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• 糖尿病是一种以高血糖症为特征的慢性代谢性疾病, 可能导致心血管疾病、肾衰竭、神经病变、失明和中风等多种并发症^{[1, 2]}.根据国际糖尿病联合会2017年的统计, 大约有4.25亿人患有因胰岛素分泌缺乏或胰岛素抵抗引起的Ⅱ型糖尿病^[3], 且患病人数还在不断增加, 糖尿病已成为全球公共卫生威胁.目前Ⅱ型糖尿病的治疗药物一般包括磺脲类、二甲双胍类、噻唑烷二酮类(thiazolidinediones, TZD)、α-葡萄糖苷酶抑制剂、DPP-4抑制剂、胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)抑制剂和钠-葡萄糖协同转运蛋白2 (SGLT-2)抑制剂等^{[4, 5]}.虽然这些临床药物能有效地降低患者的空腹血糖浓度, 但由于其副作用, 如肥胖、心血管疾病、心律失常、胃肠不耐受、心肌梗死及给药方式(如注射)等限制了其临床使用^[6~13], 因此仍然迫切需要开发新型抗糖尿病药物^[14].

  多肽药物多数由人体必需的氨基酸组成, 具有毒性小、安全性高等独特优点.抗菌肽、抗肿瘤多肽、多肽疫苗等多肽药物目前已被广泛应用.在慢性病治疗领域, 比如自身免疫性疾病、高血压、糖尿病、骨质疏松等, 多肽药物的优势日益明显^[14], 已成为创新药物研发的热点之一^[15]. GLP-1受体激动剂艾塞那肽(exenatide)、利司那肽(lixisenatide)和利拉鲁肽(liraglutide)都是多肽分子, 已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于Ⅱ型糖尿病的治疗.研究发现, 多肽类分子A具有较好的蛋白酪氨酸磷酸酶1B (PTP-1B)抑制作用(IC₅₀为2.9 μmol·L^－1), 显示出一定的抗糖尿病活性^[16]; 以肉桂醛为母体的三肽衍生物B^[17]和二肽衍生物C^[18]具有显著的抗糖尿病活性(图 1).由此可见, 研发新型多肽类抗糖尿病药物具有重要的发展前景.

  图 1

  

  图 1.  具有抗糖尿病活性的多肽分子举例

  Figure 1.  Examples of polypeptide molecules with anti-diabetic activity

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  尿嘧啶是生物体的五种必需天然碱基之一, 在生物体中有着重要的作用. 5-氟尿嘧啶是一种有效的抗代谢抗肿瘤药; 尿嘧啶是普洱茶降糖降脂活性成分中的重要辅助成分之一^[19]; 含有尿嘧啶结构单元的DPP-4抑制剂SYR-322 (Alogliptin)是获得FDA批准的第4个DPP-4抑制剂, 是高选择性和强靶向特异性的口服降糖药物^[20]; 含有尿嘧啶结构单元的化合物D也具有较强的DPP-4抑制活性(图 2)^[21].这些表明, 尿嘧啶结构单元可能是抗糖尿病活性分子的重要结构单元.受此启发, 我们尝试将尿嘧啶结构单元引入新的目标分子之中, 希望获取新型的抗糖尿病活性分子.

  图 2

  

  图 2.  含有尿嘧啶结构单元的抗糖尿病分子

  Figure 2.  Anti-diabetes molecules containing uracil unit

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  在将尿嘧啶引入肽核酸时, 余孝其等^[22]采用半胱氨酸侧链的巯基与羟甲基化的尿嘧啶连接形成肽核酸单体的策略, 合成了许多肽核酸分子.作者^[23~25]借鉴该合成思路并通过改进, 高收率地合成了含有尿嘧啶结构单元的肽核酸单体; 将该单体引入多肽分子中, 设计并合成了含有尿嘧啶碱基的多肽衍生物.作为研究的探索阶段, 作者设计了尿嘧啶碱基修饰的二肽衍生物TM (Scheme 1), 希望从中获得具有抗糖尿病活性的先导分子, 为后续研究提供新的思路.

  图式 1

  

  图式 1.  目标化合物的合成

  Scheme 1.  Synthesis of target compounds

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  1.   结果与讨论

  1.1   化合物的合成

  采用改进的合成方法, 以尿嘧啶和多聚甲醛为原料, 在强碱中分段(不同温度)反应, 能以很高收率得到5-羟甲基尿嘧啶(5-HmU); 5-HmU与半胱氨酸侧链巯基连接, 得到关键中间体S-胸腺嘧啶-L-半胱氨酸(IM-2)^[23~25]; IM-2经氨基保护获得中间体IM-3^{[26, 27]}; 采用二氯亚砜和甲醇法^{[23, 28~31]}, 一步反应将IM-3的羧基甲酯化和氨基脱Boc, 得到肽核酸单体IM-4^[23]; IM-4与Fmoc保护的氨基酸偶联^{[26, 27, 32]}, 即得到目标分子TM.本研究合成了16个目标分子(表 1), 结构均经过¹H NMR, ¹³C NMR和HRMS确认.

  表 1

  

  表 1  目标分子TM的制备

  Table 1.  Synthesis of the target molecules TM

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  Compd.	Fmoc-AA-OH	Coupling reagent	Ratioa	Scale/mmol	Time/h	Temp./℃	Weight/g	Yield/%
  TM-a	Fmoc-Ala-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	7	26	0.952	86
  TM-b	Fmoc-Phe-OH	DIC	1:1:1.2	2	22	17	0.846	69
  TM-c	Fmoc-Val-OH	DIC	1:1:1.2	1	18	20	0.227	39
  TM-d	Fmoc-Leu-OH	DIC	1:1:1.2	1	17	24	0.351	59
  TM-e	Fmoc-Ile-OH	DIC	1:1:1.2	1	6	23	0.550	46
  TM-f	Fmoc-Thr(tBu)-OH	DIC	1:1:1.2	2	6	26	0.945	74
  TM-g	Fmoc-Asp(OtBu)-OH	DCC	1:1:1.2	2	4.5	25	0.582	43
  TM-h	Fmoc-Lys(Boc)-OH	DCC	1.05:1:1.2	2	6.5	27	0.871	61
  TM-i	Fmoc-Met-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	6.5	27	0.626	51
  TM-j	Fmoc-Pro-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	5.5	24	0.883	76
  TM-k	Fmoc-Tyr(tBu)-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	7	21	0.880	64
  TM-l	Fmoc-Glu(OtBu)-OH	DIC	1:1:1.2	3	8.5	17	0.915	54
  TM-m	Fmoc-Asn(Trt)-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	5	19	1.013	60
  TM-n	Fmoc-His(Trt)-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	6	20	0.776	45
  TM-o	Fmoc-Gly-OH	DIC	1:1:1.2	1	17	24	0.429	79
  TM-p	Fmoc-Gln(Trt)-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	6	18	0.696	41
  a Ratio表示IM-4/Fmoc-AA-OH/Coupling reagent的物质的量之比.

  实验发现, 中间体IM-2在反应液中有一定溶解度.为了得到尽可能多的产品, 需要对滤液多次浓缩; 浓缩之前一定要先中和一部分酸, 以避免浓缩后酸性太强而导致氨基酸的消旋和其它不必要的副反应, 同时尽量避免产品包裹无机盐.

