz, 2H), 7.54~7.52 (m, 2H), 7.49 (t, J＝6.6 Hz, 2H), 7.45 (t, J＝7.2 Hz, 1H), 7.39 (d, J＝6.0 Hz, 3H), 7.30 (d, J＝16.2 Hz, 1H), 7.22 (d, J＝16.2 Hz, 1H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 165.8, 153.3, 146.6, 140.9, 134.0, 130.7, 130.3, 129.2, 128.9, 127.7, 126.3, 125.7, 117.9; HR-ESI-MS calcd for C17H12N4SNa ([M+Na]+) 327.0680, found 327.0683.

    3-苯基-6-[2-(噻吩-2-基)乙烯基]-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]噻二唑(12b):白色固体, 产率61.8%. m.p. 191.0~192.3 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 8.32 (d, J＝7.2 Hz, 2H), 7.51 (t, J＝7.2 Hz, 2H), 7.48~7.41 (m, 3H), 7.28 (d, J＝3.6 Hz, 1H), 7.07 (t, J＝4.8 Hz, 1H), 7.03 (d, J＝16.2 Hz, 1H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 165.3, 153.3, 146.6, 139.2, 133.3, 130.9, 130.3, 129.1, 128.9, 126.4, 125.7, 116.6; HR-ESI-MS calcd for C15H10-N4S2Na ([M+Na]+) 333.0244, found 333.0248.

    6-(4-氯苯乙烯基)-3-苯基-[1,2,4]三唑并[3, 4-b]-[1,3,4]噻二唑(12c):白色固体, 产率62.3%. m.p. 230.8~231.9 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 8.34 (d, J＝7.2 Hz, 2H), 7.54~7.48 (m, 5H), 7.41 (d, J＝7.8 Hz, 2H), 7.30 (d, J＝16.8 Hz, 1H), 7.25 (d, J＝16.2 Hz, 1H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 165.5, 153.3, 146.7, 139.4, 136.7, 132.5, 130.4, 129.5, 128.9, 128.9, 126.4, 125.6, 118.6; HR-ESI-MS calcd for C17H11ClN4SNa ([M+Na]+) 361.0291, found 361.0286.

    N, N-二甲基-4-(6-苯乙烯基-[1,2,4]三唑并[3, 4-b]-[1,3,4]噻二唑-3-基)苯胺(12d):白色固体, 产率64.5%. m.p. 150.4~152.2 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.97 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 7.58~7.55 (m, 3H), 7.42 (t, J＝7.2 Hz, 2H), 7.38 (t, J＝7.2 Hz, 1H), 7.09 (d, J＝16.2 Hz, 1H), 6.76 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 3.07 (s, 6H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 164.8, 163.3, 152.4, 137.7, 135.1, 129.65, 129.0, 128.4, 127.4, 111.6, 110.5, 40.1; HR-ESI-MS calcd for C19H17N5SNa ([M+Na]+) 370.1102, found 370.1107.

    N, N-二甲基-4-{6-[2-(噻吩-2-基)乙烯基]-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]噻二唑-3-基}苯胺(12e), 白色固体, 产率69.1%. m.p. 183.3~184.7 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.94 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 7.66 (d, J＝16.2 Hz, 1H), 7.36 (d, J＝4.8Hz, 1H), 7.25 (d, J＝5.4Hz, 1H), 7.07 (dd, J＝4.8, 3.6 Hz, 1H), 6.88 (d, J＝16.2 Hz, 1H), 6.75 (d, J＝9.0 Hz), 3.06 (s, 6H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 164.7, 163.0, 152.4, 140.4, 130.3, 129.2, 128.4, 128.1, 127.5, 111.6, 110.9, 109.4, 40.1; HR-ESI-MS calcd for C17H15N5S2Na ([M+Na]+) 376.0666, found 376.0662.

