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增强型超分子荧光探针对拉帕替尼的识别及其在细胞成像中的应用

王成会 ,  唐青 ,  席芸芸 ,  杨梅 ,  李涛 ,  黄英 ,  陶朱

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引用本文: 王成会, 唐青, 席芸芸, 杨梅, 李涛, 黄英, 陶朱. 增强型超分子荧光探针对拉帕替尼的识别及其在细胞成像中的应用[J]. 有机化学, 2018, 38(6): 1394-1400. doi: 10.6023/cjoc201711018 shu
Citation:  Wang Chenghui, Tang Qing, Xi Yunyun, Yang Mei, Li Tao, Huang Ying, Tao Zhu. A Turn-On Supramolecular Fluorescent Probe for Sensing Lapatinib and Its Application in Living Cell Imaging[J]. Chinese Journal of Organic Chemistry, 2018, 38(6): 1394-1400. doi: 10.6023/cjoc201711018 shu

增强型超分子荧光探针对拉帕替尼的识别及其在细胞成像中的应用

  • a.

    贵州大学西南药用生物资源教育部工程研究中心 贵阳 550025

  • b.

    贵州大学贵州省大环化学及超分子化学重点实验室 贵阳 550025

  • c.

    贵州大学烟草学院 贵阳 550025

    • 通讯作者: 黄英, yinghung128@163.com
  • 基金项目:

    国家自然科学基金（No.21562015）、贵州省优秀青年科技人才培养计划（No.[2017]5636）、贵州省科学技术基金（No.[2014]2005）、贵州省普通高等学校科技拔尖人才支持计划（No.[2016]059）、贵州省科技厅联合基金（No.[2014]7658）、贵州大学研究生创新基金（No.2017001）资助项目

摘要: 通过超分子识别设计了八元瓜环与派洛宁Y超分子荧光探针2PyY@Q[8]，研究了该探针对抗癌药物拉帕替尼的识别性质.研究结果表明，该探针在水溶液中对拉帕替尼具有良好的识别能力及选择性，在一定浓度范围内其线性关系良好，其检出限为1.44×10-8 mol/L.细胞成像结果显示该探针在前列腺癌细胞中对拉帕替尼具有很好的响应，可用于生物细胞内拉帕替尼的识别检测.

English

  • 拉帕替尼(Lapatinib ditosylate, LD)是2007年3月由美国食品药品管理局(FDA)批准上市的治疗晚期乳腺癌的新药.该药由葛兰素史克公司开发研制, 商品名为Tykerb, 为口服缓释片[1].在治疗晚期或转移性乳腺癌方面具有独特的优势, 与抗癌药物卡培他滨联用可用于治疗晚期或转移性乳腺癌[2~4].常见检测拉帕替尼的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)、高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)[5~8].上述检测方法能实现定量检测, 但所需仪器昂贵, 分析成本高, 而且对生物样品有一定的破坏性, 无法实现对生物样品的活体检测.体外细胞成像技术是一种在细胞或组织水平进行高分辨率成像的技术, 在发现和鉴别药物靶点、新化合物毒性筛选以及安全性评价中得到广泛应用.

    超分子荧光探针法是由具有空腔结构的主体分子作为外来物质的接受体, 主体分子和荧光分子通过非共价作用可以形成超分子荧光探针, 待检测物质与超分子荧光探针的作用改变了发光体的微环境, 引起其发光行为变化.通过测发光体发光特性的变化就可以实现对待检测物质的选择性识别和测定.该方法具有灵敏度高、选择性好、无损伤、快速等优点, 在对生物样品检测方面具有独特的优势[9~15].瓜环(cucurbit[n]urils, Q[n])是由苷脲单元通过亚甲基桥联起来的大环笼状化合物(图 1), 由于瓜环空腔内外的极性等存在差别, 荧光物质在瓜环空腔内或外面时, 其荧光性质有可能会发生显著的变化, 利用这一性质, 可通过瓜环与具有强荧光或弱荧光的客体分子构成超分子荧光探针, 待检测分子与超分子荧光探针的作用改变了发光体的微环境, 通过检测发光体发光特性的变化来实现对待测分子的测定[16~21].