  目标分子TM的合成采用液相多肽合成中的DCC/ HOBt或DIC/HOBt偶联法^{[26, 27, 32]}.实验表明, 反应时间和碱对反应有较大影响.首先, 反应体系中需加入有机碱以促进偶联反应的进行, 但氨基酸在强碱性环境中易消旋, 因此选用能接受游离质子(有碱性)但不夺取α-质子(空间体积大)的有机碱N, N-二异丙基乙胺(DIPEA), 可较好避免手性氨基酸消旋.其次, Fmoc-AA-OH长时间处于强碱性环境中易脱除Fmoc基团, 因此要尽量弱化反应条件. 表 1数据显示, 某些分子, 如TM-c, TM-g和TM-p, 反应时间都长但是收率却低于43%, 很可能和副反应的发生相关.最后, 氨基酸的侧链取代基对反应收率也有一定的影响.如氨基酸侧链的体积较大或者保护基(如Trt, Boc)体积很大, 目标产物的收率低于46%(如TM-c, TM-e, TM-g, TM-n和TM-p), 反之对应目标化合物的收率较高, 其中结构最简单的化合物TM-a收率最高(86%).

  1.2   生物活性

  在成都地奥制药集团新药研究中心对本研究合成的16个化合物进行生物活性测定, 测试结果见表 2, 其中过氧化物酶体增殖物激活受体反应元件(PPRE)激动活性、α-葡萄糖苷酶-rat抑制活性、DPP-4抑制活性测试中采用的阳性参照物分别为上市药物Pioglitazone, Voglibose以及KR-62436.绝大多数目标分子的PPRE激动活性很弱, 只有化合物TM-e(含有Val结构单元的分子)的PPRE相对激动活性达到40.69% (Pioglitazone的PPRE激动活性为100%).构效分析发现, 氨基酸侧链取代基R中含有苯环结构的分子活性都很差, 侧链取代基中含有空间体积很大的保护基团(Trt)的化合物(TM-m, TM-n, TM-p), 其PPRE相对激动活性均为负值.因此, 减小氨基酸侧链保护基体积、脱出侧链保护基, 或者改变Fmoc基团为其他结构单元, 都是在后续研究中值得尝试的分子设计策略.

  表 2

  

  表 2  目标化合物的PPRE相对激动活性、α-葡萄糖苷酶-rat抑制活性及DPP-4抑制活性

  Table 2.  PPRE relative activation, α-glucosidase inhibition and DPP-4 inhibition of target molecules

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  Entry	AA	Conc./(µg·mL－1)	cLogP	tPSA	PPRE relative activation/%	α-Glucosidase inhibition/%	DPP-4 inhibition/%
  TM-a	Ala	10.00	1.76	151.93	－1.87	28.86	－9.98
  TM-b	Phe	10.00	3.42	151.93	5.51	28.41	－4.19
  TM-c	Val	10.00	2.65	151.93	27.08	17.91	－7.39
  TM-d	Leu	10.00	3.02	151.93	13.72	－15.66	0.00
  TM-e	Ile	10.00	3.10	151.93	40.69	－14.19	14.42
  TM-f	Thr(tBu)	10.00	2.83	161.16	10.86	2.176	－1.41
  TM-g	Asp(OtBu)	10.00	2.32	178.23	9.75	15.68	－11.71
  TM-h	Lys(Boc)	10.00	1.45	181.03	－3.72	20.20	－16.50
  TM-i	Met	10.00	2.42	151.93	14.96	－9.91	6.23
  TM-j	Pro	10.00	2.04	143.14	－2.79	－7.31	10.55
  TM-k	Tyr(tBu)	10.00	4.32	161.16	1.32	－7.53	10.36
  TM-l	Glu(OtBu)	10.00	2.61	178.23	3.00	－6.23	6.59
  TM-m	Asn(Trt)	10.00	5.70	181.03	－9.62	－2.78	4.69
  TM-n	His(Trt)	10.00	6.37	169.75	－10.21	－3.59	0.87
  TM-o	Gly	10.00	1.20	151.93	3.92	－2.34	－4.75
  TM-p	Gln(Trt)	10.00	5.99	181.03	－3.08	－1.43	1.99
  Pioglitazone		0.78	3.33	68.29	100.00	—	—
  Voglibose		1.00	－4.85	153.64	—	92.38	—
  KR-62436		0.30	－1.03	117.2	—	—	73.11

  所合成的目标分子之间的活性差别, 与取代基R有关.取代基R对分子活性的影响, 主要与R的电性和空间体积、以及R对分子溶解性的影响有关.从表 2中PPRE相对激动活性数据看, R为烷基侧链的分子的活性较R含有活性基团侧链的分子活性高(如TM-e＞TM-k), R中含有苯环侧链的分子(如TM-n, TM-m, TM-p, TM-k, TM-b)的活性都很弱.令人难以理解的是, 含有甘氨酸(TM-o)和丙氨酸(TM-a)结构单元的分子, 其侧链结构很小, 也表现出低活性.我们采用分子对接技术对TM-a, TM-e, TM-n几个活性典型的分子与PPARγ配体结合结构域2PRG蛋白进行3D对接, 其对接图见图 4.对比阳性对照物Pioglitazone的对接图, TM-a分子侧链结构太小, 不能与配体蛋白的受体腔进行有效结合; TM-n有庞大的侧链结构, 与配体蛋白结合的氢键很多, 但在受体腔中结合很差, 依然导致低活性(出现负值); 而TM-e侧链基团大小适中, 结合模式与参照物pioglitazone相似, 表现出比其他分子相对较好的活性, 但是相对于Pioglitazone, 其与受体腔的匹配程度稍差, 活性还不够理想, 因此该类分子的PPRE活性结构还有待继续探索.

  图 4

  

  图 4.  化合物TM-a (a), TM-e (b), TM-n (c)和Pioglitazone (d)与PPARγ配体结合结构域2PRG的3D预测对接图

  Figure 4.  3D predicted binding modes of compounds TM-a (a), TM-e (b), TM-n (c) and pioglitazone (d) to 2PRG

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  从表 2数据可以看出, 目标分子的α-葡萄糖苷酶抑制活性和DPP-4抑制活性都很弱.然而将三种活性数据作图(图 5), 从中可以看出, 目标化合物在α-葡萄糖苷酶抑制活性中的变化趋势刚好与PPRE激动活性、DPP-4抑制活性的变化趋势相反, 这可能为多靶点药物的研究提供了一种思路.

  图 5

  

  图 5.  目标分子三种活性比较曲线图

  Figure 5.  Comparison graph of three kinds of target molecules activities

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  2.   结论

  以人体内天然碱基尿嘧啶和天然氨基酸半胱氨酸为起始原料, 经过四步反应成功合成单体S-胸腺嘧啶-L-半胱氨酸甲酯盐酸盐; 以此单体作为氨基组分和不同的Fmoc氨基酸进行偶联, 得到16个碱基修饰的二肽衍生物, 收率86%~39%.生物活性筛选结果显示, 二肽衍生物的PPRE相对激动活性、α-葡萄糖苷酶的抑制活性和二肽基肽酶抑制活性都很弱, 还需要进一步研究.但作者发现该类分子表现出生物活性的选择性和多靶向性, 为设计新型多肽多靶点药物的研究提供了新思路.