    4-[6-(4-氯苯乙烯基)-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]-噻二唑-3-基]-N, N-二甲基苯胺(12f):白色固体, 产率68.7%. m.p. 208.7~209.8 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 8.19 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 7.50 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.41 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.24 (d, J＝3.6 Hz, 2H), 6.79 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 3.04 (s, 6H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 164.7 151.5, 147.3, 138.8, 136.4, 132.7, 129.4, 128.8, 127.6, 118.8, 113.0, 111.7, 40.1; HR-ESI-MS calcd for C19H16ClN5SNa ([M+Na]+) 404.0712, found 404.0715.

    3-(3-甲氧基苯基)-6-苯乙烯基-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]噻二唑(12g):白色固体, 产率52.5%. m.p. 187.2~188.3 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3+CD3OD) δ: 7.91 (d, J＝7.8 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.52 (d, J＝6.0 Hz, 2H), 7.40~7.38 (m, 4H), 7.27 (d, J＝16.2 Hz, 1H), 7.21 (d, J＝16.8 Hz, 3H), 6.98 (dd, J＝1.8, 7.8 Hz, 1H), 3.85(s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 135.8, 159.9, 153.4, 146.5, 140.9, 140.0, 134.0, 130.7, 130.0, 127.7, 126.8, 118.7, 118.0, 116.6, 111.2, 55.5; HR-ESI-MS calcd for C18H14N4OSNa ([M+Na]+) 357.0786, found 357.0791.

    (3-甲氧基苯基)-6-[2-(噻吩-2-基)乙烯基]-[1,2,4]-三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]噻二唑(12h):白色固体, 产率56.3%. m.p. 180.2~182.3 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.91 (d, J＝7.2 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.44~7.38 (m, 3H), 7.26 (d, J＝3.0 Hz, 1H), 7.05~6.95 (m, 3H), 3.86 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 165.3, 159.8, 153.3, 146.3, 139.2, 133.2, 130.9, 129.9, 129.1, 128.4, 126.7, 118.6, 116.5, 116.5, 111.2, 55.4; HR-ESI-MS calcd for C16H12N4OS2Na ([M+Na]+) 363.0350, found 363.0354.

    (4-氯苯乙烯基)-3-(3-甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]噻二唑(12i):淡黄色固体, 产率56.8%. m.p. 182.0~183.2 ℃; 1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 7.81 (d, J＝7.8 Hz, 3H), 7.75 (s, 1H), 7.64 (dd, J＝16.2 Hz, J＝7.2 Hz, 2H), 7.51~7.48 (m, 3H), 7.11 (d, J＝7.2 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 166.4, 159.5, 1534, 145.2, 139.6, 134.9, 133.3, 130.3, 129.8, 129.0, 126.6, 119.0, 118.0, 115.7, 112.3, 55.3; HR-ESI-MS calcd for C18H13ClN4OSNa ([M+Na]+) 391.0396, found 391.0395.

    苯乙烯基-3-(邻甲苯基)-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]-噻二唑(12j):浅黄色固体, 产率53.9%. m.p. 124.2~125.8 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.86 (d, J＝7.2 Hz, 1H), 7.55~7.54 (m, 2H), 7.42~7.40 (m, 4H), 7.38~7.32 (m, 3H), 7.22 (d, J＝16.2 Hz, 1H), 2.59 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 165.7, 152.8, 147.3, 140.8, 138.2, 134.0, 131.3, 130.6, 130.3, 129.5, 129.2, 127.7, 125.9, 124.8, 118.1, 21.1; HR-ESI-MS calcd for C18H14N4SNa ([M+Na]+) 341.0837, found 341.0834.

    6-[2-(噻吩-2-基)乙烯基]-3-(邻甲苯基)-[1,2,4]-三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]噻二唑(12k):深棕色固体, 产率44.7%. m.p. 167.8~168.3 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.84 (d, J＝7.2 Hz, 1H), 7.47 (d, J＝16.2 Hz, 1H), 7.43~7.34 (m, 4H), 7.29 (d, J＝3.6 Hz, 1H), 7.09~7.07 (m, 1H), 7.01 (d, J＝15.6 Hz, 1H), 2.58 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 165.1, 152.8, 147.3, 139.3, 138.2, 133.2, 131.3, 130.8, 130.3, 129.5, 129.0, 128.4, 125.9, 124.8, 116.7, 21.1; HR-ESI-MS calcd for C16H12N4S2Na ([M+Na]+) 347.0401, found 347.0396.