    图 1

    图 1.  探针2PyY@Q[8]对拉帕替尼的可能识别模式
    Figure 1.  Sensing behavior of 2PyY@Q[8] probe to LD
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    本工作设计了一种水溶性增强型超分子荧光探针, 氧杂蒽类染料派洛宁Y (Pyronine Y, PyY)与八元瓜环(Q[8])通过非共价形成2PyY@Q[8]配合物, 使其可以在水溶液中实现对无荧光性质的抗癌药物拉帕替尼的选择性识别, 并在细胞中实现对拉帕替尼的可视化检测.

    1.   结果与讨论

    1.1   荧光探针2PyY@Q[8]对拉帕替尼的识别研究

    PyY为常见氧杂蒽类染料, 水溶液中具有强荧光(Фf＝0.46±0.015), 加入Q[8]后, 溶液荧光降低, 通过非共价键与Q[8]形成了2PyY@Q[8]超分子配合物(Фf＝0.19±0.028), 与参考文献一致[17, 22].在水溶液中, 拉帕替尼(LD)无荧光, 当加入Q[8]后能与Q[8]形成1：1主客体配合物[23].

    由于Q[8]具有较大的空腔尺寸, 能选择性地包结两个客体分子并显示出特有性质[24~28].因此, 在本工作中, 我们以2PyY@Q[8]作为超分子荧光探针, 考察了抗癌药物拉帕替尼对2PyY@Q[8]探针光谱的影响.如图 2a所示, 当逐渐滴加LD到2PyY@Q[8]溶液中时, 在501 nm处的紫外-可见吸收光谱逐渐降低, 并红移到509 nm.然而在542 nm的吸收峰逐渐升高并经移到548 nm, 并且在521 nm有一等电吸收点.探针2PyY@Q[8]溶液有两个激发波长和发射波长(λex1/λem1＝377 nm/455 nm, λex2/λem2＝542 nm/572 nm), 最大激发波长和发射波长λex/λem＝542 nm/572 nm(如图S1, 支撑材料).以λex＝542 nm为激发波长, 探针2PyY@Q[8]水溶液在572 nm显示弱荧光, 加入LD后却使溶液的荧光逐渐增强, 而且从572 nm红移到579 nm(图 2b), 也就是说, 2PyY@ Q[8]溶液的荧光被LD打开了.在365 nm紫外灯照射下, 2PyY@Q[8]溶液呈现蓝色荧光, 当加入LD后, 却呈现黄色荧光(Фf＝0.59±0.056)(图 2b插图).从上述分析可知, LD可使2PyY@Q[8]溶液的荧光增强, 因此利用此种超分子荧光探针的荧光增强效应, 构筑一种新颖的增强型超分子荧光探针来识别拉帕替尼.

    图 2

    图 2.  2PyY@Q[8]与拉帕替尼在Tris-HCl溶液(pH＝5)中的紫外-可见吸收光谱(a)和荧光光谱(λex＝542 nm) (b)

    Inset: Fluorescence color changes of 2PyY@Q[8] solution before and after addition of LD (10 μmol/L) under illumination at 365 nm with a portable UV lamp

    Figure 2.  (a) UV-vis absorption spectra changes and (b) fluorescence spectra (λex＝542 nm) changes of 2PyY@Q[8] (10 μmol/L) in solution upon addition of increasing amounts of LD (0~10 μmol/L) in Tris-HCl (pH＝5)
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    1.2   探针2PyY@Q[8]与LD作用机理的探讨