  3.   实验部分

  3.1   仪器与试剂

  试剂规格及来源:所用Fmoc-AA-OH、半胱氨酸、二环己基碳二亚胺(DCC)等(化学纯, 成都凯泰新技术有限责任公司); HOBt (化学纯, 苏州天马医药有限公司), 二异丙基碳二亚胺(DIC)(分析纯, 山东淄博畅顺工贸有限公司), N, N-二异丙基乙二胺(DIPEA)(化学纯, Merck-Schuchardt, 浙江新德化工有限公司), 三乙胺(分析纯, 成都市科龙化工试剂厂), 其他常用溶剂规格及来源同前.

  3.2   目标化合物TM的合成

  3.2.1   中间体5-羟甲基尿嘧啶(5-HmU, IM-1)的制备

  250 mL圆底烧瓶加入KOH (4.38 g)、水(150 mL), 冰浴冷却, 分批加入尿嘧啶(11.23 g, 100 mmol), 搅拌溶样; 几分钟后, 分批加入多聚甲醛(3.602 g, 120 mmol), 室温搅拌0.5 h后, 置于50 ℃的水浴中, 继续搅拌.薄层色谱法(TLC)监测反应过程.反应结束后, 取出反应瓶, 冰浴下采用2 mol/L HCl溶液调节pH＝7, 搅拌, 静置, 抽滤, 洗涤, 抽干.合成结果及表征数据与参考文献[24, 25]一致.

  3.2.2   中间体S-胸腺嘧啶-L-半胱氨酸盐酸盐(L-HCl· H-Cys(T)-OH, IM-2)的制备

  在250 mL圆底烧瓶中依次加入L-半胱氨酸盐酸盐(4.710 g, 30 mmol)和5-羟甲基尿嘧啶(5-HmU) (4.260 g, 30 mmol)后, 一次性加入浓度为2 mol/L的盐酸溶液120 mL, 50 ℃搅拌反应, TLC监测反应过程.反应毕, 静置, 冷却, 析出白色固体, 抽滤, 干燥, 即得7.460 g S-胸腺嘧啶-L-半胱氨酸盐酸盐[HCl·H-Cys(T)-OH]^[22], 收率88%. m.p. 239~241 ℃; IR (KBr) ν: 3432, 3268, 3229, 3073, 2966, 2816, 1752, 1722, 1701, 1638, 1175 cm^－1; API MS m/z: 268.0 [M+Na－HCl]⁺, 246.0 [M+H－ HCl]⁺.

  3.2.3   中间体N-叔丁氧羰基-S-胸腺嘧啶-L-半胱氨酸(Boc-Cys(T)-OH, IM-3)的制备

  在250 mL圆底瓶中加入HCl·H-Cys(T)-OH (30 mmol)和水50 mL, 冰水浴冷却, 搅拌下缓慢加入溶有氢氧化钾的水溶液100 mL, 再分批加入Boc₂O (45 mmol), 加毕室温搅拌反应, TLC监测反应过程, 反应过程中适时用氢氧化钾水溶液调节反应液pH使其维持在9以上.反应完毕后, 乙醚萃取(30 mL×3), 水层冰水浴冷却, 用浓度为2 mol/L的盐酸水溶液调节pH至3~4, 有固体析出.过滤, 滤饼用水洗涤(20 mL×2), 备用; 滤液用乙酸乙酯萃取(20 mL×4), 合并乙酸乙酯萃取液, 无水硫酸钠干燥, 减压蒸馏回收溶剂, 残余物加入50 mL石油醚(b.p. 60~90 ℃), 有固体析出.冷藏过夜, 抽滤, 所得滤饼与前述水洗后的滤饼合并, 干燥, 即得中间体Boc-Cys(T)-OH, 白色固体^{[22, 23]}.

  3.2.4   中间体S-胸腺嘧啶-L-半胱氨酸甲酯盐酸盐(HCl·H-Cys(T)-OCH₃, IM-4)的制备

  在100 mL圆底烧瓶中加入甲醇50 mL, 冰盐浴冷却, 搅拌下缓慢滴加二氯亚砜, 加毕搅拌30 min, 再分批加入Boc-Cys(T)-OH, 加毕室温搅拌反应, TLC监测反应进程.反应完毕后, 减压蒸馏回收溶剂, 残余物用甲醇10 mL分散后再减压旋蒸至干, 重复3次以带出游离HCl, 最后加入无水乙醚, 搅拌分散, 抽滤, 滤饼干燥, 即得中间体HCl·H-Cys(T)-OCH₃, 白色粉末^[23], m.p. 193.7~195.0 ℃; ESI MS m/z: 260.1 ([M－Cl]⁺, 100).

  3.2.5   目标化合物Fmoc-AA-Cys(T)-OCH₃ (TM)的制备

  烧瓶中加入1 mmol HCl·Cys(T)-OCH₃、1 mL无水四氢呋喃(THF)、1 mmol DIPEA, 冰浴冷却, 搅拌.烧瓶中加入Fmoc-AA-OH (1 mmol)、HOBt (0.162 g, 1.2 mmol)、无水THF 1.5 mL, 搅拌; 5 min后, 由移液枪注射DIC (0.2 mL, 1.2 mmol)或加入DCC (1.2 mmol), 冰浴下搅拌.活化0.5 h后, 两液混合, TLC监测反应进程.反应完成后, 抽滤除去不溶物, 减压浓缩滤液去除THF.加入乙酸乙酯25 mL, 搅拌尽量使其溶解, 再加入质量分数为10%柠檬酸水溶液20 mL, 剧烈搅拌10 min, 静置, 分液.乙酸乙酯层依次用0.5 mol/L NaHCO₃/H₂O溶液(15 mL×2)、饱和NaCl溶液(15 mL×3)洗涤; 所有水层用乙酸乙酯(10 mL×2)萃取, 合并有机层, 干燥后浓缩处理得到粗品, 再柱层析(乙酸乙酯/石油醚或CHCl₃/CH₃OH)得到目标分子TM.

  芴甲氧羰基-L-丙氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-a):产率86%. m.p. 136~138 ℃; [α]_D¹⁷－17.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 1.23 (d, J＝6.9 Hz, 3H, H-25), 2.73~2.85 (m, 4H, H-15, H-16), 3.62 (s, 3H, H-24), 4.10~4.27 (m, 4H, H-7, H-8, H-11), 4.47~4.49 (m, 1H, H-14), 7.32~7.41 (m, 4H, H-3, H-4), 7.53 (d, J＝7.59 Hz, 1H, H-18), 7.72~7.83 (m, 3H, H-10, H-5), 7.88 (d, J＝6.60 Hz, 2H, H-2), 8.39 (d, J＝7.50 Hz, 1H, H-13), 10.84 (d, J＝4.50 Hz, 1H, H-19), 11.16 (s, 1H, H-21); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 172.9, 171.1, 168.2, 165.9, 163.7, 151.3, 139.4, 128.9, 127.7, 127.3, 127.1, 125.3, 121.4, 120.1 109.8, 65.7, 54.6, 52.1, 51.8, 46.7, 34.3, 32.2, 20.4; HRMS calcd for C₂₇H₂₈N₄O₇SNa [M+Na]⁺ 575.1571, found 575.1564.

