二萘并呋喃衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

引用本文: 宋永彬, 李丹, 杨异卉, 纪红蕊, 刘波. 二萘并呋喃衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究[J]. 有机化学, 2018, 38(6): 1516-1524. doi: 10.6023/cjoc201712018 shu

Citation: Song Yongbin, Li Dan, Yang Yihui, Ji Hongrui, Liu Bo. Synthesis and Cytotoxicity of Dinaphtho [2, 1-b: 1', 2'-d]furan Derivatives[J]. Chinese Journal of Organic Chemistry, 2018, 38(6): 1516-1524. doi: 10.6023/cjoc201712018 shu

二萘并呋喃衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

a.
哈尔滨理工大学化学与环境工程学院哈尔滨 150040
b.
哈尔滨医科大学药学院哈尔滨 150081

通讯作者: 杨异卉, yangyihui19790508@sina.com

基金项目:
黑龙江省青年科学基金（No.QC2014C091）、黑龙江省普通本科高等学校青年创新人才培养计划（No.324015507）、黑龙江省博士后科研启动金（No.LBH-Q16187）资助项目
^†共同第一作者

摘要: 为了研究二萘并呋喃衍生物的构效关系，设计合成了两个系列的二萘[2，1-b：1'，2'-d]呋喃衍生物，通过¹H NMR、¹³C NMR、HRMS和IR数据对所有目标化合物进行了结构鉴定.通过噻唑蓝（MTT）法测试了目标化合物的体外抗肿瘤活性，大多数化合物对人肝癌细胞（HepG2和SMMC-7721）、人宫颈癌细胞（HeLa细胞）和急性早幼粒细胞白血病细胞（NB4细胞）显示了较强的抗肿瘤活性.其中N³，N¹¹-二羟基二萘并[2，1-b：1'，2'-d]呋喃-3，11-二甲酰胺（13k）对SMMC-7721细胞显示了很强抑制作用，其半数抑制浓度为0.57 μmol·L^－1，远低于阳性对照药5-氟脲嘧定的20.21 μmol·L^－1.

关键词:

English

Synthesis and Cytotoxicity of Dinaphtho [2, 1-b: 1', 2'-d]furan Derivatives

a.
School of Chemical and Environmental Engineering, Harbin University of Science and Technology, Harbin 150040
b.
College of Pharmacy, Harbin Medical University, Harbin 150081

Corresponding author: Yang, Yihui, E-mail:yangyihui19790508@sina.com

Received Date: 10 December 2017
Revised Date: 22 January 2018
Available Online: 01 June 2018
Fund Project:
Project supported by the Youth Science Fund of Heilongjiang Province (No. QC2014C091), the University Nursing Program for Young Scholars with Creative Talents in Heilongjiang Province (No. 324015507) and the Heilongjiang Postdoctoral Scientific Research Developmental Fund (No. LBH-Q16187)
(These authors contributed equally to this work)

Abstract: In order to study the structure-activity relationships of dinaphthofuran derivatives, two series of dinaphtho[2, 1-b:1', 2'-d]furan derivatives were synthesized. The structures of all compounds were identified by ¹H NMR, ¹³C NMR, HRMS and IR spectra. The in vitro antitumor activity of the synthesized derivatives was tested by 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay. Most of them exhibited strong inhibitory activity on human hepatocellular carcinoma cell lines (HepG2 and SMMC-7721 cells), uterine cervix cancer Hela cells and acute promyelocytic leukemia NB4 cells. Compound 13k exhibited significant inhibitory activity against SMMC-7721 cells with IC₅₀ vaue of 0.57 μmol·L^-1, much lower than 20.21 μmol·L^-1 of the positive control 5-Fu.

Key words:

萘并呋喃类衍生物是一类重要的化合物, 其结构片段存在于很多天然产物以及药物结构中^[1~4].萘并呋喃具有多种生理活性, 如抗菌^[5~7]、抗真菌^[8]、抗氧化^[9]、细菌诱变作用^{[10, 11]}以及抗肿瘤活性^[12~15].

鉴于萘并呋喃类化合物的抗肿瘤活性研究潜力, 设计其衍生物并研究抗肿瘤活性构效关系有重要研究意义.在我们前期研究中工作中^{[16, 17]}设计了抗肿瘤嵌入剂二萘并吡喃类化合物(图 1), 其结构特点是具有平面性的母核和柔性侧链, 此类化合物具有较强抗肿瘤活性, 这促使我们对其进行结构修饰.把此类化合物的吡喃环替换成呋喃结构, 就能得到母体平面性更好的二萘并呋喃类化合物, 更适合作为嵌入剂插入到肿瘤细胞的DNA碱基对之间, 有利于和靶点发生作用.把二萘并吡喃侧链中的活性必需基团酰胺结构引入到二萘并呋喃母体上, 就得到本研究的目标化合物二萘并呋喃酰胺衍生物(图 1).为了全面研究此类化合物的抗肿瘤活性构效关系, 我们对酰胺侧链结构和位置进行了如下设计:改变酰胺氮原子上取代基的数目、极性和碳链长度; 酰胺侧链的引入位置包括3和11位, 6和8位.本工作设计合成了20个未见文献报道的新化合物, 研究其抗肿瘤活性, 以期望得到抗肿瘤活性分子, 为进一步进行药物化学研究提供物质基础, 具体合成路线见Scheme 1和Scheme 2.

图 1

图 1. 二萘并吡喃和二萘并呋喃类化合物的结构

Figure 1. Structures of dinaphthopyran and dinaphthofuran compounds

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图式 1

图式 1. 目标化合物7a~7i的合成

Scheme 1. Synthetic route of the target compounds 7a~7i

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Scheme 2

Scheme 2. 目标化合物13a~13k的合成

Scheme 2. Synthetic route of the target compounds 13a~13k

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1. 结果与讨论

1.1 目标化合物的合成

化合物1经氧化偶联反应得到化合物2, 其经过分子内脱水反应生成中间体3, 再和N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)作用发生亲电取代反应得到中间体4, 后者的溴原子被氰基取代得到中间体5, 再经过碱水解反应得到中间体6, 化合物6通过生成的中间产物酰氯和含氮化合物反应生成了目标化合物7a~7i.