    为了探讨2PyY@Q[8]超分子荧光探针对拉帕替尼(LD)的作用机制, 在已知PyY@Q[8]作用机理的基础上, 利用氢核磁共振波谱(1H NMR)考察了超分子荧光探针2PyY@Q[8]与LD相互作用情况.比较图 3b和3c可看出, 作用PyY以及游离PyY的氢核磁共振波谱有了明显的差异, 这说明有一部分进入瓜环空腔内(如Ha, Hb, Hc, Hd向高场移动了δ 0.11, 0.63, 0.29, 0.06), 受到了瓜环的屏蔽作用, 而另一部分处于瓜环端口处的去屏蔽区(如He向低场移动了δ 0.54), 故其质子共振峰向低场移动.此时作用体系在365 nm紫外灯照射下呈现弱的蓝色荧光(图 3c插图).同样比较图 3e和3f可看出, 作用LD与游离LD的氢核磁共振波谱有了明显的差异, 说明LD与Q[8]发生了相互作用.结合chemdraw对作用LD与游离LD的氢核磁共振波谱的指认推测LD有一部分进入瓜环空腔内(如LD的8、9、10、12、13、14质子向高场移动分别移动了δ 0.34、0.21、0.30、1.01、0.66和0.89), 受到了瓜环的屏蔽作用, 对应的作用体系呈绿色荧光(图 3e插图), 而游离LD没有荧光(图 3f插图).随着LD滴入2PyY@Q[8] (图 3d) LD质子共振峰进一步发生变化(如8、9、10质子向高场移动, 既非游离的LD, 亦非单独与Q[8]作用的LD (图 3f及3e), 而这样的作用体系呈现很强的黄色荧光(图 3d插图).为此我们推测可能形成了Q[8]：PyY：LD为1：1：1的作用模式.

    图 3

    图 3.  (a) Q[8], (b) PyY, (c) PyY/Q[8] (2：1), (d) PyY/Q[8]//LD (2：1：1), (e) Q[8]/LD (1：1)和(f) LD的1H NMR谱图

    Inset: corresponding fluorescence photographs under illumination at 365 nm with a portable UV lamp

    Figure 3.  1H NMR spectra (400 MHz) of (a) Q[8], (b) PyY, (c) PyY/Q[8] (2:1), (d) PyY/Q[8]/LD (2:1:1), (e) Q[8]/LD (1:1) and (f) LD
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    为了进一步探讨2PyY@Q[8]超分子荧光探针对LD的作用机制, 等温滴定量热法(ITC)提供了Q[8]-PyY和Q[8]-LD的热力学常数. Q[8]与PyY的结合常数为Ka1＝(5.35±0.02)×107 L•mol-1, Ka2＝(1.12±0.02)×106 L•mol-1, Q[8]与LD的结合常数为Ka＝(3.58±0.06)×106 L•mol-1, 表明Q[8]与PyY及LD的作用是一个相互竞争的过程.因此我们推测探针2PyY@Q[8]与药物LD结合后, 由于PyY和LD与Q[8]是相互竞争的作用, 因此LD可替换出一分子PyY, 从而可能形成Q[8]：PyY：LD为1：1：1的作用模式(图 1).

    1.3   pH对探针2PyY@Q[8]和2PyY@Q[8]-LD荧光光谱的影响

    为了考察pH对探针2PyY@Q[8]及探针检测LD的影响, 测定了不同pH值下探针2PyY@Q[8]与2PyY@Q[8]-LD的荧光强度, 如图 4所示. 2PyY@Q[8]在pH 2~10的范围内, pH值对探针荧光强度产生影响较小.当在探针中加入LD后, 在pH 2~5.5范围内产生强的荧光响应信号, 这表明2PyY@Q[8]能在该范围内对LD进行检测, 因此测试时选用pH 5的Tris-HCl溶液.

    图 4

    图 4.  在不同pH值的Tris-HCl溶液中, 探针2PyY@Q[8] (10 μmol/L)及2PyY@Q[8]-LD (10 μmol/L)荧光强度的变化(λex＝542 nm)
    Figure 4.  Change in fluorescence intensity of probe 2PyY@Q[8] (10 μmol/L) and 2PyY@Q[8]-LD (10 μmol/L) under different pH in Tris-HCl (λex＝542 nm)
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    1.4   探针2PyY@Q[8]对LD的选择性

    为了评述探针2PyY@Q[8]对LD的选择性, 在2PyY@Q[8]为10 μmol/L的水溶液中, 分别加入拉帕替尼, 其他替尼类药物:如索拉菲尼(ST)、尼罗替尼(Tasigna)、达沙替尼(DASA)、舒尼替尼(SM), 常见药物赋形剂:如葡萄糖(Glu)、果糖(Fru)、乳糖(Lac)、糊精(Dextrin)、硬脂酸镁(MgSt)、淀粉(Starch)、羧甲基纤维素钠(CMC)、聚维酮(PVP)及生物体液常见离子(Na+, Cl-, K+, Fe3+, Ca2+, Zn2+), 测定溶液荧光发射光谱.如图 5所示, 只有存在拉帕替尼时, 探针溶液的荧光发射强度发生显著增强, 而在探针中加入上述物质时, 荧光强度几乎未发生变化, 表明荧光探针对LD具有良好的选择性.