  芴甲氧羰基-L-苯丙氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-b):产率69%. m.p. 203~204 ℃; [α]_D¹⁷ －21.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 2.73~2.86 (m, 4H, H-15, H-16), 2.88~3.00 (m, 2H, H-25), 3.64 (s, 3H, H-24), 4.11~4.27 (m, 4H, H-7, H-8, H-11), 4.54 (s, 1H, H-14), 7.18~7.43 (m, 10H, H-3, H-4, H-18, H-27, H-28, H-29), 7.61~7.65 (m, 3H, H-10, H-5), 7.93 (d, J＝7.44 Hz, 2H, H-2), 8.62 (d, J＝7.47 Hz, 1H, H-13), 10.84 (d, J＝4.53 Hz, 1H, H-19), 11.18 (s, 1H, H-21); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 171.9, 171.1, 163.7, 155.8, 151.3, 143.8, 140.7, 139.4, 138.1, 129.3, 128.1, 127.7, 127.3, 126.3, 125.3, 120.1, 109.0, 65.7, 55.9, 52.2, 51.8, 46.6, 37.5, 32.2, 27.5; HRMS calcd for C₃₃H₃₂-N₄O₇SNa [M+Na]⁺ 651.1884, found 651.1880.

  芴甲氧羰基-L-缬氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-c):产率39%; m.p. 160~161 ℃; [α]_D¹⁷－30.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 1.00 (d, J＝6.57 Hz, 6H, H-26), 2.78~2.87 (m, 5H, H-15, H-16, H-25), 3.64 (s, 3H, H-24), 4.22~4.26 (m, 4H, H-7, H-8, H-11), 4.50 (m, 1H, H-14), 7.30~7.44 (m, 5H, H-3, H-4, H-10), 7.73~7.77 (m, 1H, H-18), 7.84 (d, J＝7.47 Hz, 2H, H-2), 7.89 (d, J＝7.41 Hz, 2H, H-5), 8.46 (d, J＝7.23 Hz, 1H, H-13); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 166.8, 166.5, 163.6, 156.8, 151.2, 139.4, 139.0, 137.4, 129.5, 128.9, 127.3, 121.4, 120.0, 109.7, 109.2, 59.4, 54.1, 48.6, 34.3, 31.2, 27.5, 23.3, 18.5, 17.2; HRMS calcd for C₂₉H₃₂-N₄O₇SNa [M+Na]⁺ 603.1884, found 603.1890.

  芴甲氧羰基-L-亮氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-d):产率59%. m.p. 148~149 ℃; [α]_D¹⁷－39.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 1.00 (d, J＝6.51 Hz, 6H, H-27), 1.41~1.47 (m, 3H, H-26, H-25), 2.77~2.88 (m, 4H, H-15, H-16), 3.63 (s, 3H, H-24), 4.22~4.26 (m, 4H, H-7, H-8, H-11), 4.47~4.54 (m, 1H, H-14), 7.34 (t, J＝7.41 Hz, 4H, H-3, H-4), 7.43 (d, J＝7.32 Hz, 1H, H-18), 7.71~7.74 (m, 1H, H-10), 7.84 (d, J＝7.44 Hz, 2H, H-5), 7.89 (d, J＝7.46 Hz, 2H, H-2), 8.42 (d, J＝7.41 Hz, 1H, H-13); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 167.9, 166.2, 163.6, 156.8, 151.2, 139.4, 139.1, 137.4, 135.4, 133.2, 129.5, 128.9, 127.3, 123.9, 121.4, 121.2, 120.0, 109.7, 109.1, 54.5, 52.7, 48.6, 44.0, 34.5, 27.7, 23.4, 23.3, 23.1, 21.8; HRMS calcd for C₃₀H₃₄N₄O₇SNa [M+Na]⁺ 617.2040, found 617.2047.

  芴甲氧羰基-L-异亮氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-e):产率46%; m.p. 199~201 ℃; [α]_D¹⁷－29.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 0.80~0.87 (m, 8H, H-28, H-26, H-27), 2.75~2.88 (m, 5H, H-15, H-16, H-25), 3.61 (s, 3H, H-24), 3.92~3.99 (m, 1H, H-11), 4.21~4.26 (m, 3H, H-7, H-8), 4.47~4.49 (m, 1H, H-14), 7.30~7.34 (m, 1H, H-18), 7.39~7.44 (m, 4H, H-3, H-4), 7.72~7.76 (m, 1H, H-10), 7.84 (d, J＝7.56 Hz, 2H, H-2), 7.89 (d, J＝7.41 Hz, 2H, H-5), 8.48 (d, J＝7.29 Hz, 1H, H-13); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 166.9, 166.5, 163.7, 151.2, 143.9, 139.0, 135.4, 129.5, 128.9, 127.7, 127.3, 123.9, 122.2, 121.4, 121.2, 120.0, 109.8, 109.2, 58.7, 54.1, 48.6, 38.0, 34.2, 27.6, 24.4, 15.0, 11.9; HRMS calcd for C₃₀H₃₄N₄O₇SNa [M+Na]⁺ 617.2040, found 617.2040.

  芴甲氧羰基-L-(O-叔丁基)-苏氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-f):产率74%, m.p. 157~159℃; [α]_D¹⁷－12.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 1.05 (d, J＝6.06 Hz, 3H, H-26), 1.12 (s, 9H, H-28), 2.81~2.88 (m, 4H, H-15, H-16), 3.63 (s, 3H, H-24), 3.82~3.86 (m, 1H, H-25), 4.02~4.08 (m, 1H, H-11), 4.22~4.33 (m, 3H, H-7, H-8), 4.52~4.54 (m, 1H, H-14), 7.29~7.44 (m, 5H, H-3, H-4, H-18), 7.72~7.76 (m, 3H, H-10, H-5), 7.89 (d, J＝7.38 Hz, 2H, H-2), 8.28 (d, J＝7.20 Hz, 1H, H-13), 10.83 (d, J＝4.59 Hz, 1H, H-19), 11.16 (s, 1H, H-21); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 170.9, 169.8, 163.7, 155.9, 151.2, 143.9, 143.7, 140.7, 139.4, 127.7, 127.1, 125.4, 120.1, 109.0, 73.9, 67.6, 65.8, 59.4, 52.1, 46.7, 32.5, 28.1, 27.4, 19.0; HRMS calcd for C₃₂H₃₈N₄O₈SNa [M+Na]⁺ 661.2303, found 661.2306.