目标化合物7a~7i合成过程中, 中间体5和6的合成是两个关键反应, 中间体4的氰基取代反应溶剂选择比较困难, 在此类反应常用的溶剂N, N-二甲基甲酰胺(DMF)中无法取代完全, 经过反复试验最终确定反应溶剂为二甲基亚砜(DMSO), 在DMSO中原料可以完全反应.这可能有两方面的原因, 一是体系高温时反应更容易发生, 还有更主要的原因是产物5的溶解度非常小, 在回流的DMF中溶解度也不大, 所以可能对反应物产生包裹, 使其取代不完全; 化合物5在回流的DMSO中可以完全溶解, 反应也可以进行完全.由于化合物5的溶解度非常小, 其水解反应溶剂选择困难, 以水、醇等为溶剂的酸碱溶液无法使其水解, 经过实验最终选择高沸点的乙二醇为溶剂, 通过碱催化水解得到中间体6.

目标化合物13a~13i和7a~7i是异构体, 所以合成过程有些类似, 化合物1经过溴取代生成二溴代物, 再经过还原反应得到化合物8, 化合物9和2、10和3、11和5、12和6、13a~13i和7a~7i的合成过程分别相同, 另外, 目标物13j、13k和7a~7i合成方法也相似.

1.2 目标化合物的核磁图谱分析

化合物7a~7i和13a~13k由于结构对称, 所以氢谱中积分面积数值都应乘以二.目标物分子结构中存在多个芳香环, 受磁各向异性影响, 在¹H NMR谱中, 芳香质子的化学位移都比较大, 其中H-1和H-13在所有芳氢中处于最低场.化学位移值达到δ 9.10~9.15, 这主要是由于H-1和H-13受到各芳香环去屏蔽的叠加作用最强, 因此出现在最低场.目标化合物侧链中酰胺键不能自由旋转, 导致化合物7a和13a中同一个氮原子上的两个氢原子的化学位移不同, 各自呈现为单峰.

1.3 目标化合物的抗肿瘤活性研究

我们利用噻唑蓝(MTT)法测试了目标物7a~7i和13a~13k对人肝癌细胞(HepG2和SMMC-7721)、人宫颈癌细胞(Hela细胞)和急性早幼粒细胞白血病细胞(NB4细胞)等4种肿瘤细胞的体外抗肿瘤活性, 5-氟尿嘧啶(5-Fu)为阳性对照药, 无取代基的二萘并呋喃(化合物3)为阴性对照物, 抗肿瘤活性数据见表 1.

表 1

表 1 目标化合物抗肿瘤活性[IC₅₀^a/(μmol•L^－1)]^a

Table 1. Antiproliferative activities [IC₅₀^a/(μmol•L^－1)] of target compounds

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Compound	HepG2	SMMC-7721	Hela	NB4
7a	9.01±0.41	13.67±0.98	7.07±0.52	15.29±1.01
7b	5.31±0.21	40.68±2.71	6.31±0.42	12.59±1.16
7c	9.31±0.61	14.23±0.81	10.52±0.91	12.89±0.67
7d	20.11±1.01	18.47±1.05	17.31±1.13	16.98±1.12
7e	28.54±1.43	29.63±1.83	29.76±1.09	35.33±2.04
7f	21.72±1.62	22.86±1.52	35.23±1.81	37.48±2.28
7g	42.65±2.12	43.15±2.31	40. 58±2.45	＞50
7h	31.17±1.98	33.35±3.03	30.36±1.81	＞50
7i	9.35±0.32	10.91±0.25	14.78±0.95	16.44±1.03
13a	18.43±1.01	23.02±2.01	19.23±1.32	15.65±1.19
13b	35.41±1.97	＞50	37.24±1.89	35.3±1.85
13c	10.33±0.78	14.32±1.06	11.23±0.90	12.53±0.90
13d	11.22±0.67	26.47±1.49	13.65±0.78	15.91±1.09
13e	30.65±1.32	35.61±1.46	37.56±1.56	17.38±1.57
13f	＞50	27.77±2.12	39.63±2.32	21.62±1.37
13g	＞50	42.74±0.31	＞50	＞50
13h	35.25±2.61	＞50	35.25±2.61	41.39±3.71
13i	35.66±2.19	14.28±0.87	37.89±2.34	5.07±0.22
13j	＞50	＞50	28.41±2.12	＞50
13k	2.76±0.84	0.57±0.061	3.56±0.89	12.79±0.82
3	＞50	＞50	＞50	＞50
5-Fu	34.83±2.13	20.21±1.21	32.01±2.02	15.21±0.97
^a三次测定取平均值.

从表 1可见, 大多数化合物对4种肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用, 目标化合物7a~7i和13a~13k比阴性对照物化合物3具有更强的抗肿瘤活性, 后者未显示出明显的抗肿瘤活性(IC₅₀＞50 μmol•L^－1), 很多化合物比阳性对照药5-Fu具有更强的细胞抑制作用; 化合物13k对4种肿瘤细胞都具有很强的抑制作用, 特别是对肝癌细胞SMMC-7721的IC₅₀达到0.57 μmol•L^－1, 远低于5-Fu的20.21 μmol•L^－1.此外, 酰胺氮原子连有羟乙基的化合物7c和13c展现出强于5-Fu的细胞毒活性, 对4种肿瘤细胞的IC₅₀值均小于20 μmol•L^－1; 未被取代的酰胺化合物7a和13a对HepG2和Hela细胞的IC₅₀均小于20 μmol•L^－1, 显示出比5-Fu具有更强的肿瘤细胞抑制作用.氮原子上连有苄基的7g和13g的抗肿瘤活性最弱, 其IC₅₀值都大于40 μmol•L^－1.部分化合物对肿瘤细胞的抑制作用显示出了一定的细胞选择性, 例如, 化合物7b对HepG2、Hela和NB4具有较强的抑制作用, 其IC₅₀值分别为5.31、6.31和12.59 μmol•L^－1, 但对SMMC-7721抑制作用较弱, IC₅₀值为40.68 μmol•L^－1.

