English

• 心脑血管疾病(Cardio-cerebrovascular diseases CCVDs)是心脏血管和脑血管疾病的统称, 主要包括动脉粥样硬化、高血压、心肌梗死、脑血管痉挛、心力衰竭以及糖尿病血管病变等疾病.其主要病因是中央或外周血管结构和功能的改变, 如血管张力的异常增加.心脑血管疾病具有高患病率、高致残率和高死亡率的特点, 在影响人类寿命的同时也使生活质量下降, 严重威胁人类健康.我国每年约有300万人死于心脑血管疾病, 居各种死因之首^[1].因此, 抗心脑血管疾病药物的研发具有重要意义.

  Rho是一种小分子G蛋白, 在细胞功能调节过程中起关键作用^[2]. Rho相关激酶(Rho-associated kinase, ROCK)是Rho A的下游效应分子, 包括ROCK I和ROCK II两种亚型. ROCK I和ROCK II具有高度的同源性, 其氨基酸序列有65%的同源性, 而催化区的同源性高达92%^{[3, 4]}. ROCK II主要存在于大脑皮层和海马椎体神经元等中枢神经细胞中, 而ROCK I主要存在于心、肝、脾等非神经组织中^[5].研究表明ROCK的高表达和过度激活均可导致高血压^[6]、动脉粥样硬化^[7]、脑血管痉挛^[8]、冠状动脉痉挛^[9]、中风^[10]等心脑血管疾病的发生, ROCK被认为是心脑血管疾病治疗的重要靶点^[11].

  ROCK和许多疾病的发生和发展相关, 除心脑血管疾病外, ROCK还与支气管哮喘以及肿瘤的浸润和转移等相关^[12~15]. ROCK抑制剂一直是药物研究的热点, 近年来研究报道了多种结构类型的ROCK抑制剂^[16~25].通常, ROCK II抑制剂用于中风、老年痴呆等中枢神经系统疾病的治疗, 而ROCK I抑制剂用于高血压等的治疗^[26].尽管有许多关于Rho激酶抑制剂的报道, 但是截至目前为止, 只有法舒地尔(fasudil)和ripasudil两个ROCK抑制剂被批准上市^[26].

  本实验室在前期的研究中发现化合物I(图 1)具有较好的ROCK I抑制活性, 且吲唑基对活性的保持有重要的作用^[27].另外, 文献报道含有脲基骨架的化合物II (图 1)具有较好的ROCK抑制活性^[23].为了寻找新型的ROCK抑制剂, 本研究以化合物I为先导物, 采用拼接原理, 用四氢嘧啶-2酮代替化合物I中的脯氨酰胺部分, 设计合成一系列具有四氢嘧啶-2酮和吲唑骨架的新型的ROCK抑制剂III(图 1), 化合物的结构修饰主要从以下两个方面进行: (1)在苯环上引入不同取代基R, 考察其与活性的关系; (2)改变链的长度即n的值, 考察其对活性的影响.

  图 1

  

  图 1.  化合物Ⅰ, Ⅱ和Ⅲ的结构

  Figure 1.  Structure of compounds Ⅰ, Ⅱ and Ⅲ

  下载: 全尺寸图片 幻灯片

  1.   结果与讨论

  1.1   目标化合物的合成

  目标化合物6a~6i, 8a~8d, 10a~10c的合成方法如Scheme 1所示, 5-氨基吲唑与氯甲酸苯酯进行酰化反应得到化合物2^[28]; 化合物2在碱作用下与3-氯丙胺盐酸盐发生环化反应得到化合物3^[29]; 然后尝试选择合适的保护基保护吲唑中的NH基, 如Scheme 2所示, 最初曾尝试用Boc基来保护化合物3, 得到化合物11, 其结构经NOE确证.然而化合物11在后续的氢化钠作用下的苄基取代反应时得到混合物, 其中主要为Boc迁移后的苄基化产物12和13以及少量双苄基取代化合物14和15 (Scheme 2).化合物12、13的结构经¹H NMR, ¹³C NMR, HSQC HMBC确定.我们推测可能是在反应条件下底物在NaH作用下形成的嘧啶酮氮负离子较吲唑环上的氮负离子的亲核性更强, 嘧啶酮氮负离子进攻Boc基, 经亲核加成消除反应从而完成了分子间的Boc基的迁移.为了证明该过程, 我们在不加溴苄条件下, 化合物11与NaH直接作用, 然后用饱和氯化铵淬灭, 实验结果显示得到了Boc迁移的化合物16和少量化合物3 (Scheme 3).基于上述原因, 更换四氢吡喃(THP)为保护基, 顺利得到重要中间体化合物4.化合物4在氢化钠的作用下^[30]引入取代苄基侧链并脱除保护基后得到目标产物6a~6i; 化合物4在Xantphos、碳酸铯、醋酸钯的作用下进行偶联反应^[31]引入含有吸电子取代基的苯基侧链并脱除保护基后得到目标产物8a~8d.对于含有给电子取代基的溴苯化合物, 相同反应难以发生, 则采用碘化亚铜为催化剂^[32], 在4中引入含有给电子取代基的苯基侧链并脱除保护基后得到目标产物10a~10c.