  芴甲氧羰基-L-(O-叔丁酯)-天冬氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-g):产率43%, m.p. 116~119 ℃; [α]_D¹⁷－35.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 1.38 (d, J＝7.16 Hz, 9H, H-28), 2.64~2.84 (m, 6H, H-25, H-15, H-16), 3.63 (s, 3H, H-24), 4.21~4.31 (m, 3H, H-7, H-8), 4.45~4.47 (m, 2H, H-14, H-11), 7.31 (t, J＝7.38 Hz, 2H, H-3), 7.39~7.44 (m, 3H, H-4, H-18), 7.65~7.71 (m, 3H, H-10, H-5), 7.89 (d, J＝7.44 Hz, 2H, H-2), 8.46 (d, J＝7.38 Hz, 1H, H-13), 10.85 (d, J＝4.83 Hz, 1H, H-19), 11.18 (s, 1H, H-21); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 171.0, 169.2, 163.7, 155.8, 151.2, 143.9, 143.7, 140.7, 139.4, 127.7, 127.1, 125.3, 120.2, 109.1, 80.3, 65.8, 52.5, 52.2, 51.3, 46.7, 37.6, 32.1, 27.7, 27.4; HRMS calcd for C₃₂H₃₆N₄O₉SNa [M+Na]⁺ 675.2095, found 675.2098.

  芴甲氧羰基-(N-叔丁氧羰基)-L-赖氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-h):产率61%. m.p. 131~135 ℃; [α]_D¹⁷－31.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 1.23~1.30 (m, 2H, H-26), 1.37 (s, 9H, H-31), 1.60~1.75 (m, 4H, H-27, H-25), 2.77~2.89 (m, 6H, H-15, H-16, H-28), 3.63 (s, 3H, H-24), 4.10~4.12 (m, 1H, H-7), 4.22~4.28 (m, 3H, H-8, H-11), 4.47~4.49 (m, 1H, H-14), 6.79 (m, 1H, H-29), 7.32 (t, J＝7.29 Hz, 2H, H-3), 7.39~7.44 (m, 3H, H-4, H-18), 7.48~7.50 (m, 1H, H-10), 7.72~7.74 (m, 2H, H-5), 7.89 (d, J＝7.38 Hz, 2H, H-2), 8.44 (d, J＝7.41 Hz, 1H, H-13), 10.86 (s, 1H, H-19), 11.18(s, 1H, H-21); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 172.3, 171.1, 163.7, 155.6, 151.2, 143.9, 142.6, 140.7, 139.4, 137.4, 128.9, 127.6, 127.3, 127.0, 125.3, 121.4, 120.0, 109.7, 109.0, 77.4, 67.0, 65.7, 54.4, 52.0, 51.8, 46.7, 32.2, 29.2, 28.3, 27.4, 25.1, 22.8; HRMS calcd for C₃₅H₄₃-N₅O₉Na [M+Na]⁺ 732.2674, found 732.2672.

  芴甲氧羰基-L-蛋氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-i):产率51%. m.p. 195~198 ℃; [α]_D¹⁷－45.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 1.85~1.90 (m, 2H, H-25), 2.08 (s, 3H, H-27), 2.45~2.50 (m, 2H, H-26), 2.78~2.89 (m, 4H, H-15, H-16), 3.62 (s, 3H, H-24), 4.17~4.30 (m, 4H, H-7, H-8, H-11), 4.47~4.49 (m, 1H, H-14), 7.32 (t, J＝7.26 Hz, 2H, H-3), 7.39~7.44 (m, 3H, H-4, H-18), 7.60 (d, J＝8.13 Hz, 1H, H-10), 7.73 (d, J＝6.18 Hz, 2H, H-5), 7.89 (d, J＝7.38 Hz, 2H, H-2), 8.47 (d, J＝7.32 Hz, 1H, H-13), 10.84 (d, J＝3.66 Hz, 1H, H-19), 11.17 (s, 1H, H-21); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 171.0, 169.9, 163.7, 162.3, 151.2, 142.6, 140.7, 139.4, 137.4, 128.9, 127.6, 127.3, 127.0, 125.3, 124.2, 121.4, 120.0, 109.7, 109.0, 65.6, 55.9, 54.5, 52.2, 46.7, 35.7, 32.2, 30.8, 29.6, 14.6; HRMS calcd for C₂₉H₃₂-N₄O₇S₂Na [M+Na]⁺ 635.1605, found 635.1611.

  芴甲氧羰基-L-脯氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-j):产率76%. m.p. 106~107 ℃; [α]_D¹⁷－56.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 1.77~1.92 (m, 4H, H-25, H-26), 2.74~2.85 (m, 4H, H-15, H-16), 3.26~3.42 (m, 2H, H-27), 3.63 (s, 3H, H-24), 4.18~4.45 (m, 5H, H-7, H-8, H-11, H-14), 7.35~7.41 (m, 5H, H-3, H-4, H-18), 7.59~7.69 (m, 2H, H-5), 7.88 (d, J＝7.29 Hz, 2H, H-2), 8.58 (d, J＝7.77 Hz, 1H, H-13), 10.83 (s, 1H, H-19), 11.17 (s, 1H, H-21); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 172.1, 171.1, 163.7, 154.0, 151.2, 143.6, 140.8, 139.4, 127.7, 127.2, 125.5, 125.2, 120.1, 109.0, 79.2, 67.1, 59.6, 52.4, 52.0, 46.7, 32.2, 30.7, 30.0, 25.2; HRMS calcd for C₂₉H₃₀N₄O₇SNa [M+Na]⁺ 601.1727, found 601.1734.

  芴甲氧羰基-(O-叔丁基)-L-酪氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-k):产率64%. m.p. 133~135 ℃; [α]_D¹⁷－44.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 1.17 (s, 9H, H-31), 2.76~2.99 (m, 4H, H-15, H-16), 3.25~3.12 (m, 2H, H-25), 3.64 (s, 3H, H-24), 4.10~4.15 (m, 3H, H-7, H-8), 4.28~4.32 (m, 1H, H-11), 4.52~4.53 (m, 1H, H-14), 6.80 (d, J＝7.05 Hz, 2H, H-28), 7.22 (d, J＝7.38 Hz, 2H, H-27), 7.30 (d, J＝6.89 Hz, 2H, H-5), 7.39~7.42 (m, 3H, H-3, H-18), 7.62~7.66 (m, 3H, H-4, H-10), 7.87 (d, J＝6.54 Hz, 2H, H-2), 8.61 (d, J＝6.03 Hz, 1H, H-13), 10.86 (s, 1H, H-19), 11.19 (s, 1H, H-21); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 171.9, 171.1, 163.8, 155.9, 153.5, 151.3, 143.8, 140.7, 139.5, 132.6, 129.8, 127.7, 127.1, 125.4, 123.3, 120.1, 109.1, 79.2, 77.6, 65.8, 56.0, 52.5, 46.6, 36.9, 32.3, 28.5, 27.5; HRMS calcd for C₃₇H₄₀N₄O₈SNa [M+Na]⁺ 723.2459, found 723.2462.