2. 结论

共设计并合成了20个新型二萘并呋喃二酰胺衍生物, 通过¹H NMR、¹³C NMR和HRMS和IR确认了目标物的结构.利用MTT法研究了目标物对HepG2、SMMC-7721、HeLa、NB4等4种肿瘤细胞的细胞毒实验, 多个化合物的抗肿瘤活性强于阳性药5-Fu, 其中化合物13k对4种肿瘤细胞的抑制作用都明显强于阳性药5-Fu, 尤其是对肝癌细胞SMMC-7721的IC₅₀比5-Fu低接近两个数量级, 有进一步研究的价值.

3. 实验部分

3.1 仪器与试剂

Bruker Avance 300和400 MHz核磁共振仪; Avatar 370 FT-IR型红外光谱仪; LCT Premier XE飞行时间质谱仪; X-6型熔点仪(未校正); SUNRISE酶标仪; TE 2000-U倒置显微镜; Revcol/lindberg CO₂培养箱.所用试剂和溶剂均为市售分析纯, 纯度为97%~99%, 未经纯化直接使用.

3.2 化合物的合成

3.2.1 中间体2和3的合成

中间体2参考相关文献[18]制得, 化合物3的制备过程如下:将外消旋化合物2 (28.6 g, 0.1 mol)、对甲基苯磺酸(3.4 g, 20 mmol)、3 mL浓硫酸和300 mL甲苯加入到在500 mL三颈瓶中, 在其上端装分水器, 将体系加热回流, 利用薄层色谱(TLC)监控反应, 20 h后反应结束, 减压除去部分甲苯, 冷却到室温析出大量固体, 抽滤, 固体用甲醇洗涤, 干燥, 再用甲苯重结晶得到二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃(3).无色结晶, 收率90.2%. m.p. 155~156 ℃(文献值^[19] 155~156 ℃); ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 9.16 (d, J＝8.6 Hz, 2H, H-1, 13), 8.07 (dd, J＝8.6, 1.4 Hz, 2H, H-4, 10), 7.95 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-5, 9), 7.83 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8), 7.74 (ddd, J＝8.4, 6.9, 1.4 Hz, 2H), 7.58 (ddd, J＝8.1, 6.9, 1.1 Hz, 2H).

3.2.2 中间体4的合成

将化合物3 (20 g, 75 mmol)和125 mL二氯甲烷加入250 mL圆底烧瓶中, 搅拌使其溶解, 分批加入27.9 g (157 mmol) NBS, 用TLC监测反应终点.室温反应12小时后反应结束, 加入200 mL的1 mol/L的NaOH水溶液, 抽滤, 滤饼分别用水、甲醇和二氯甲烷洗涤, 烘干, 甲苯重结晶得到化合物6, 8-二溴二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃(4).无色结晶, 收率80.7%. m.p. 208~210 ℃; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 9.00~9.08 (m, 2H, H-1, 13), 8.42~8.57 (m, 2H, H-4, 10), 8.14 (s, 2H, H-5, 9), 7.76 (td, J＝8.4, 1.5 Hz, 2H), 7.68 (td, J＝8.2, 1.3 Hz, 2H); ¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 153.5, 129.4, 128.8, 128.8, 127.1, 125.9, 125.7, 122.3, 119.1, 117.1; IR (KBr) ν: 3074, 1566, 1527, 1509, 1332, 1315, 1248 cm^－1.

3.2.3 中间体5的合成

将8.5 g (20 mmol)化合物4、4.1 g (45 mmol) CuCN、125 mL DMSO加入250 mL三颈瓶中, 加热至回流, TLC监测反应, 5 h后反应结束, 反应体系在搅拌下, 缓慢加入浓氨水, 抽滤, 滤饼用浓氨水洗至滤液无色, 再分别用水和氯仿洗涤, 干燥后得二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-6, 8-二腈(5).浅黄色固体, 收率82.3%. m.p. 247~249 ℃; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 9.05 (br.d, J＝8.4 Hz, 2H, H-1, 13), 8.41 (br. d, J＝8.4 Hz, 2H, H-4, 10), 8.23 (s, 2H, H-5, 9), 7.82 (br.t, J＝7.4 Hz, 2H), 7.74 (br.t, J＝7.4 Hz, 2H); ¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 153.3, 129.9, 128.4, 128.1, 127.4, 126.9, 125.9, 123.2, 119.1, 117.3, 111.0; IR (KBr) ν: 2223, 1601, 1566, 1531, 1442, 1379, 1322, 1238, 1052 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₂H₁₁N₂O [M+H]⁺ 319.0871, found 319.0868.

3.2.4 中间体6的合成

将9.5 g (30 mmol)化合物5, 4.8 g (120 mmol) NaOH, 80 mL乙二醇, 加入到150 mL三颈瓶中, 加热回流5 h后, 将反应产物进行减压蒸馏, 除去乙二醇, 向圆底烧瓶加入50 mL蒸馏水溶解产物的钠盐, 抽滤, 将滤液转移至烧杯中, 加浓盐酸酸化至pH＝3, 逐渐析出黄色的固体, 抽滤, 产品依次用水、乙醇洗涤, 减压干燥, 得到二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-6, 8-二羧酸(6).浅黄色固体, 收率92.4%. m.p.＞300; ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.03 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 9.01 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 8.50 (s, 2H, H-5, 9), 7.79~7.98 (m, 2H), 7.68~7.80 (m, 2H); ¹³C NMR (75 MHz, DMSO-d₆) δ: 168.6, 153.7, 130.2, 128.9, 128.6, 127.7, 127.5, 126.6, 125.7, 121.6, 116.1; IR (KBr) ν: 2945, 2605, 1692, 1577, 1531, 1443, 1426, 1408, 1286, 1245 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₂H₁₁O₅ [M－H]⁺ 355.0607, found 355.0610.