    6-(4-氯苯乙烯基)-3-(邻甲苯基)-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]噻二唑(12l):深棕色固体, 产率52.5%. m.p. 193.5~194.7 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.85 (d, J＝7.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.43~7.36 (m, 5H), 7.30 (d, J＝16.2 Hz, 1H), 7.21 (d, J＝16.2 Hz, 1H), 2.59 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 156.3, 152.7, 147.3, 139.2, 138.2, 136.6, 132.5, 131.3, 310.3, 129.5, 128.8, 125.9, 124.7, 118.6, 21.1; HR-ESI-MS calcd for C18H13ClN4SNa ([M+Na]+) 375.0447, found 375.0442.

    N, N-二甲基-4-(6-甲基-[1, 2, 4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]-噻二唑-3-基)苯胺(14b):白色固体, 产率67.6%. m.p. 189.8~192.5 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 8.13 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 6.75 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 3.00 (s, 6H), 2.70 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 163.9, 154.0, 151.5, 147.0, 127.5, 13.2, 112.0, 111.7, 40.1, 18.3; HR- ESI-MS calcd for C12H13N5SNa ([M+Na]+) 282.0789, found 282.0794.

    (6-乙基-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1,3,4]噻二唑-3-基)-N, N-二甲基苯胺(14c):白色固体, 产率68.8%. m.p. 91.2~92.3 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 8.10 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 6.71 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 2.98 (t, J＝9.0 Hz, 2H), 2.96 (s, 6H), 1.39 (t, J＝6.0 Hz, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 170.3, 153.6, 151.4, 146.9, 127.5, 113.1, 111.9, 111.7, 40.1, 26.1, 12.6; HR-ESI-MS calcd for C13H15N5SNa ([M+Na]+) 296.0946, found 296.0943.

    N, N-二甲基-4-(6-丙基-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]-噻二唑-3-基)苯胺(14d):浅黄色固体, 产率64.2%. m.p. 134.7~136.3 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 8.16 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 6.77 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 3.01 (s, 3H), 2.96 (t, J＝7.2 Hz, 2H), 1.86~1.82 (m, 2H), 1.06 (t, J＝7.2 Hz, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 169.0, 153.7, 151.5, 146.9, 127.5, 113.3, 111.8, 40.1, 34.3, 22.0, 13.5; HR-ESI-MS calcd for C14H17N5SNa ([M+Na]+) 310.1102, found 310.1105.

    N, N-二甲基-4-(6-戊基-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]-噻二唑-3-基)苯胺(14e):浅黄色固体, 产率61.8%. m.p. 88.3~89.8 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 8.17 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 6.79 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 3.08~2.97 (m, 8H), 1.87~1.82 (m, 2H), 1.40 (br s, 4H), 0.93 (t, J＝7.8 Hz, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 169.2, 153.7, 151.5, 156.0, 1276, 113.3, 111.8, 40.2, 32.4, 31.0, 28.2, 22.2, 13.8; HR-ESI-MS calcd for C16H21N5SNa ([M+Na]+) 338.1415, found 338.1416.

    (3-甲氧基苯基)-6-甲基-[1, 2, 4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]-噻二唑(14g):浅黄色固体, 产率61.4%. m.p. 168.9~170.2 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.81 (d, J＝7.8 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.32 (t, J＝8.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J＝7.8 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.67 (s, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 164.9, 159.7, 155.1, 146.0, 129.8, 126.7, 118.5, 116.4, 111.14, 55.3, 18.3; HR-ESI-MS calcd for C11H10N4OSNa ([M+Na]+) 269.0473, found 269.0477.