  芴甲氧羰基-L-(O-叔丁酯)-谷氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-l):产率54%. m.p. 135~137 ℃; [α]_D¹⁷－43.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 1.39 (s, 9H, H-29), 2.08~2.12 (m, 2H, H-25), 2.23~2.28 (m, 2H, H-26), 2.74~2.88 (m, 4H, H-15, H-16), 3.62 (s, 3H, H-24), 4.08~4.29 (m, 4H, H-7, H-8, H-11), 4.48~4.50 (m, 1H, H-14), 7.32 (t, J＝7.26 Hz, 2H, H-4), 7.39~7.44 (m, 3H, H-5, H-18), 7.55 (d, J＝8.16 Hz, 1H, H-10), 7.73 (t, J＝5.97 Hz, 2H, H-3), 7.89 (d, J＝7.29 Hz, 2H, H-2), 8.46 (d, J＝7.29 Hz, 1H, H-13), 10.84 (s, 1H, H-19), 11.17 (s, 1H, H-21); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 171.7, 171.0, 163.7, 155.9, 151.2, 143.9, 143.7, 140.7, 139.4, 127.6, 127.1, 125.3, 120.1, 109.0, 79.7, 67.0, 65.7, 53.6, 52.3, 52.1, 46.7, 31.2, 30.7, 27.5, 25.1; HRMS calcd for C₃₃H₃₈N₄O₉SNa [M+Na]⁺ 689.2252, found 689.2253.

  芴甲氧羰基-(N-三苯甲基)-L-天冬酰胺酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-m):产率60%. m.p. 155~157 ℃; [α]_D¹⁷－40.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 2.54~2.73 (m, 2H, H-25), 2.76~2.89 (m, 4H, H-15, H-16), 3.62 (s, 3H, H-24), 4.21~4.47 (m, 5H, H-7, H-8, H-11, H-14), 7.19~7.26 (m, 15H, H-30, H-31, H-32), 7.32 (t, J＝7.44 Hz, 2H, H-4), 7.41~7.43 (m, 3H, H-3, H-18), 7.68~7.76 (m, 3H, H-10, H-5), 7.90 (d, J＝7.41 Hz, 2H, H-2), 8.46 (d, J＝7.20 Hz, 1H, H-13), 8.55 (s, 1H, H-27), 10.84 (s, 1H, H-19), 11.17 (s, 1H, H-21); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 171.1, 163.7, 154.0, 151.3, 144.8, 143.8, 140.8, 139.4, 128.6, 127.7, 127.5, 127.1, 126.4, 125.3, 120.2, 109.0, 69.4, 65.8, 52.1, 46.7, 30.7, 27.3; HRMS calcd for C₄₇H₄₃N₅O₈SNa [M+Na]⁺ 860.2724, found 860.2733.

  芴甲氧羰基-(N′-三苯甲基)-L-组氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-n):产率45%. m.p. 163~165 ℃; [α]_D¹⁷－49.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 2.73~2.95 (m, 6H, H-15, H-16, H-25), 3.60 (s, 3H, H-24), 4.14~4.50 (m, 5H, H-7, H-8, H-11, H-14), 6.90 (s, 1H, H-27), 7.06~7.42 (m, 21H, H-4, H-3, H-18, H-28, H-31, H-32, H-33), 7.57 (d, J＝8.07 Hz, 1H, H-10), 7.67(d, J＝7.26 Hz, 2H, H-5), 7.90 (d, J＝7.41 Hz, 2H, H-2), 8.54 (d, J＝6.87 Hz, 1H, H-13), 10.87 (s, 1H, H-19), 11.18 (s, 1H, H-21); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz) δ: 171.1, 171.0, 163.7, 155.8, 151.2, 143.7, 141.5, 140.7, 139.4, 137.1, 129.2, 128.2, 127.6, 127.1, 125.3, 125.3, 120.1, 119.7, 108.9, 75.5, 67.0, 52.4, 52.0, 46.6, 32.2, 30.7, 27.4, 25.1; HRMS calcd for C₄₉H₄₄N₆O₇SNa [M+Na]⁺ 883.2884, found 883.2881.

  芴甲氧羰基-L-甘氨酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-o):产率79%. m.p. 153~154 ℃; [α]_D¹⁷－18.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 2.74~2.89 (m, 4H, H-15, H-16), 3.64 (s, 3H, H-24), 3.68 (d, J＝5.58 Hz, 2H, H-11), 4.20~4.30 (m, 3H, H-7, H-8), 4.51~4.55 (m, 1H, H-14), 7.33 (t, J＝7.32 Hz, 2H, H-4), 7.40~7.45 (m, 3H, H-3, H-18), 7.58 (t, J＝6.00 Hz, 1H, H-10), 7.72 (d, J＝7.29 Hz, 2H, H-5), 7.90 (d, J＝7.41 Hz, 2H, H-2), 8.45 (d, J＝6.84 Hz, 1H, H-13), 10.84 (d, J＝5.01 Hz, 1H, H-19), 11.19 (s, 1H, H-21); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 100 MHz)δ: 167.3, 166.4, 164.3, 151.9, 144.6, 143.3, 141.3, 141.1, 140.0, 138.1, 130.1, 129.6, 128.0, 124.6, 122.0, 121.8, 120.6, 110.4, 109.7, 55.2, 54.5, 49.3, 45.1, 35.4, 31.3, 28.5; HRMS calcd for C₂₆H₂₆N₄O₇SNa [M+Na]⁺ 561.1414, found 561.1411.

  芴甲氧羰基-(N-三苯甲基)-L-谷氨酰胺酰-S-(胸腺嘧啶)-L-半胱氨酸甲酯(TM-p):产率41%. m.p. 143~146 ℃; [α]_D¹⁷－28.0 (c 0.1, DMF); ¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz) δ: 176~1.99 (m, 2H, H-25), 2.34~2.36 (m, 2H, H-26), 2.74~2.89 (m, 4H, H-15, H-16), 3.61 (s, 3H, H-24), 4.04 (t, J＝5.52 Hz, 1H, H-7, ), 4.23~4.30 (m, 3H, H-8, H-11), 4.49 (s, 1H, H-14), 7.17~7.35 (m, 17H, H-4, H-31, H-32, H-33), 7.40~7.51 (m, 4H, H-3, H-18, H-10), 7.74 (d, J＝7.17 Hz, 2H, H-5), 7.90 (d, J＝7.32 Hz, 2H, H-2), 8.42 (d, J＝7.26 Hz, 1H, H-13), 8.58 (s, 1H, H-28), 10.85 (d, J＝4.86 Hz, 1H, H-19), 11.19 (s, 1H, H-21); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 100 MHz) δ: 171.9, 171.3, 170.9, 163.6, 155.9, 151.1, 144.8, 143.7, 140.6, 139.3, 128.4, 127.6, 127.4, 127.0, 126.2, 125.2, 120.0, 109.0, 69.1, 65.6, 59.7, 52.3, 52.0, 46.6, 32.2, 30.7, 27.9, 27.4; HRMS calcd for C₄₈H₄₅N₅O₈SNa [M+Na]⁺ 874.2881, found 874.2888.

  3.3   目标化合物的生物活性研究

  生物活性研究主要是抗糖尿病活性研究, 涉及PPRE激动活性、α-葡萄糖苷酶抑制活性及DPP-4抑制活性的测定.

  PPAR反应元件(PPRE)激动活性筛选实验原理及实验方法同参考文献[33], α-葡萄糖苷酶-rat抑制剂筛选实验原理及实验方法同参考文献[33], 二肽基肽酶-Ⅳ (DPP-Ⅳ)抑制剂筛选实验原理及实验方法同参考文献[34].