3.2.5 目标化合物7a的合成

在100 mL三颈瓶中加入化合物6 (1.42 g, 4 mmol), 氯仿(20 mL)和1滴DMF, 然后滴加二氯亚砜的氯仿溶液(4.4 mL二氯亚砜溶于10 mL氯仿中), 然后加热回流4 h, 体系由悬浊液变成黄色溶液, 减压蒸去溶剂, 得到中间体酰氯.将得到的酰氯溶于20 mL氯仿中, 向其中通入过量的氨气, 室温反应3 h, 将反应生成的白色沉淀过滤, 沉淀依次用氯仿和蒸馏水洗涤, 真空干燥, 得到二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-6, 8-二甲酰胺(7a).白色固体, 收率83.1%. m.p. 292~294 ℃; ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.10 (d, J＝8.4 Hz, 2H, H-1, 13), 8.53 (d, J＝8.3 Hz, 2H, H-4, 10), 8.24 (s, 2H, CONH×2), 8.16 (s, 2H, H-5, 9), 7.80~7.94 (m, 4H), 7.65~7.79 (m, 2H); ¹³C NMR (75 MHz, DMSO-d₆) δ: 170.4, 153.6, 136.3, 128.5, 128.3, 127.8, 127.6, 126.0, 125.7, 119.6, 112.3; IR (KBr) ν: 1650, 1601, 1445, 1403, 1325, 1253 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₂H₁₅N₂O₃ [M+H]⁺ 355.1083, found 355.1090.

3.2.6 目标化合物7b~7i的合成

将4 mmol化合物6制备成中间体酰氯(方法见第3.2.5节), 用尽量少的氯仿将其溶解.在100 mL三颈瓶中加入16 mmol相应的含氮化合物(其中甲胺、肼和二甲胺使用的是水溶液)和25 mL氯仿, 向其中滴加前面的酰氯溶液, 滴加完毕后室温反应, 利用薄层色谱监控反应, 反应2~3 h后, 将反应生成的白色沉淀过滤, 沉淀依次用氯仿和蒸馏水洗涤, 真空干燥, 得到化合物7b~7g.化合物7h、7i和7b~7g不同之处在于后处理过程, 反应完成后, 化合物7h和7i溶解在氯仿中, 将反应液加入蒸馏水萃取2次, 氯仿层硫酸镁干燥, 蒸去溶剂, 得到粗产物, 经石油醚/乙酸乙酯(V:V＝5:1)重结晶得到化合物7h和7i.

二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-6, 8-二酰肼(7b):白色固体, 收率88.7%. m.p. 291~293 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.92 (s, 2H, CONH×2), 9.11 (d, J＝8.5 Hz, 2H, H-1, 13), 8.45 (d, J＝8.3 Hz, 2H, H-4, 10), 8.09 (s, 2H, H-5, 9), 7.90 (t, J＝7.3 Hz, 2H), 7.72 (t, J＝7.6 Hz, 2H), 4.73 (s, 4H, NH₂×2); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 167.3, 152.9, 134.4, 128.1, 127.9, 127.2, 127.2, 125.5, 125.2, 119.2, 112.2; IR (KBr) ν: 1648, 1609, 1561, 1518, 1384, 1325, 1255 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₂H₁₇- N₄O₃ [M+H]⁺ 385.1301, found 385.1305.

N⁶, N⁸-二(2-羟乙基)二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-6, 8-二甲酰胺(7c):白色固体, 收率89.3%. m.p. 249~251 ℃; ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.10 (d, J＝8.5 Hz, 2H, H-1, 13), 8.73 (t, J＝5.6 Hz, 2H, CONH×2), 8.45 (dd, J＝8.5, 1.1 Hz, 2H, H-4, 10), 8.16 (s, 2H, H-5, 9), 7.84~7.92 (m, 2H), 7.68~7.75 (m, 2H), 4.83 (t, J＝5.4 Hz, 2H, OH×2), 3.64 (q, J＝5.8 Hz, 4H, NHCH₂CH₂OH×2), 3.48 (q, J＝5.8 Hz, 4H, NHCH₂CH₂OH×2); ¹³C NMR (75 MHz, DMSO-d₆) δ: 168.5, 153.6, 136.5, 128.4, 128.4, 127.8, 127.6, 126.0, 125.7, 119.6, 112.5, 60.3, 42.8; IR (KBr) ν: 3077, 2931, 2874, 1629, 1555, 1383, 1325, 1302, 1247, 1060 cm^－1; HR-MS (ESI) calcd for C₂₆H₂₃N₂O₅ [M+H]⁺ 443.1607, found 443.1601.

N⁶, N⁸-二甲基二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-6, 8-二甲酰胺(7d):白色固体, 收率84.1%. m.p. 294~296 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.11 (d, J＝8.4 Hz, 2H, H-1, 13), 8.71 (q, J＝4.6 Hz, 2H, CONH×2), 8.42 (d, J＝7.9 Hz, 2H, H-4, 10), 8.14 (s, 2H, H-5, 9), 7.89 (t, J＝7.3 Hz, 2H), 7.72 (t, J＝7.6 Hz, 2H), 2.93 (d, J＝4.6 Hz, 6H, CH₃×2); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 168.3, 153.0, 135.9, 127.9, 127.8, 127.2, 127.1, 125.5, 125.2, 119.1, 111.9, 26.3; IR (KBr) ν: 3078, 2937, 1641, 1626, 1568, 1407, 1327, 1310, 1251, 1155 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₉N₂O₃ [M+H]⁺ 383.1396, found 383.1392.