    6-乙基-3-(3-甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[3, 4-b]-[1,3,4]噻二唑(14h):白色固体, 产率62.8%. m.p. 101.8~102.3 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.80 (d, J＝7.2 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.30~7.26 (m, 1H), 6.88 (dd, J＝8.4, 2.4 Hz, 1H), 3.85 (d, J＝16.8 Hz, 3H), 2.96 (d, J＝7.2, 7.8 Hz, 2H), 1.36 (t, J＝7.8 Hz, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 171.2, 159.7, 154.6, 145.9, 129.8, 126.7, 118.4, 116.3, 110.9, 55.3, 26.0, 12.4; HR-ESI-MS calcd for C12H12N4OSNa ([M+Na]+) 283.0629, found 283.0632.

    3-(3-甲氧基苯基)-6-丙基-[1,2,4]三唑并[3, 4-b]-[1,3,4]噻二唑(14i):白色固体, 产率62.5%. m.p. 106.8~108.1 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.93 (d, J＝8.4 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.42 (t, J＝7.8 Hz, 1H), 7.02 (dd, J＝8.4, 6.0 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.01 (t, J＝7.8 Hz, 2H), 1.93~1.87 (m, 2H), 1.09 (t, J＝7.2 Hz); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 169.9, 159.9, 154.8, 146.2, 130.0, 126.9, 118.7, 116.6, 111.2, 55.5, 34.3, 22.0, 13.5; HR-ESI-MS calcd for C13H14N4OSNa ([M+Na]+) 297.0786, found 297.0783.

    3-(3-甲氧基苯基)-6-戊基-[1,2,4]三唑并[3, 4-b]-[1,3,4]噻二唑(14j):白色固体, 产率61.9%. m.p. 66.1~67.0 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.93 (d, J＝7.8 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.42 (t, J＝7.8 Hz, 2H), 7.02 (dd, J＝2.4, 8.4 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.03 (t, J＝7.8 Hz, 2H), 1.88~1.83 (m, 2H), 1.46~1.38 (m, 4H), 0.93 (t, J＝7.2 Hz, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 170.2, 159.9, 154.8, 146.2, 130.0, 126.9, 118.7, 116.6, 1111.2, 55.5, 32.5, 31.0, 28.2, 22.2, 13.8; HR-ESI-MS calcd for C15H18N4OSNa ([M+Na]+) 325.1099, found 325.1097.

    6-甲基-3-(邻甲苯基)-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]-噻二唑(14l):浅棕色固体, 产率59.3%. m.p. 134.3~135.1 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.80 (d, J＝7.6 Hz, 1H), 7.40 (t, J＝7.2 Hz, 1H), 7.36~7.31 (m, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.55 (s, H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 164.6, 154.5, 146.9, 138.1, 131.2, 130.2, 129.4, 125.9, 124.9, 21.0, 18.3; HR-ESI-MS calcd for C11H10N4SNa ([M+Na]+) 253.0524, found 253.0522.

    6-乙基-3-(邻甲苯基)-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]-噻二唑(14m):浅棕色固体, 产率60.8%. m.p. 116.4~117.5 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.78 (d, J＝7.2 Hz, 1H), 7.34 (t, J＝7.2 Hz, 1H), 7.29 (brs, 2H), 2.98 (d, J＝7.2, 7.8 Hz, 2H), 2.51 (s, 3H), 1.37 (t, J＝7.8 Hz, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 170.9, 154.1, 146.8, 138.0, 131.2, 130.1, 129.4, 125.8, 124.9, 26.1, 21.0, 12.7; HR-ESI-MS calcd for C12H12N4SNa ([M+Na]+) 267.0680, found 267.0678.

    6-丙基-3-(邻甲苯基)-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]-噻二唑(14n):浅黄色固体, 产率61.3%. m.p. 66.8~68.1 ℃; 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.82 (d, J＝7.2 Hz, 1H), 7.42 (t, J＝7.2 Hz, 1H), 7.36~7.32 (m, 2H), 2.96 (t, J＝7.8 Hz, 2H), 2.56 (s, 3H), 1.88~1.82 (m, 2H), 1.06 (t, J＝7.8 Hz, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 169.7, 154.2, 146.9, 138.1, 131.2, 130.2, 129.5, 125.9, 124.9, 34.3, 22.0, 21.1, 13.4; HR-ESI-MS calcd for C13H14N4SNa ([M+Na]+) 281.0837, found 281.0842.