  辅助材料(Supporting Information)  中间体化合物IM-2及IM-3的合成结果和化合物TM-a~TM-p的¹H NMR, ¹³C NMR和HRMS图谱.这些材料可以免费从本刊网站(http://sioc-journal.cn/)上下载.

• 1. [1]

     Deshpande, A. D.; Harris-Hayes, M.; Schootman, M. Phys. Ther. 2008, 88, 1254. doi: 10.2522/ptj.20080020

  2. [2]

     American Diabetes Association Diabetes Care, 2014, 37 (suppl. 1), S81.

  3. [3]

     Karuranga, S.; Fernandes, J. R.; Huang, Y.; Malanda, B. International Diabetes Federation (IDF) Diabetes Atlas 8th, 2017, p. 10, www.diabetesatlas.org.

  4. [4]

     Hemmingsen, B.; Sonne, D. P.; Metzendorf, M. I.; Richter, B. Cochrane Database Syst. Rev. 2017, 5, CD012204. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28489279

  5. [5]

     Nathan, K. T.; Ahmed-Sarwar, N.; Werner, P. Consult Pharm. 2016, 31, 251. doi: 10.4140/TCP.n.2016.260

  6. [6]

     Turner, N.; Zeng, X. Y.; Osborne, B.; Rogers, S.; Ye, J. M. Trends Pharmacol. Sci. 2016, 37, 379. doi: 10.1016/j.tips.2016.01.007

  7. [7]

     Nissen, S. E.; Wolski, K. N. Engl. J. Med. 2007, 356, 2457. doi: 10.1056/NEJMoa072761

  8. [8]

     Faich, G. A.; Moseley, R. H. Drug Saf. 2001, 10, 537. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11828837

  9. [9]

     Riddle, M. C. Diabetes Care 2017, 40, 629. doi: 10.2337/dci17-0003

  10. [10]

      Leonard, C. E.; Hennessy, S.; Han, X.; Siscovick, D. S.; Flory, J. H.; Deo, R. Trends Endocrinol. Metab. 2017, 28, 561. doi: 10.1016/j.tem.2017.04.003

  11. [11]

      Kajbaf, F.; Lalau, J. D. Pharmacoepidemiol. Drug Saf. 2014, 23, 1123. doi: 10.1002/pds.v23.11

  12. [12]

      Richter, B.; Bandeira-Echtler, E.; Bergerhoff, K.; Lerch, C. L. Cochrane Database Syst. Rev. 2008, 16, CD006739. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18425967

  13. [13]

      Nathan, D. M.; Buse, J. B.; Davidson, M. B.; Ferrannini, E.; Holman, R. R.; Sherwin, R.; Zinman, B. Diabetes Care 2009, 32, 193. doi: 10.2337/dc08-9025

  14. [14]

      陈俣, 科技经济导刊, 2016, 32, 100. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-JJKJ201632077.htmChen, Y. Technol. Econom. Guide 2016, 32, 100(in Chinese). http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-JJKJ201632077.htm

  15. [15]

      张伟, 宋竟婧, 张邦治, 杨雯乐, 王锐, 中国科学:化学, 2013, 43, 941. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-JBXK201308003.htmZhang, W.; Song, J. Q.; Zhang, B. Z.; Yang, W. L.; Wang, R. Sci. Sin.: Chim. 2013, 43, 941(in Chinese). http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-JBXK201308003.htm

  16. [16]

      Lee, K.; Boovanahalli, S. K.; Nam, K. Y.; Kang, S. U.; Lee, M.; Phan, J.; Wu, L.; Waugh, D. S.; Zhang, Z. Y.; No, K. T.; Lee, J. J.; Burke, T. R. Jr. Bioorg. Med. Chem. 2005, 15, 4037. doi: 10.1016/j.bmcl.2005.06.027

  17. [17]

      Fu, H.; Park, J.; Pei, D. Biochemistry 2002, 41, 10700. doi: 10.1021/bi0258748

  18. [18]

      Larsen, S. D.; Stevens, F. C.; Lindberg, T. J.; Bodnar, P. M.; O'Sullivan, T. J.; Schostarez, H. J.; Palazuk, B. J.; Bleasdale, J. E. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003, 13, 971. doi: 10.1016/S0960-894X(02)01065-X

  19. [19]

      张冬英, 邵宛芳, 刘仲华, 刘亚林, 黄业伟, 茶叶科学, 2009, 29, 41. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-CYKK200901011.htmZhang, D. Y.; Shao, W. F.; Liu, Z. H.; Liu, Y. L.; Huang, Y. W. J. Tea Sci. 2009, 29, 41(in Chinese). http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-CYKK200901011.htm

  20. [20]

      Lee, B.; Shi, L.; Kassel, D. B.; Asakawa, T.; Takeuchi, K.; Christopher, R. J. Eur. J. Pharmacol. 2008, 589, 306. doi: 10.1016/j.ejphar.2008.04.047

  21. [21]

      Deng, X. Y.; Han, L.; Zhou, J. P.; Zhang, H. B.; Li, Q. Bioorg. Chem. 2017, 75, 357. doi: 10.1016/j.bioorg.2017.10.010

  22. [22]

      Ma, L. J.; Zhang, G. L.; Chen, S. Y.; Wu, B.; You, J. S.; Xia, C. Q.; Yu, X. Q. J. Pept. Sci. 2005, 11, 812. doi: 10.1002/(ISSN)1099-1387

  23. [23]

      Tang, X. M.; Tang, G. X.; Wang, H.; Luo, L. F.; Yang, D. C. Bull. Chem. Soc. Ethiop. 2012, 26, 415.

  24. [24]

      Kong, L. Q.; Zhao, J.; Fan, L.; Yang, D. C. Chin. Chem. Lett. 2009, 20, 314. doi: 10.1016/j.cclet.2008.11.007

  25. [25]

      赵晋, 孔令强, 范莉, 杨大成, 西南大学学报(自然科学版), 2008, 30, 54. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-XNND200811015.htmZhao, J.; Kong, L. Q.; Fan, L.; Yang, D. C. J. Southwest Univ. (Nat. Sci.) 2008, 30, 54(in Chinese). http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-XNND200811015.htm

  26. [26]

      杨大成, 范莉, 化学研究与应用, 2003, 15, 498. doi: 10.3969/j.issn.1004-1656.2003.04.016Yang, D. C.; Fan, L. Chem. Res. Appl. 2003, 15, 498(in Chinese). doi: 10.3969/j.issn.1004-1656.2003.04.016

  27. [27]

      杨大成, 范莉, 钟裕国, 有机化学, 2003, 23, 493. doi: 10.3321/j.issn:0253-2786.2003.05.018Yang, D. C.; Fan, L.; Zhong, Y. G. Chin. J. Org. Chem. 2003, 23, 493(in Chinese). doi: 10.3321/j.issn:0253-2786.2003.05.018

  28. [28]

      孙晓丽, 范莉, 唐雪梅, 杨大成, 有机化学研究, 2016, 4, 23. http://sioc-journal.cn/Jwk_yjhx/CN/abstract/abstract327249.shtmlSun, X. L.; Fan, L.; Tang, X. M.; Yang, D. C. J. Org. Chem. Res. 2016, 4, 23(in Chinese). http://sioc-journal.cn/Jwk_yjhx/CN/abstract/abstract327249.shtml