  图式 1

  

  图式 1.  化合物6a~6i, 8a~8d和10a~10c的合成

  Scheme 1.  Syntheses of compounds 6a~6i, 8a~8d and 10a~10c

  下载: 全尺寸图片 幻灯片

  图式 2

  

  图式 2.  化合物12~15的合成

  Scheme 2.  Synthesis of compounds 12~15

  下载: 全尺寸图片 幻灯片

  Scheme 3

  

  Scheme 3.  Boc基迁移的可能的机理

  Scheme 3.  Possible mechanism of Boc group shift

  下载: 全尺寸图片 幻灯片

  1.2   目标化合物的ROCK抑制活性、脑基底膜血管舒张活性

  首先, 在20 μmol•L^－1浓度下, 采用酶联免疫吸附方法(ELISA)测定了目标物6a~6i, 8a~8d, 10a~10c 对ROCK I激酶的抑制活性^[27].如表 1所示, 化合物8a和8b显示较好的抑制活性.随后测定8a和8b的IC₅₀值及其对脑基底动脉的舒张活性(表 2), 其ROCK I抑制活性在微摩尔水平, 并表现出一定的舒张脑基底动脉的活性.目标产物活性结果表明当n＝0时, 且取代基为较强吸电子基团时活性较强; 而当n＝1时, Rho激酶抑制活性明显降低, 提示在此类含有四氢嘧啶-2-酮和吲唑基母环结构中侧链的延长对活性不利.目标化合物的ROCK I抑制活性均弱于先导化合物I, 说明刚性四氢嘧啶-2-酮结构的引入改变了化合物的构象, 有可能不利于与受体的结合.此结果为今后ROCK I抑制剂的进一步结构优化提供了参考.

  表 1

  

  表 1  20 μmol•L^－1浓度下化合物6a~6i, 8a~8d, 10a~10c的ROCK I的抑制率^a

  Table 1.  Inhibition ratio of 6a~6i, 8a~8d, 10a~10c for ROCK I at the concentration of 20 μmol•L^－1

  下载: 导出CSV

  Compound	Inhibition/%
  6a	10.3
  6b	23.1
  6c	13.4
  6d	19.4
  6e	NA
  6f	NA
  6g	29.3
  6h	NA
  6i	NA
  8a	48.4
  8b	35.7
  8c	18.1
  8d	NA
  10a	NA
  10b	30.1
  10c	NA
  I	77.7
  Fasudil	71.1
  a These data were obtained by single determination. NA: no activity.

  表 2

  

  表 2  化合物8a和8b的ROCK I的IC₅₀值和舒张血管的EC₅₀值^a

  Table 2.  IC₅₀ value of compounds 8a and 8b for ROCK I and the EC₅₀ value of vasorelaxant activity

  下载: 导出CSV

  Compound	IC50/(μmol•L－1)	EC50/(μmol•L－1)
  8a	6.01	15.92
  8b	9.46	20.61
  I	0.17	ND
  Fasudil	0.36	ND
  a These data were obtained by single determination. ND: no determination.