    6-戊基-3-(邻甲苯基)-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]-噻二唑(14o):浅黄色油状, 产率61.2%. 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.82 (d, J＝7.8 Hz, 1H), 7.42 (t, J＝7.2 Hz, 1H), 7.38~7.33 (m, 2H), 2.99 (t, J＝7.8 Hz, 2H), 2.57 (s, 3H), 1.85~1.80 (m, 2H), 1.43~1.34 (m, 4H), 0.92 (t, J＝7.2 Hz, 3H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 170.2, 138.0, 131.2, 130.2, 129.5, 125.8, 124.8, 32.3, 30.9, 28.1, 22.1, 21.0, 13.8; HR-ESI-MS calcd for C15H18N4SNa ([M+Na]+) 309.1150, found 309.1145.

    3.2.2   化合物16a~16c和17a~17c的合成

    于50 mL圆底烧瓶中, 称取14a (0.3 g, 1.0 mmol)溶于15 mL四氢呋喃(THF)中, 加入DIPEA (661 µL, 4.0 equiv.)为缚酸剂, 以及R-3-(Boc氨基)哌啶15 (0.2 g, 1.2 equiv.), 升温至50 ℃反应36 h. TCL监测反应完全后, 旋蒸除去THF.残留物用10 mL乙酸乙酯溶解, 依次用0.1 mol/L盐酸(5 mL×3)和水(5 mL×3)洗.以无水硫酸钠干燥, 浓缩得残留物经硅胶色谱柱分离(乙酸乙酯/二氯甲烷, V:V＝1:6), 得到白色固体化合物16a.

    于25 mL圆底烧瓶中, 称取化合物16a (0.5 g, 1 mmol)溶于4 mL二氯甲烷, 加入2 mL三氟醋酸, 室温下搅拌. TCL监测反应完全后, 旋蒸除去二氯甲烷及三氟醋酸.经硅胶色谱柱分离(甲醇/二氯甲烷, V:V＝1:10), 得到化合物无色油状化合物17a.

    按相同的方法, 分别以14f和14k和R-3-(Boc氨基)哌啶15为起始原料, 经中间体化合物16b~16c, 脱Boc得到相应的产物16b~16c.

    (R)-{1-{{3-[4-(二甲基氨基)苯基]-[1, 2, 4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]噻二唑-6-基叔丁基}甲基}哌啶-3-基}氨基甲酸叔丁酯(16a):浅黄色油状, 产率75.6%. 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 8.12 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 6.76 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 3.84~3.77 (m, 3H), 3.01 (s, 6H), 2.81 (brs, 1H), 2.54 (brs, 1H), 2.46 (brs, 1H), 1.71 (d, J＝9.6 Hz, 2H), 1.61 (d, J＝8.4 Hz, 1H), 1.42 (s, 10H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 170.9, 155.1, 153.6, 151.5, 146.8, 127.5, 113.3, 111.8, 79.5, 58.9, 57.7, 53.9, 46.4, 40.1, 29.3, 28.4, 22.5; HR-ESI-MS calcd for C22H32N7O2S ([M+H]+) 458.2338, found 458.2335.

    (R)-1-{{3-[4-(二甲基氨基)苯基]-[1, 2, 4]三唑-并[3, 4-b][1, 3, 4]噻二唑-6-基}甲基}哌啶-3-胺(17a):浅黄色油状, 产率90.7%. 1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.95 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 6.79 (d, J＝7.8 Hz, 2H), 3.99 (s, 2H), 3.41 (brs, 1H), 3.06~3.07 (m, 1H), 2.99 (s, 6H), 2.72 (brs, 1H), 2.69~2.66 (m, 1H), 2.60 (brs, 1H), 1.98 (brs, 1H), 1.89 (brs, 1H), 1.68 (dd, J＝9.0, 2.4 Hz, 1H), 1.60 (d, J＝8.4 Hz, 1H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 174.3, 159.2, 155.7, 153.0, 147.6, 129.0, 115.1, 113.7, 57.9, 56.7, 54.3, 49.5, 40.9, 28.3, 23.3; HR-ESI-MS calcd for C17H24N7S ([M+H]+) 358.1834, found 358.1833.