N⁶, N⁸-二丙基二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-6, 8-二甲酰胺(7e):白色固体, 收率79.8%. m.p. 266~268 ℃; ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.10 (d, J＝8.4 Hz, 2H, H-1, 13), 8.76 (t, J＝5.6 Hz, 2H, CONH×2), 8.40 (d, J＝8.4, 2H, H-4, 10), 8.10 (s, 2H, H-5, 9), 7.88 (t, J＝7.7 Hz, 2H), 7.60~7.78 (m, 2H), 3.37 (q, J＝6.7 Hz, 4H, NHCH2- CH₂CH₃×2), 1.65 (h, J＝7.2 Hz, 4H, NHCH₂CH₂CH₃×2), 1.00 (t, J＝7.4 Hz, 6H, NHCH₂CH₂CH₃×2); ¹³C NMR (75 MHz, DMSO-d₆) δ: 168.3, 153.6, 136.7, 128.4, 128.4, 127.6, 127.6, 126.0, 125.7, 119.5, 112.3, 41.6, 22.9, 12.1. IR (KBr) ν: 3072, 2961, 2931, 2871, 1638, 1624, 1557, 1440, 1327, 1300, 1248 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₈H₂₇N₂O₃ [M+H]⁺ 439.2022, found 439.2026.

N⁶, N⁸-二(2-甲基丙基)二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-6, 8-二甲酰胺(7f):白色固体, 收率81.0%. m.p. 264~266 ℃; ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.11 (d, J＝8.5 Hz, 2H, H-1, 13), 8.77 (t, J＝5.7 Hz, 2H, CONH×2), 8.39 (d, J＝8.1 Hz, 2H, H-4, 10), 8.10 (s, 2H, H-5, 9), 7.89 (t, J＝7.6 Hz, 2H), 7.61~7.80 (m, 2H), 3.24 (t, J＝6.3 Hz, 4H, NHCH₂CH(CH₃)₂×2), 1.89~2.02 (m, 2H, NHCH₂-CH(CH₃)₂×2), 1.00 (d, J＝6.7 Hz, 12H, NHCH₂CH- (CH₃)₂×2); ¹³C NMR (75 MHz, DMSO-d₆) δ: 168.5, 153.6, 136.7, 128.4, 128.4, 127.6, 127.6, 126.00, 125.7, 119.5, 112.2, 47.3, 28.7, 20.8; IR (KBr) ν: 3072, 2957, 2925, 2869, 1634, 1547, 1465, 1383, 1324, 1291, 1251 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₃₀H₃₁N₂O₃ [M+H]⁺467.2335, found 467.2339.

N⁶, N⁸-二苄基二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-6, 8-二甲酰胺(7g):白色固体, 收率82.3%. m.p. 287~289 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.34 (t, J＝5.9 Hz, 2H, CONH×2), 9.12 (d, J＝8.5 Hz, 2H, H-1, 13), 8.42 (d, J＝8.0 Hz, 2H, H-4, 10), 8.20 (s, 2H, H-5, 9), 7.90 (t, J＝7.5 Hz, 2H), 7.72 (t, J＝7.4 Hz, 2H), 7.47 (d, J＝7.3 Hz, 4H, H-2', 6', 2'', 6''), 7.41 (t, J＝7.6 Hz, 4H, H-3', 5', 3'', 5''), 7.31 (t, J＝7.2 Hz, 2H, H-4', 4''), 4.63 (d, J＝5.9 Hz, 4H, CH₂×2); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 167.9, 153.0, 139.3, 135.6, 128.4, 127.9, 127.9, 127.3, 127.1, 127.0, 126.9, 125.5, 125.2, 119.2, 112.0, 42.8; IR (KBr) ν: 3062, 2928, 1632, 1542, 1454, 1383, 1324, 1297, 1252 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₃₆H₂₇N₂O₃ [M+H]⁺ 535.2022, found 535.2026.

N⁶, N⁶, N⁸, N⁸-四甲基二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-6, 8-二甲酰胺(7h):白色固体, 收率78.7%. m.p. 187~189 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.15 (d, J＝8.5 Hz, 2H, H-1, 13), 8.07 (s, 2H, H-5, 9), 7.96 (d, J＝8.4 Hz, 2H, H-4, 10), 7.91 (t, J＝7.7 Hz, 2H), 7.74 (t, J＝7.3 Hz, 2H), 3.21 (s, 6H, CH₃×2), 2.82 (s, 6H, CH₃×2); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 168.5, 153.2, 135.8, 127.8, 127.3, 127.0, 126.4, 125.8, 125.5, 118., 110.7, 38.3, 34.3; IR (KBr) ν: 2926, 1627, 1500, 1450, 1398, 1323, 1146, 1124, 1005 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₆H₂₃N₂O₃ [M+H]⁺ 411.1709, found 411.1717.

N⁶, N⁶, N⁸, N⁸-四乙基二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-6, 8-二甲酰胺(7i):白色固体, 收率76.2%. m.p. 266~268 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.15 (d, J＝8.4 Hz, 2H, H-1, 13), 8.07 (s, 2H, H-5, 9), 7.89~7.96 (m, 4H), 7.75 (t, J＝7.6 Hz, 2H), 3.80 (br.s, 2H, NCH₂CH₃), 3.51 (br.s, 2H, NCH₂CH₃), 3.17 (br.s, 2H, NCH₂CH₃), 3.05 (br.s, 2H, NCH₂CH₃), 1.34 (t, J＝7.0 Hz, 6H, CH₂CH₃×2), 1.00 (t, J＝6.8 Hz, 6H, CH₂CH₃×2); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 168.0, 153.1, 136.0, 127.8, 127.4, 127.1, 126.1, 125.8, 125.5, 118.5, 110.1, 42.7, 36.8, 14.1, 12.9; IR (KBr) ν: 3061, 2980, 2932, 2873, 1628, 1475, 1458, 1432, 1324, 1284, 1253 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₃₀H₃₁-N₂O₃ [M+H]⁺ 467.2335, found 467.2340.