  1.3   分子对接分析

  为了考察此类化合物与ROCK I的作用方式, 我们首先挑选活性最好的化合物8a与ROCK I的蛋白晶体结构(pdb 3NDM)^[33]进行对接, 最后保留得分最高的构象(Libdock Score＝110.074).如图 2对接预测模型所示, 化合物8a能有效地进入结合腔和受体结合, 其吲唑基上的NH及N可分别与活性位点的Glu154和Met156形成氢键, 苯环硝基取代基上的氧与活性位点的Phe87形成氢键, 取代苯环与活性位点的Lys105形成π-π相互作用.为了比较作用模式的异同, 我们进一步对化合物8b (Libdock Score＝100.42)和先导物I (Libdock Score＝122.324)进行了分子对接.结果显示化合物8b氰基氮代替苯环硝基取代基上的氧和活性位点的Phe87形成氢键, 与活性位点处残基Lys105的π-π相互作用仍保留, 然而, 吲唑基上只有NH与活性位点的Met156形成一个氢键导致化合物8b与受体结合作用弱于8a(图 2).先导物I的分子对接结果显示, 其吲唑基上的NH及N可分别与活性位点Met156形成两个氢键, 酰胺的NH与活性位点Ala215形成氢键, 取代苯环与活性位点的Lys105和Asp216形成π-π相互作用(图 2).对比化合物8a和先导物I的对接结果, 发现吲唑上的酰胺NH与活性位点Ala215的氢键对于ROCK I抑制活性的提高有一定的影响.

  图 2

  

  图 2.  化合物8a, 8b和I与ROCK I的对接结构

  Figure 2.  Docking structure of compounds 8a, 8b and I

  下载: 全尺寸图片 幻灯片

  2.   结论

  以前期结构优化所得化合物I为模板, 参照文献报道的活性ROCK抑制剂的活性结构, 采用分子拼接原理, 设计并合成了16个结构新颖的具有四氢嘧啶-2酮和吲唑骨架的化合物.生物活性评价显示化合物8a和8b具有较好的ROCK I抑制活性, 其IC₅₀值分别为6.01和9.46 μmol•L^－1.同时, 化合物8a和8b对脑基底动脉表现出较好的舒张作用.通过分子对接揭示其可能的作用方式, 为今后新型ROCK I抑制剂的优化提供参考.

  3.   实验部分

  3.1   仪器与试剂

  熔点采用Fisher Scientific显微熔点仪测定, 温度未校正, 核磁氢谱采用Varian Mercury 400型、BRUKER-600型、Varian INOVA-500型共振仪测定, TMS为内标.质谱采用LC/MDC-MS串联质谱仪(Thermo, USA)测定.薄层色谱(TLC)层析硅胶GF₂₅₄、柱层析硅胶(160~200目)均由青岛海洋化工厂生产.实验所用试剂为化学纯或分析纯, 购买后未做进一步处理, 直接使用.所用溶剂均为分析纯, 其中无水溶剂均经美国创新科技(Innovative Technology)所产的无水溶剂纯化系统除水后使用, 其它溶剂未特别指出则未经处理.

  3.2   化合物的合成

  3.2.1   1-(1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(3)的制备

  将化合物2 (100 mg, 0.40 mmol), 3-氯丙胺盐酸盐(57 mg, 0.44 mmol)溶于无水四氢呋喃(THF, 6 mL)中, 冰浴冷却下, 加入固体氢氧化钠(47 mg, 1.19 mmol), 继续于10 ℃下搅拌反应约2 h后, TLC监测化合物2反应完, 加入t-BuOK溶液(112 mg t-BuOK溶于1 mL THF中).随后升温至20 ℃搅拌约18 h, TLC检测反应完全.停止反应, 减压蒸除溶剂.加水稀释, 调节pH＝7, 乙酸乙酯洗, 正丁醇萃取, 合并有机相, 减压除去溶剂, 得到68 mg化合物3, 收率78.9%.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.02 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.44 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 7.26 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 6.49 (s, 1H), 3.63 (t, J＝5.7 Hz, 2H), 3.24 (d, J＝5.9 Hz, 2H), 1.97 (q, J＝5.9 Hz, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆)δ: 154.9, 137.5, 133.4, 126.1, 122.7, 116.4, 109.5, 109.3, 48.9, 40.1, 22.3; HRMS (ESI) calcd for C₁₁H₁₃N₄O (M+H)⁺ 217.1084, found 217.1085.