    (R)-{1-{[3-(3-甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[3, 4-b]-[1,3,4]噻二唑-6-基]甲基}哌啶-3-基}氨基甲酸(16b):浅黄色油状, 产率72.9%. 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.88 (d, J＝7.8 Hz, 1H), 7.84 (d, J＝2.4 Hz, 1H), 7.40 (t, J＝7.8 Hz, 1H), 7.00 (dd, J＝8.4, 2.4 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.86~3.68 (m, 3H), 2.84 (d, J＝7.8 Hz, 1H), 2.57 (brs, 2H), 2.45 (brs, 1H), 1.74 (brs, 2H), 1.67~1.60 (m, 1H), 1.42 (s, 10H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 172.2, 159.9, 155.1, 154.7, 146.0, 129.9, 126.8, 118.7, 116.5, 111.2, 79.5, 59.0, 57.6, 55.5, 53.9, 46.4, 29.3, 28.4, 22.6; HR-ESI-MS calcd for C21H29N6O3S ([M+H]+) 445.2021, found 445.2019.

    (R)-1-{[3-(3-甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[3, 4-b]-[1,3,4]噻二唑-6-基]甲基}哌啶-3-胺(17b):浅黄色油状, 产率88.5%. 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.82 (d, J＝7.8 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.34 (t, J＝8.4 Hz, 1H), 6.94 (dd, J＝7.8, 1.8 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.78 (s, 2H), 2.90~2.87 (m, 1H), 2.83 (d, J＝10.8 Hz, 1H), 2.69~2.67 (m, 1H), 2.29 (t, J＝9.0 Hz, 1H), 2.12 (t, J＝7.8 Hz, 1H), 1.80~1.78 (m, 1H), 1.71~1.69 (m, 1H), 1.58~1.53 (m, 1H), 1.11~1.06 (m, 1H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 172.9, 159.8, 154.8, 145.9, 129.9, 126.8, 118.6, 116.4, 111.2; 62.6, 57.5, 55.4, 53.9, 47.7, 33.2, 23.4; HR-ESI-MS calcd for C16H21N6OS ([M+H]+) 345.1497, found 345.1502.

    (R)-{1-{[3-(邻甲苯基)-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]-噻二唑-6-基]甲基}哌啶-3-基}氨基甲酸(16c):浅黄色油状, 产率79.6%. 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 7.75 (d, J＝7.8 Hz, 1H), 7.34~7.26 (m, 3H), 3.78~3.71 (m, 3H), 2.78 (d, J＝6.6 Hz, 1H), 2.51~2.47 (m, 5H), 2.39 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 1.70 (s, 2H), 1.59 (s, 1H), 1.39 (s, 10H); 13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 172.0, 155.1, 154.1, 146.7, 138.0, 131.2, 130.1, 129.3, 125.8, 124.8, 79.4, 58.9, 57.5, 53.9, 46.5, 29.3, 28.4, 22.6, 21.1; HR-ESI-MS calcd for C21H29N6O2S ([M+H]+) 429.2072, found 429.2078.

    (R)-1-{[3-(邻甲苯基)-[1,2,4]三唑并[3, 4-b][1, 3, 4]-噻二唑-6-基]甲基}哌啶-3-胺(17c):浅黄色油状, 产率86.8%. 1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.72 (d, J＝7.8 Hz, 1H), 7.45 (t, J＝7.2 Hz, 1H), 7.40 (d, J＝7.8 Hz, 1H), 7.35~7.33 (m, 1H), 3.90~3.86 (m, 2H), 2.93 (d, J＝10.2 Hz, 1H), 2.89~2.86 (m, 1H), 2.78 (d, J＝10.2 Hz, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.36 (d, J＝6.6 Hz, 1H), 2.17 (brs, 1H), 1.86 (dd, J＝12.6, 3.6 Hz, 1H), 1.79~1.74 (m, 1H), 1.66~1.59 (m, 1H), 1.20 (d, J＝10.2 Hz, 1H); 13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 175.6, 156.1, 148.1, 139.2, 132.2, 131.8, 130.9, 127.1, 125.9, 62.3, 58.2, 54.9, 54.8, 33.3, 24.7, 20.9; HR-ESI-MS calcd for C16H21N6S ([M+H]+) 329.1548, found 329.1546.