    图 5

    图 5.  在Tris-HCl (pH＝5)溶液中探针2PyY@Q[8] (10 μmol/L)加入LD (5 μmol/L)和其他物质(常见离子、药物赋形剂、其他药物)的荧光发射光谱(λex＝542 nm)
    Figure 5.  Fluorescence spectra of 2PyY@Q[8] (10 μmol/L) with LD (5 μmol/L), different metal ions, drug excipients and drugs (λex＝542 nm) in Tris-HCl (pH＝5)
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    进一步研究上述物质对荧光探针2PyY@Q[8]及2PyY@Q[8]检测LD的干扰情况, 当荧光强度改变值相对误差不超过±5%时, 可以认为该物质干扰影响较小.结果如图 6所示, 100倍的常见药物赋形剂、1倍的其他替尼类药物对探针2PyY@Q[8]及探针检测LD不发生干扰, 生物体液常见离子(300倍Na+, 100倍的K+, Cl-, Ca2+, Fe3+, Zn2+)对荧光探针不发生干扰, 生物体液常见离子(150倍Na+, 500倍的K+, Cl-, Ca2+, 300倍的Fe3+, 250倍的Zn2+)对荧光探针检测LD不发生干扰, 因此上述干扰物质对荧光探针2PyY@Q[8]及荧光探针识别LD具有良好的抗干扰能力.

    图 6

    图 6.  在Tris-HCl (pH＝5)溶液中干扰物对探针2PyY@Q[8] (10 μmol/L)及探针检测LD (5 μmol/L)的荧光强度变化(λex＝542 nm)
    Figure 6.  Fluorescence intensity changes of 2PyY@Q[8] (10 μmol/L) and 2PyY@Q[8] (10 μmol/L)+LD (5 μmol/L) with drug excipients, another drugs and different metal ions (λex＝542 nm) in Tris-HCl (pH＝5)
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    1.5   线性范围与检出限

    LD能使探针2PyY@Q[8]的荧光强度增强, 且在一定范围内呈线性关系.当LD浓度在10×10-8~250×10-8 mol/L范围内, LD的浓度与2PyY@Q[8]的荧光强度的增强值呈线性关系, 实验结果如图 7所示, 线性方程为: ΔF＝1.98c+28.31 (R＝0.995).依照IUPAC规定, CL＝KS0/S, 其中CL为检出限, K为与置信水平相关的常数, S0为10次空白溶液测定值的标准偏差, S为校正曲线的斜率.当置信水平为90%时K取3, 计算求得LD的检出限为1.44×10-8 mol/L.

    图 7

    图 7.  在pH＝5的Tris-HCl溶液中, 滴加不同浓度LD (0.1~2.5 μmol/L)时2PyY@Q[8](10 μmol/L)荧光强度变化曲线
    Figure 7.  A plot of fluorescence intensity changes of 2PyY@Q[8] (10 μmol/L) with increasing concentrations (0.1~2.5 μmol/L) of LD in Tris-HCl (pH＝5)
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    1.6   细胞成像研究

    为了研究探针2PyY@Q[8]在活细胞中对药物的检测应用, 通过CCK-8法测试了探针对PC3细胞的细胞毒性.实验结果如图 8所示, 探针在细胞中培养24 h后, 细胞的存活率大于90%.因此探针对PC3细胞的细胞毒性低, 可用于细胞内药物的检测.