3.2.7 中间体8的合成

6-溴-2-萘酚(8)的合成参考相关文献[20].白色固体, 收率64%. m.p. 127~129 ℃(文献值124.5~127.5 ℃^[20]); ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.88 (s, 1H, OH), 8.02 (s, 1H), 7.74 (d, J＝9.2 Hz, 1H), 7.65 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 7.44~7.50 (m, 1H), 7.09~7.13 (m, 2H).

3.2.8 中间体9的合成

6, 6'-二溴-1, 1'-联萘-2, 2'-二酚(9)的合成和中间体2的合成方法相同.白色固体, 收率85.0%. m.p. 210~212 ℃(文献值202~204 ℃^[21]); ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.48 (s, 2H, OH×2), 8.12 (d, J＝2.1 Hz, 2H, H-5, 5'), 7.87 (d, J＝8.8 Hz, 2H), 7.35 (d, J＝8.9 Hz, 2H), 7.31 (dd, J＝9.0, 2.1 Hz, 2H, H-7, 7'), 6.85 (d, J＝9.0 Hz, 2H); IR (KBr) ν: 3481, 3415, 1613, 1589, 1500, 1382, 1350, 1313, 1215, 1166, 1144 cm^－1.

3.2.9 中间体10的合成

3, 11-二溴二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃(10)^[22]的合成和中间体3的合成方法相同.白色固体, 收率84.6%. m.p.＞300 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.96 (d, J＝9.1 Hz, 2H, H-1, 13), 8.53 (d, J＝2.2 Hz, 2H, H-4, 10), 8.19 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-5, 9), 8.13 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8), 7.95 (dd, J＝9.1, 2.2 Hz, 2H, H-2, 12); IR (KBr) ν: 1575, 1503, 1372, 1237, 1190, 1069, 1018 cm^－1.

3.2.10 中间体11的合成

二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-3, 11-二腈(11)的合成和中间体5的合成方法相同.浅黄色固体, 收率81.9%. m.p. 267~269 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.12 (d, J＝8.7 Hz, 2H, H-1, 13), 8.90 (d, J＝1.8 Hz, 2H, H-4, 10), 8.35 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-5, 9), 8.26 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8), 8.13 (dd, J＝8.7, 1.8 Hz, 2H, H-2, 12); IR (KBr) ν: 3068, 2923, 2852, 2224, 1619, 1375, 1241, 1018 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₂H₁₁N₂O [M+H]⁺ 319.0871, found 319.0878.

3.2.11 中间体12的合成

二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-3, 11-二羧酸(12)^[23]的合成和中间体6的合成方法相同.浅黄色固体, 收率89.2%. m.p.＞300 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.18 (s, 2H, COOH×2), 9.16 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-1, 13), 8.90 (d, J＝1.3 Hz, 2H, H-4, 10), 8.40 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-5, 9), 8.34 (dd, J＝8.9, 1.3 Hz, 2H, H-2, 12), 8.17 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8); IR (KBr) ν: 2921, 1647, 1327, 1176, 1091 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₂H₁₁O₅ [M－H]⁺ 355.0607, found 355.0611.

3.2.12 目标化合物13a~13k的合成

目标物13a~13i的合成和对应的目标物7a~7i的合成方法相同, 目标物13j、13k和目标物7b~7g的合成方法相同.

二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-3, 11-二甲酰胺(13a):白色固体, 收率84.1%. m.p. 270~272 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.11 (d, J＝8.8 Hz, 2H, H-1, 13), 8.80 (d, J＝1.5 Hz, 2H, H-4, 10), 8.30 (dd, J＝8.8, 1.5 Hz, 2H, H-2, 12), 8.27 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-5, 9), 8.24 (s, 2H, CONH×2), 8.14 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8), 7.56 (s, 2H, CONH×2); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 167.7, 154.6, 130.4, 130.2, 130.0, 129.6, 128.9, 125.3, 124.8, 118.1, 113.4; IR (KBr) ν: 3344, 3189, 1655, 1604, 1463, 1404, 1376, 1239, 1111, 1019 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₂H₁₅N₂O₃ [M+H]⁺ 355.1083, found 355.1080.

二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-3, 11-二酰肼(13b):白色固体.收率86.7%. m.p.＞300 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 10.03 (s, 2H, NH×2), 9.10 (d, J＝8.8 Hz, 2H, H-1, 13), 8.74 (d, J＝1.6 Hz, 2H, H-4, 10), 8.20~8.35 (m, 4H), 8.14 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8), 4.68 (s, 4H, NH₂×2); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 165.6, 154.5, 130.1, 129.9, 129.3, 129.0, 128.7, 124.9, 124.7, 118.1, 113.4; IR (KBr) ν: 3299, 1618, 1508, 1378, 1323, 1239 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₂H₁₇N₄O₃ [M+H]⁺ 385.1301, found 627. 385.1309.

N³, N¹¹-二(2-羟乙基)二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-3, 11-二甲酰胺(13c):白色固体, 收率90.3%. m.p. 247~249 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.12 (d, J＝8.8 Hz, 2H, H-1, 13), 8.77 (d, J＝1.7 Hz, 2H, H-4, 10), 8.72 (t, J＝5.5 Hz, 2H, CONH×2), 8.29 (dd, J＝8.8, 1.7 Hz, 2H, H-2, 12), 8.28 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-5, 9), 8.14 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8), 4.79 (t, J＝5.6 Hz, 2H, OH×2), 3.60 (q, J＝6.1 Hz, 4H, NHCH₂CH₂OH×2), 3.45 (q, J＝6.2 Hz, 4H, NHCH₂CH₂OH×2); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 166.1, 154.5, 130.5, 130.1, 129.8, 129.1, 128.7, 125.0, 124.8, 118.0, 113.3, 59.9, 42.4; IR (KBr) ν: 3321, 2939, 2876, 1636, 1549, 1382, 1304, 1242, 1055 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₆H₂₃N₂O₅ [M+H]⁺ 443.1607, found 443.1614.