    3.2.3   DOT1L抑制活性测试

    DOT1L酶抑制活性通过AlphaLISA酶活实验进行检测.实验缓冲溶液(50 mmol/L Tris-HCl, pH 8.0, 150 mmol/L NaCl, 3 mmol/L MgCl2, 0.1%牛血清白蛋白, BSA)稀释后的化合物12a~12l、14a~14o、16a~16c和17a~17c 50 μmol/L与纯化得到的DOT1L蛋白80 nmol/L先加入到384孔板(white opaque OptiPlate-384, PerkinElmer)中室温孵育10min.向反应体系中加入1 μmol/L SAM (AdoMet)和0.25 ng核小体(Reaction Biology), 室温孵育30 min.然后向反应体系中加入高盐缓冲溶液(50 mmol/L Tris-HCl, pH 7.4, 1 mol/L NaCl, 0.1% Tween20, 0.3% poly-L-lysine)室温孵育15 min终止酶活反应.向实验体系中加入组蛋白H3受体磁珠和H3K79me2抗体的混合物室温孵育1 h.最后向实验体系中加入链酶亲和素供体磁珠并室温孵育30 min, 通过PerkinElmer的酶标仪进行信号检测.

    用实验buffer梯度稀释化合物, 按相同的方法检测DOT1L酶抑制活性, 并通过GraphPad Prism5进行IC50曲线拟合.

    3.2.4   结合模式分析

    化合物12j、14b、14e和16a与DOT1L (PDB ID: 3QOW)的对接通过maestro (Maestro, version 10.4, Schrödinger, LLC, New York, NY, 2015.)完成.首先通过maestro相应模块对蛋白和小分子化合物进行处理与准备, 同时通过构象搜索为小分子化合物生成不同的构象.然后采用maestro中Glide模块的SP模式进行对接(Glide, Version 6.9. New York, NY: Schrödinger, LLC; 2015.)[27~29].对接结果用于结合模式的分析.

    辅助材料(Supporting Information)  化合物12a~12l、14a~14o、16a~16c和17a~17c的核磁共振氢谱和碳谱; 化合物12j、14b、14e、16a和DOT1L的2D结合模式.这些材料可以免费从本刊网站(http://sioc-journal.cn/)上下载.


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      Chao, C.; Zhu, H.; Stauffer, F.; Caravatti, G.; Vollmer, S.; Machauer, R.; Holzer, P.; Möbitz, H.; Scheufler, C.; Klumpp, M.; Tiedt, R.; Beyer, K. S.; Calkins, K.; Guthy, D.; Kiffe, M.; Zhang, J.; Gaul, C. ACS Med. Chem. Lett. 2016, 7, 735. doi: 10.1021/acsmedchemlett.6b00167

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      Chen, S. J.; Wang, Y. L.; Zhou, W.; Li, S. S.; Peng, J. L.; Shi, Z.; Hu, J. C.; Liu, Y. C.; Ding, H.; Lin, Y. Y.; Li, L. J.; Cheng, S. F.; Liu, J. Q.; Lu, T.; Jiang, H. L.; Liu, B.; Zheng, M. Y.; Luo, C. J. Med. Chem. 2014, 57, 9028. doi: 10.1021/jm501134e

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    27. [27]

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    28. [28]

      Halgren, T. A.; Murphy, R. B.; Friesner, R. A.; Beard, H. S.; Frye, L. L.; Thomas Pollard, W.; Banks, J. L. J. Med. Chem. 2004, 47, 1750. doi: 10.1021/jm030644s