    图 8

    图 8.  PC3细胞在5和10μmol/L的2PyY@Q[8]溶液中培养24 h后的存活率
    Figure 8.  Relative cell viability of PC3 cells in the presence of 5 and 10 μmol/L 2PyY@Q[8] after 24 h incubation
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    在细胞成像实验中, 以添加10%~15%胎牛血清及1%双抗(青霉素+链霉素)的1640基础培养基, 在37 ℃含5% CO2的培养箱内培养PC3细胞(前列腺癌细胞).将PC3细胞与LD (5.0×10-6 mol/L)共同孵育30 min后用1640基础培养基洗涤3次, 再用磷酸钾盐缓冲溶液(pH＝5)淋洗, 并采集明场和红色光路下图像(图 9a, 9b).再往上述细胞中加入探针2PyY@Q[8] (1×10-5 mol/L)孵育30 min, 用新鲜的1640基础培养基洗涤细胞3次后再用PBS缓冲液洗涤后成像, 采集明场和红色光路下图像(图 9c, 9d).探针单独孵育的PC3细胞只有微弱的荧光(图 9f), 当细胞中存在LD时, 观察到很强的红色荧光(图 9d).这些结果表明探针具有良好的细胞渗透性, 可以用来检测活细胞中的LD.

    图 9

    图 9.  PC3细胞经过LD (a, b)、2PyY@Q[8]+LD (c, d)及探针2PyY@Q[8] (e, f)孵育后的荧光成像图(红色光路, λex＝510~550 nm)
    Figure 9.  Fluorescence imaging of PC3 cells incubated with LD (a, b), 2PyY@Q[8]+LD (c, d), and probe 2PyY@Q[8] (e, f) (excited with red light, λex＝510~550 nm)
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    2.   结论

    基于超分子识别作用构筑了八元瓜环/派洛宁Y荧光探针, 在pH＝5的Tris-HCl溶液中, 研究了荧光探针识别抗癌药物拉帕尼替具有检出限低、快速、灵敏等优点, 检出限为1.44×10-8 mol/L; 用氢核磁共振波谱及等温滴定量热法探讨了八元瓜环/派洛宁Y荧光探针对拉帕替尼光响应机理.此外, 细胞成像研究结果表明探针对PC3细胞的细胞毒性低, 探针可以实现对拉帕替尼的灵敏, 快速检测, 且具有生物应用价值.

    3.   实验部分

    3.1   仪器与试剂

    Agilent 8453型紫外-可见分光光度计, VARIAN荧光光度计, pHS-3C型pH计, HERAcell 150i型二氧化碳细胞培养箱, OLYMPUS IX71荧光倒置显微镜, 苏净SW-CJ-1D单人净化工作台, Nano ITC等温滴定量热仪, 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS).八元瓜环由实验室按文献[29]制备, 派洛宁Y (Pyronine Y)购自阿拉丁试剂(上海), 拉帕替尼(Lapatinib ditosylate, LD)、索拉菲尼(ST), 尼罗替尼(Tasigna), 达沙替尼(DASA)及舒尼替尼(SM)购自南京奇可医药化工有限公司, 水为超纯水. PC3细胞从贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室获得.

    3.2   实验方法

    3.2.1   探针的合成

    称取PyY 7.6 mg和Q[8] 18.9 mg混合, 用二次蒸馏水溶解配制成250 mL, 得到摩尔浓度比为2：1, 摩尔浓度为1×10-4 mol/L探针2PyY@Q[8]溶液.

    Q[8]: 1H NMR (400 MHz, D2O) δ: 4.01 (d, J＝16 Hz, 16H), 5.33 (s, 16H), 5.61 (d, J＝16 Hz, 16H).

    PyY: 1H NMR (400 MHz, D2O) δ: 2.93 (s, 12H), 6.22 (s, 1H), 6.65 (d, J＝12 Hz, 2H), 7.23 (d, J＝8 Hz, 2H), 7.87 (s, 1H).

    2PyY/Q[8]: 1H NMR (400 MHz, D2O) δ: 2.82 (s, 12H), 3.96 (d, 16H), 5.24 (s, 16H), 5.53 (d, J＝16 Hz, 16H), 5.59 (s, 1H), 6.36 (d, 2H), 7.17 (d, 2H), 8.41 (s, 1H); ESI-MS m/z: 967.6978 (2PyY@Q[8]/2+).

    3.2.2   光谱的测定

    配置2PyY@Q[8]浓度为1.00×10-4 mol/L的母液备用. LD用pH＝2的盐酸水溶液配制成4.00×10-5 mol/L的母液备用.

    采用摩尔比法进行测定:依次向若干10 mL容量瓶中加入1 mL的2PyY@Q[8]溶液, 随后向其中分别加入0, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.3 0.4 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0倍的LD溶液, 加入pH 5的Tris-HCl溶液, 定容.放置10 min, 于200~600 nm范围内测定溶液的紫外-可见吸收光谱.样品池为1 cm×1 cm石英比色皿, 激发和发射狭缝宽为5 nm, 激发波长为542 nm, 电压为480 V, 测定体系的荧光发射光谱.