N³, N¹¹-二甲基二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-3, 11-二甲酰胺(13d):白色固体, 收率80.9%. m.p.＞300 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.11 (d, J＝8.8 Hz, 2H, H-1, 13), 8.69~8.78 (m, 4H), 8.22~8.32 (m, 4H), 8.14 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8), 2.90 (d, J＝4.5 Hz, 6H, CH₃×2); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 166.4, 154.5, 130.6, 130.1, 129.8, 129.0, 128.7, 124.9, 124.9, 118.1, 113.3, 26.4; IR (KBr) ν: 3348, 3077, 2938, 1638, 1619, 1549, 1410, 1379, 1308, 1240 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₉N₂O₃ [M+H]⁺ 383.1396, found 383.1390.

N³, N¹¹-二丙基二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-3, 11-二甲酰胺(13e):白色固体, 收率79.3%. m.p. 258~260 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.12 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-1, 13), 8.70~8.76 (m, 4H), 8.24~8.32 (m, 4H), 8.14 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8), 3.31~3.41 (m, 4H, NHCH2CH2- CH₃×2), 1.66 (h, J＝7.4 Hz, 4H, NHCH₂CH₂CH₃×2), 0.96 (t, J＝7.4 Hz, 6H, NHCH₂CH₂CH₃×2); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 165.9, 154.6, 130.9, 130.2, 130.0, 129.0, 128.8, 125.2, 125.0, 118.2, 113.5, 41.1, 22.5, 11.5. IR (KBr) ν: 3328, 2962, 2932, 2873, 1638, 1619, 1542, 1378, 1310, 1240 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₈H₂₇N₂O₃ [M+H]⁺ 439.2022, found 439.2024.

N³, N¹¹-二(2-甲基丙基)二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃- 3, 11-二甲酰胺(13f):白色固体, 收率78.7%. m.p. 183~185 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.13 (d, J＝8.8 Hz, 2H, H-1, 13), 8.70~8.76 (m, 4H), 8.24~8.33 (m, 4H), 8.14 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8), 3.21 (t, J＝6.3 Hz, 4H, NHCH₂CH(CH₃)₂×2), 1.89~1.98 (m, 2H, NHCH₂CH-(CH₃)₂×2), 0.97 (d, J＝6.7 Hz, 12H, NHCH₂CH(CH₃)₂× 2); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 166.1, 154.6, 131.0, 130.2, 129.9, 129.0, 128.8, 125.2, 124.9, 118.2, 113.4, 46.9, 28.2, 20.3; IR (KBr) ν: 3293, 2959, 2925, 2870, 1638, 1542, 1508, 1293, 1240 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₃₀H₃₁N₂O₃ [M+H]⁺ 467.2335, found 467.2337.

N³, N¹¹-二苄基二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-3, 11-二甲酰胺(13g):白色固体, 收率87.7%. m.p. 266~268 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.33 (t, J＝5.9 Hz, 2H, NH×2), 9.14 (d, J＝8.8 Hz, 2H, H-1, 13), 8.81 (d, J＝1.7 Hz, 2H, H-4, 10), 8.32 (dd, J＝8.8, 1.7 Hz, 2H, H-2, 12), 8.29 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-5, 9), 8.15 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8), 7.32~7.44 (m, 8H), 7.27 (t, J＝7.1 Hz, 2H, H-4', 4''), 4.60 (d, J＝5.9 Hz, 4H, CH₂×2); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 166.0, 154.7, 139.7, 130.6, 130.2, 130.0, 129.2, 128.9, 128.3, 127.3, 126.8, 125.2, 125.1, 118.2, 113.6, 42.8; IR (KBr) ν: 3274, 3061, 3029, 1635, 1541, 1453, 1304, 1239 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₃₆H₂₇N₂O₃ [M+H]⁺ 535.2022, found 535.2027.

N³, N³, N¹¹, N¹¹-四甲基二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-3, 11-二甲酰胺(13h):浅黄色固体, 收率77.3%. m.p. 274~276 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.12 (d, J＝8.7 Hz, 2H, H-1, 13), 8.33 (d, J＝1.6 Hz, 2H, H-4, 10), 8.26 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-5, 9), 8.13 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8), 7.88 (dd, J＝8.7, 1.7 Hz, 2H, H-2, 12), 3.09 (s, 12H, N(CH₃)₂×2); ¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 171.4, 155.0, 132.3, 130.5, 129.0, 128.9, 128.6, 125.5, 125.0, 119.2, 113.5, 39.8, 35.5; IR (KBr) ν: 2927, 2779, 1628, 1491, 1394, 1265, 1239, 1179 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₆H₂₃N₂O₃ [M+H]⁺ 411.1709, found 411.1714.

N³, N³, N¹¹, N¹¹-四乙基二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-3, 11-二甲酰胺(13i):白色固体, 收率72.6%. m.p. 160~162 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.13 (d, J＝8.7 Hz, 2H, H-1, 13), 8.27 (overlapping d, J＝9.1 Hz, 4H), 8.13 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8), 7.81 (dd, J＝8.7, 1.7 Hz, 2H, H-2, 12), 3.51 (br.s, 4H, CH₂CH₃×2), 3.31 (br.s, 4H, CH₂CH₃×2), 1.19 (br.s, 12H, N(CH₂CH₃)2×2); ¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 171.0, 154.9, 133.3, 130.6, 128.9, 128.6, 127.6, 125.6, 124.5, 119.2, 113.5, 43.4, 39.5, 14.3, 13.2; IR (KBr) ν: 2973, 2934, 1618, 1475, 1428, 1376, 1284, 1238 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₃₀H₃₁N₂O₃ [M+H]⁺ 467.2335, found 467.2340.