  • 图 1  SAM、SAH以及DOT1L抑制剂结构

    Figure 1  Structures of SAM, SAH, and known DOT1L inhibitors

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    图 2  三氮唑并噻二唑类结构修饰

    Figure 2  Structural modification of the triazolothiadiazole derivatives

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    图式 1  化合物12a~12l的合成

    Scheme 1  Synthesis of compounds 12a~12l

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    图式 2  化合物14a~14o的合成

    Scheme 2  Synthesis of compounds 14a~14o

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    图式 3  化合物16a~16c和17a~17c的合成

    Scheme 3  Synthesis of compounds 16a~16c and 17a~17c

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    图 3  活性化合物可能的结合模式

    Figure 3  Putative binding poses of the active compounds

    (A) Compounds 12j, 14b, 14e and 16a were aligned with SAM (salmon) in the SAM binding pocket of DOT1L (3QOW), (B) 12j, (C) 14b. (D) 14e, (E) 16a

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    表 1  化合物12a~12l的DOT1L抑制活性a

    Table 1.  DOT1L inhibitory activities of compounds 12a~12l

    Compd. R1 Aryl Inhibition
    rate/%    		 IC50/(μmol·L－1)
    12a H Ph 19.03 —
    12b H 2-Thienyl 3.46 —
    12c H p-ClC6H4 58.18 —
    12d p-N(CH3)2 Ph 10.71 —
    12e p-N(CH3)2 2-Thienyl 22.91 —
    12f p-N(CH3)2 p-ClC6H4 29.64 —
    8 H Furyl 86.71 7.25
    12g m-OCH3 Ph 74.31 —
    12h m-OCH3 2-Thienyl 79.34 32.25
    12i m-OCH3 p-ClC6H4 77.06 ＞50
    12j o-CH3 Ph 100.48 12.88
    12k o-CH3 2-Thienyl 49.03 —
    12l o-CH3 p-ClC6H4 12.07 —
    a The tested concentration is 50 μmol/L, “—”: Not determined.
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    表 2  化合物14a~14o的DOT1L抑制活性a

    Table 2.  DOT1L inhibitory activities of compounds 14a~14o

    Compd. R1 R2 Inhibition
    rate/%    		 IC50/(μmol·L－1)
    14a p-N(CH3)2 Cl 40.25 —
    14b p-N(CH3)2 H 83.14 7.37
    14c p-N(CH3)2 CH3 67.87 —
    14d p-N(CH3)2 CH2CH3 53.25 —
    14e p-N(CH3)2 CH2(CH2)2CH3 79.62 11.74
    14f m-OCH3 Cl 85.50 32.50
    14g m-OCH3 H 69.47 —
    14h m-OCH3 CH3 49.47 —
    14i m-OCH3 CH2CH3 52.67 —
    14j m-OCH3 CH2(CH2)2CH3 21.48 —
    14k o-CH3 Cl 22.28 —
    14l o-CH3 H 39.67 —
    14m o-CH3 CH3 47.99 —
    14n o-CH3 CH2CH3 59.66 —
    14o o-CH3 CH2(CH2)2CH3 33.97 —
    a The tested concentration is 50 μmol/L, “—”: Not determined.
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    表 3  化合物16a~16c和17a~17c的DOT1L抑制活性a

    Table 3.  DOT1L inhibitory activities of compounds 16a~16c and 17a~17c

    Compd. R2 R1 Inhibition
    rate/%    		 IC50/(μmol•L－1)
    16a p-N(CH3)2 88.90 7.84
    16b m-OCH3 18.37 —
    16c o-CH3 27.32 —
    17a p-N(CH3)2 53.79 —
    17b m-OCH3 4.24 —
    17c o-CH3 5.04 —
    a The tested concentration is 50 μmol/L, “—”: Not determined.
    下载: 导出CSV
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  • 发布日期:  2020-05-25
  • 收稿日期:  2019-11-07
  • 修回日期:  2019-12-25
  • 网络出版日期:  2020-01-15
通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com
  • 1. 

    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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