    3.2.3   荧光量子产率测定

    根据文献[30, 31]用罗丹明B作为基准物, 测定PyY、2PyY@Q[8]及2PyY@Q[8]-LD体系的荧光量子产率, 按照以下公式进行计算:

    YU＝YS×FU/FS×AS/AU

    其中YU为待测物的荧光量子产率, YS为标准物的荧光量子产率, FU、FS为待测样、标准物稀溶液的积分荧光强度, AU、AS为待测样、标准物对在激发波长的处吸光度值.

    3.2.4   氢核磁共振谱的测定

    1H NMR谱图在25 ℃下用VARIAN INOVA-400 MHz核磁共振仪测定, 氘代水(pD 5)为溶剂.

    3.2.5   等温滴定量热测定

    向样品池内注入1.3 mL浓度为4.00×10-5 mol/L的PyY溶液, 并取浓度为1.00×10-4 mol/L的Q[8]于250 μL的进样针内, 每次滴加6 μL, 时间间隔250 s.向样品池内注入1.3 mL浓度为4.00×10-5 mol/L的LD溶液, 并取浓度为1.00×10-4 mol/L的Q[8]于250 μL的进样针内, 每次滴加12 μL, 时间间隔250 s.在25 ℃的条件下采用Nano ITC等温滴定量热仪测定热力学参数.

    3.2.6   分析参数的测定

    固定探针2PyY@Q[8]体系浓度为10 μmol/L, 分别加入10×10-8~250×10-8 mol/L的拉帕替尼, 测定荧光光谱, 以荧光发射强度变化量(ΔF)为纵坐标, 拉帕替尼浓度(c)为横坐标绘制校正曲线, 依照IUPAC规定, 计算得到测定方法检出限.

    3.2.7   细胞毒性和细胞成像

    细胞毒性实验:使用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)方法进行PC3细胞中2PyY@Q[8]包合物的毒性测定.以添加10%~15%胎牛血清和1%双抗(青霉素+链霉素)的1640基础培养基、在37 ℃条件下、含5% CO2的培养箱内培养PC3细胞, 将PC3细胞以8000个细胞/孔的浓度接种在96孔板中, 并在细胞毒性测定之前培养PC3细胞12 h.加入不同浓度的2PyY@Q[8] (5, 10 μmol/L)培养24 h后, 向每个孔中加入CCK-8溶液(10 μL)继续在37 ℃条件下孵育2 h进行细胞毒性测定.最后, 使用平板读数器(Multiskan Spectrum, Thermo Fisher, USA)测量光密度(OD450).

    细胞成像实验:以添加10%~15%胎牛血清和1%双抗(青霉素+链霉素)的1640基础培养基、在37 ℃条件下、含5% CO2的培养箱内培养PC3细胞, 将PC3细胞接于12孔板上, 待细胞长势较好时开始实验.先以含拉帕替尼(5×10-6 mol/L)的培养基孵育PC3细胞30 min, 再用新鲜的1640基础培养基洗涤3次后用PBS缓冲溶液淋洗.于OLYMPUS IX71荧光显微镜下进行观察和实验.再往上述细胞中加入探针2PyY@Q[8] (1×10-5 mol/L)孵育30 min, 用新鲜的1640基础培养基洗涤细胞3次后PBS缓冲液淋洗后成像.用探针孵育未经药物孵育的PC3细胞30 min, 再以1640基础培养基洗涤细胞3次后PBS缓冲液淋洗后成像.

    辅助材料(Supporting Information)  探针2PyY@ Q[8]的激发光谱和发射光谱, PyY-Q[8]和LD-Q[8]等温滴定量热图及热力学参数, 其他替尼类药物的结构及PyY、Q[8]、2PyY@Q[8]的1H NMR图谱.这些材料可以免费从本刊网站(http://sioc-journal.cn/)上下载.

    1. [1]

      U S FDA. FDA approves Tykerb for advanced breast cancer patients[EB/OL]. [2007-06-25]. http://www.fda.gov/bbs/topics/NEWS/2007/NEW01586.html.