N³, N¹¹-二环己基二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-3, 11-二甲酰胺(13j):白色固体, 收率94.7%. m.p.＞300 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.11 (d, J＝8.8 Hz, 2H, H-1, 13), 8.74 (d, J＝1.5 Hz, 2H, H-4, 10), 8.48 (d, J＝7.9 Hz, 2H, NH×2), 8.22~8.30 (m, 4H), 8.14 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8), 3.88 (br.s, 2H), 1.89~1.96 (m, 4H), 1.74~1.83 (m, 4H), 1.65 (d, J＝12.8 Hz, 2H), 1.29~1.46 (m, 8H), 1.13~1.25 (m, 2H); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 165.1, 154.6, 131.1, 130.2, 130.0, 129.0, 128.8, 125.4, 124.9, 118.2, 113.5, 48.5, 32.5, 25.3, 25.0; IR (KBr) ν: 3256, 2930, 2852, 1633, 1619, 1547, 1450, 1321, 1240 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₃₄H₃₅N₂O₃ [M+H]⁺519.2648, found 519.2641.

N³, N¹¹-二羟基二萘并[2, 1-b:1', 2'-d]呋喃-3, 11-二甲酰胺(13k):白色固体, 收率83.8%. m.p. 155~157 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 11.50 (br.s, 2H, OH×2), 9.16 (br.s, 2H, NH×2), 9.11 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-1, 13), 8.67 (s, 2H, H-4, 10), 8.29 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-5, 9), 8.19 (dd, J＝8.8, 1.6 Hz, 2H, H-2, 12), 8.14 (d, J＝8.9 Hz, 2H, H-6, 8); ¹³C NMR (101 MHz, DMSO-d₆) δ: 163.9, 154.6, 130.2, 129.9, 128.9, 128.9, 128.8, 125.0, 124.7, 118.1, 113.5; IR (KBr) ν: 3199, 2975, 2938, 2677, 1637, 1618, 1398, 1378, 1238 cm^－1; HRMS (ESI) calcd for C₂₂H₁₅-N₂O₅ [M+H]⁺ 387.0981, found 387.0989.

3.3 体外抗肿瘤活性测试

采用MTT法测试化合物的体外抗肿瘤活性, 4种肿瘤细胞分别为人肝癌细胞(HepG2和SMMC-7721)、人宫颈癌细胞(HeLa细胞)和白血病细胞(NB4细胞).

将对数生长期的肿瘤细胞用含10%(体积分数)胚牛血清的RPMI1640培养液调整细胞数为2000~20000个/mL, 加入到96孔板中(每空100 μL).在37 ℃、5% CO₂条件下培养12~24 h后, 加入样品, 样品的浓度分别为100, 50, 25, 12.5, 6.2, 3.1, 0 μmol•L^－1, 设3个复孔.在此条件下继续培养48 h后, 弃去带样品的培养液, 再补充100 µL培养液.每孔加入5 mg/mL的MTT溶液20 µL, 37 ℃反应4 h后, 除去上清液, 每孔加入100 µL DMSO, 振荡10 min, 使结晶物充分溶解.用酶联免疫检测仪在490 nm(贴壁细胞)或570 nm(悬浮细胞)测量各孔的吸光值(OD值).根据不同样品浓度下的抑制率, 利用SPSS软件计算出求出IC₅₀值.实验重复3次, 结果取平均值.

辅助材料(Supporting Information) 所有化合物的¹H NMR、¹³C NMR谱图.这些材料可以免费从本刊网站(http://sioc-journal.cn/)上下载.

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图 1 二萘并吡喃和二萘并呋喃类化合物的结构

Figure 1 Structures of dinaphthopyran and dinaphthofuran compounds

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图式 1 目标化合物7a~7i的合成

Scheme 1 Synthetic route of the target compounds 7a~7i

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Scheme 2 目标化合物13a~13k的合成

Scheme 2 Synthetic route of the target compounds 13a~13k

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表 1 目标化合物抗肿瘤活性[IC₅₀^a/(μmol•L^－1)]^a

Table 1. Antiproliferative activities [IC₅₀^a/(μmol•L^－1)] of target compounds

Compound	HepG2	SMMC-7721	Hela	NB4
7a	9.01±0.41	13.67±0.98	7.07±0.52	15.29±1.01
7b	5.31±0.21	40.68±2.71	6.31±0.42	12.59±1.16
7c	9.31±0.61	14.23±0.81	10.52±0.91	12.89±0.67
7d	20.11±1.01	18.47±1.05	17.31±1.13	16.98±1.12
7e	28.54±1.43	29.63±1.83	29.76±1.09	35.33±2.04
7f	21.72±1.62	22.86±1.52	35.23±1.81	37.48±2.28
7g	42.65±2.12	43.15±2.31	40. 58±2.45	＞50
7h	31.17±1.98	33.35±3.03	30.36±1.81	＞50
7i	9.35±0.32	10.91±0.25	14.78±0.95	16.44±1.03
13a	18.43±1.01	23.02±2.01	19.23±1.32	15.65±1.19
13b	35.41±1.97	＞50	37.24±1.89	35.3±1.85
13c	10.33±0.78	14.32±1.06	11.23±0.90	12.53±0.90
13d	11.22±0.67	26.47±1.49	13.65±0.78	15.91±1.09
13e	30.65±1.32	35.61±1.46	37.56±1.56	17.38±1.57
13f	＞50	27.77±2.12	39.63±2.32	21.62±1.37
13g	＞50	42.74±0.31	＞50	＞50
13h	35.25±2.61	＞50	35.25±2.61	41.39±3.71
13i	35.66±2.19	14.28±0.87	37.89±2.34	5.07±0.22
13j	＞50	＞50	28.41±2.12	＞50
13k	2.76±0.84	0.57±0.061	3.56±0.89	12.79±0.82
3	＞50	＞50	＞50	＞50
5-Fu	34.83±2.13	20.21±1.21	32.01±2.02	15.21±0.97
^a三次测定取平均值.

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通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com

1.
沈阳化工大学材料科学与工程学院沈阳 110142