  29. [29]

      Wang, G. B.; Wang, L. F.; Li, C. Z.; Sun, J.; Zhou, G. M.; Yang, D. C. Res. Chem. Intermed. 2012, 38, 77. doi: 10.1007/s11164-011-0327-6

  30. [30]

      杨龙, 晏菊芳, 范莉, 陈欣, 上官瑞燕, 汪林发, 杨大成, 有机化学, 2012, 32, 1908. http://sioc-journal.cn/Jwk_yjhx/CN/Y2012/V32/I10/1908Yang, L.; Yan, J. F.; Fan, L.; Chen, X.; Shangguan, R. Y.; Wang, L. F.; Yang, D. C. Chin. J. Org. Chem. 2012, 32, 1908(in Chinese). http://sioc-journal.cn/Jwk_yjhx/CN/Y2012/V32/I10/1908

  31. [31]

      杨艳, 晏菊芳, 范莉, 陈欣, 蒋理, 杨大成, 药学学报, 2012, 47, 1630. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-YXXB201212011.htmYang, Y.; Yan, J. F.; Fan, L.; Chen, X.; Jiang, L.; Yang, D. C. Acta Pharm. Sin. 2012, 47, 1630(in Chinese). http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-YXXB201212011.htm

  32. [32]

      唐雪梅, 范莉, 于红霞, 廖玉华, 杨大成, 有机化学, 2009, 29, 595. http://sioc-journal.cn/Jwk_yjhx/CN/abstract/abstract327249.shtmlTang, X. M.; Fan, L.; Yu, H. X.; Liao, Y. H.; Yang, D. C. Chin. J. Org. Chem. 2009, 29, 595(in Chinese). http://sioc-journal.cn/Jwk_yjhx/CN/abstract/abstract327249.shtml

  33. [33]

      Tang, G. X.; Yan, J. F.; Fan, L.; Song, X. L.; Jiang, L.; Luo, L. F.; Yang, D. C. Sci. China, Chem. 2013, 56, 490. doi: 10.1007/s11426-012-4816-2

  34. [34]

      Zhang, X. H.; Yan, J. F.; Fan, L.; Wang, G. B.; Yang, D. C. Acta Pharm. Sin. B 2011, 1, 100. doi: 10.1016/j.apsb.2011.06.006

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  图 1  具有抗糖尿病活性的多肽分子举例

  Figure 1  Examples of polypeptide molecules with anti-diabetic activity

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  图 2  含有尿嘧啶结构单元的抗糖尿病分子

  Figure 2  Anti-diabetes molecules containing uracil unit

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  图式 1  目标化合物的合成

  Scheme 1  Synthesis of target compounds

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  图 4  化合物TM-a (a), TM-e (b), TM-n (c)和Pioglitazone (d)与PPARγ配体结合结构域2PRG的3D预测对接图

  Figure 4  3D predicted binding modes of compounds TM-a (a), TM-e (b), TM-n (c) and pioglitazone (d) to 2PRG

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  图 5  目标分子三种活性比较曲线图

  Figure 5  Comparison graph of three kinds of target molecules activities

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  表 1  目标分子TM的制备

  Table 1.  Synthesis of the target molecules TM

  Compd.	Fmoc-AA-OH	Coupling reagent	Ratioa	Scale/mmol	Time/h	Temp./℃	Weight/g	Yield/%
  TM-a	Fmoc-Ala-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	7	26	0.952	86
  TM-b	Fmoc-Phe-OH	DIC	1:1:1.2	2	22	17	0.846	69
  TM-c	Fmoc-Val-OH	DIC	1:1:1.2	1	18	20	0.227	39
  TM-d	Fmoc-Leu-OH	DIC	1:1:1.2	1	17	24	0.351	59
  TM-e	Fmoc-Ile-OH	DIC	1:1:1.2	1	6	23	0.550	46
  TM-f	Fmoc-Thr(tBu)-OH	DIC	1:1:1.2	2	6	26	0.945	74
  TM-g	Fmoc-Asp(OtBu)-OH	DCC	1:1:1.2	2	4.5	25	0.582	43
  TM-h	Fmoc-Lys(Boc)-OH	DCC	1.05:1:1.2	2	6.5	27	0.871	61
  TM-i	Fmoc-Met-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	6.5	27	0.626	51
  TM-j	Fmoc-Pro-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	5.5	24	0.883	76
  TM-k	Fmoc-Tyr(tBu)-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	7	21	0.880	64
  TM-l	Fmoc-Glu(OtBu)-OH	DIC	1:1:1.2	3	8.5	17	0.915	54
  TM-m	Fmoc-Asn(Trt)-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	5	19	1.013	60
  TM-n	Fmoc-His(Trt)-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	6	20	0.776	45
  TM-o	Fmoc-Gly-OH	DIC	1:1:1.2	1	17	24	0.429	79
  TM-p	Fmoc-Gln(Trt)-OH	DCC	1:1.1:1.2	2	6	18	0.696	41
  a Ratio表示IM-4/Fmoc-AA-OH/Coupling reagent的物质的量之比.

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  表 2  目标化合物的PPRE相对激动活性、α-葡萄糖苷酶-rat抑制活性及DPP-4抑制活性

  Table 2.  PPRE relative activation, α-glucosidase inhibition and DPP-4 inhibition of target molecules

  Entry	AA	Conc./(µg·mL－1)	cLogP	tPSA	PPRE relative activation/%	α-Glucosidase inhibition/%	DPP-4 inhibition/%
  TM-a	Ala	10.00	1.76	151.93	－1.87	28.86	－9.98
  TM-b	Phe	10.00	3.42	151.93	5.51	28.41	－4.19
  TM-c	Val	10.00	2.65	151.93	27.08	17.91	－7.39
  TM-d	Leu	10.00	3.02	151.93	13.72	－15.66	0.00
  TM-e	Ile	10.00	3.10	151.93	40.69	－14.19	14.42
  TM-f	Thr(tBu)	10.00	2.83	161.16	10.86	2.176	－1.41
  TM-g	Asp(OtBu)	10.00	2.32	178.23	9.75	15.68	－11.71
  TM-h	Lys(Boc)	10.00	1.45	181.03	－3.72	20.20	－16.50
  TM-i	Met	10.00	2.42	151.93	14.96	－9.91	6.23
  TM-j	Pro	10.00	2.04	143.14	－2.79	－7.31	10.55
  TM-k	Tyr(tBu)	10.00	4.32	161.16	1.32	－7.53	10.36
  TM-l	Glu(OtBu)	10.00	2.61	178.23	3.00	－6.23	6.59
  TM-m	Asn(Trt)	10.00	5.70	181.03	－9.62	－2.78	4.69
  TM-n	His(Trt)	10.00	6.37	169.75	－10.21	－3.59	0.87
  TM-o	Gly	10.00	1.20	151.93	3.92	－2.34	－4.75
  TM-p	Gln(Trt)	10.00	5.99	181.03	－3.08	－1.43	1.99
  Pioglitazone		0.78	3.33	68.29	100.00	—	—
  Voglibose		1.00	－4.85	153.64	—	92.38	—
  KR-62436		0.30	－1.03	117.2	—	—	73.11

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