    2. [2]

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  • 图 1  探针2PyY@Q[8]对拉帕替尼的可能识别模式

    Figure 1  Sensing behavior of 2PyY@Q[8] probe to LD

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    图 2  2PyY@Q[8]与拉帕替尼在Tris-HCl溶液(pH＝5)中的紫外-可见吸收光谱(a)和荧光光谱(λex＝542 nm) (b)

    Figure 2  (a) UV-vis absorption spectra changes and (b) fluorescence spectra (λex＝542 nm) changes of 2PyY@Q[8] (10 μmol/L) in solution upon addition of increasing amounts of LD (0~10 μmol/L) in Tris-HCl (pH＝5)

    Inset: Fluorescence color changes of 2PyY@Q[8] solution before and after addition of LD (10 μmol/L) under illumination at 365 nm with a portable UV lamp

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    图 3  (a) Q[8], (b) PyY, (c) PyY/Q[8] (2：1), (d) PyY/Q[8]//LD (2：1：1), (e) Q[8]/LD (1：1)和(f) LD的1H NMR谱图

    Figure 3  1H NMR spectra (400 MHz) of (a) Q[8], (b) PyY, (c) PyY/Q[8] (2:1), (d) PyY/Q[8]/LD (2:1:1), (e) Q[8]/LD (1:1) and (f) LD

    Inset: corresponding fluorescence photographs under illumination at 365 nm with a portable UV lamp

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    图 4  在不同pH值的Tris-HCl溶液中, 探针2PyY@Q[8] (10 μmol/L)及2PyY@Q[8]-LD (10 μmol/L)荧光强度的变化(λex＝542 nm)

    Figure 4  Change in fluorescence intensity of probe 2PyY@Q[8] (10 μmol/L) and 2PyY@Q[8]-LD (10 μmol/L) under different pH in Tris-HCl (λex＝542 nm)

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    图 5  在Tris-HCl (pH＝5)溶液中探针2PyY@Q[8] (10 μmol/L)加入LD (5 μmol/L)和其他物质(常见离子、药物赋形剂、其他药物)的荧光发射光谱(λex＝542 nm)

    Figure 5  Fluorescence spectra of 2PyY@Q[8] (10 μmol/L) with LD (5 μmol/L), different metal ions, drug excipients and drugs (λex＝542 nm) in Tris-HCl (pH＝5)

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    图 6  在Tris-HCl (pH＝5)溶液中干扰物对探针2PyY@Q[8] (10 μmol/L)及探针检测LD (5 μmol/L)的荧光强度变化(λex＝542 nm)

    Figure 6  Fluorescence intensity changes of 2PyY@Q[8] (10 μmol/L) and 2PyY@Q[8] (10 μmol/L)+LD (5 μmol/L) with drug excipients, another drugs and different metal ions (λex＝542 nm) in Tris-HCl (pH＝5)

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    图 7  在pH＝5的Tris-HCl溶液中, 滴加不同浓度LD (0.1~2.5 μmol/L)时2PyY@Q[8](10 μmol/L)荧光强度变化曲线

    Figure 7  A plot of fluorescence intensity changes of 2PyY@Q[8] (10 μmol/L) with increasing concentrations (0.1~2.5 μmol/L) of LD in Tris-HCl (pH＝5)

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    图 8  PC3细胞在5和10μmol/L的2PyY@Q[8]溶液中培养24 h后的存活率

    Figure 8  Relative cell viability of PC3 cells in the presence of 5 and 10 μmol/L 2PyY@Q[8] after 24 h incubation

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    图 9  PC3细胞经过LD (a, b)、2PyY@Q[8]+LD (c, d)及探针2PyY@Q[8] (e, f)孵育后的荧光成像图(红色光路, λex＝510~550 nm)

    Figure 9  Fluorescence imaging of PC3 cells incubated with LD (a, b), 2PyY@Q[8]+LD (c, d), and probe 2PyY@Q[8] (e, f) (excited with red light, λex＝510~550 nm)

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  • 发布日期:  2018-06-01
  • 收稿日期:  2017-11-09
  • 修回日期:  2018-01-19
  • 网络出版日期:  2018-06-08
通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com
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    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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