  3.2.2   1-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(4)的制备

  将化合物3 (5 g, 0.023 mol)、对甲苯磺酸(80 mg, 0.463 mmol)溶于无水N, N-二甲基甲酰胺(DMF) (50 mL)中, 滴加3, 4-二氢-2H-吡喃(1.947 g, 0.023 mmol), 90 ℃下回流约6 h, TLC检测反应完全.停止反应, 减压蒸除溶剂.二氯甲烷稀释, 依次用饱和碳酸氢钠溶液、水、饱和氯化钠溶液洗, 无水硫酸钠干燥.过滤, 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析分离纯化[V(二氯甲烷):V(甲醇)＝50:1], 得5.359 g化合物4, 收率77%.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.02 (s, 1H), 7.61 (d, J＝8.9 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.32 (d, J＝8.9 Hz, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.80 (d, J＝9.5 Hz, 1H), 3.85 (d, J＝11.6 Hz, 1H), 3.71 (dt, J＝11.9, 6.7 Hz, 1H), 3.62 (t, J＝5.8 Hz, 2H), 3.24 (d, J＝6.1 Hz, 2H), 2.40~2.36 (m, 1H), 2.12~1.85 (m, 4H), 1.75~1.70 (m, 1H), 1.58~1.55 (m, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆)δ: 154.8, 138.2, 137.0, 133.3, 126.3, 124.0, 116.7, 109.8, 84.1, 66.4, 48.8, 28.9, 24. 8, 22.3, 22.2; HRMS (ESI) calcd for C₁₆H₂₁N₄O₂ (M+H)⁺ 301.1659, found 301.1653.

  3.2.3   1-取代苄基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(5a~5i)的制备通法

  将化合物4 (200 mg, 0.667 mmol)溶于无水1, 4-二氧六环(4 mL)中, 于0 ℃下加入NaH (44 mg, 1.818 mmol)及取代溴苄(0.727 mmol).室温下搅拌约3 h, TLC检测反应完全, 停止反应, 减压蒸除溶剂.二氯甲烷稀释, 依次用饱和碳酸氢钠溶液、水、饱和氯化钠溶液洗, 无水硫酸钠干燥.过滤, 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析分离纯化[V(二氯甲烷):V(甲醇)＝100:1].

  1-苄基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(5a):收率85.7%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.05 (d, J＝4.8 Hz, 1H), 7.66~7.61 (m, 2H), 7.38~7.24 (m, 6H), 5.84~5.80 (m, 1H), 4.52 (s, 2H), 3.88~3.85 (m, 1H), 3.75~3.66 (m, 3H), 3.34~3.27 (m, 2H), 2.42~2.39 (m, 1H), 2.05~1.93 (m, 4H), 1.77~1.71 (m, 1H), 1.59~1.56 (m, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆)δ: 154.8, 138.6, 138.6, 137.1, 133.3, 128.4, 127.3, 126.8, 126.4, 124.0, 116.9, 109.9, 84.1, 66.4, 50.5, 49.3, 45.4, 28.9, 24.8, 22.3, 22.2; HRMS (ESI) calcd for C₂₃H₂₇N₄O₂ (M+H)⁺ 391.2129, found 391.2125.

  1-(4-甲基-苄基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(5b):收率72%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.04 (s, 1H), 7.64 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.35 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 7.19~7.14 (m, 4H), 5.82 (d, J＝10.0 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.07 (q, J＝5.3 Hz, 1H), 3.87 (d, J＝11.4 Hz, 1H), 3.73 (q, J＝5.9, 5.0 Hz, 1H), 3.69~3.64 (m, 2H), 3.27 (t, J＝5.8 Hz, 2H), 3.16 (d, J＝5.2 Hz, 2H), 2.41~2.35 (m, 1H), 2.12~1.91 (m, 4H), 1.78~1.70 (m, 1H), 1.58~1.56 (m, 2H).

  1-(4-甲氧基-苄基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(5c):收率87%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.04 (s, 1H), 7.64 (d, J＝8.9 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.34 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 7.22 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 6.90 (d, J＝8.1 Hz, 2H), 5.83~5.81 (m, 1H), 4.43 (s, 2H), 3.87 (d, J＝11.4 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.66 (t, J＝5.7 Hz, 2H), 3.26 (t, J＝5.9 Hz, 2H), 2.41~2.38 (m, 1H), 2.05~1.94 (m, 4H), 1.75~1.71 (m, 1H), 1.59~1.55 (m, 2H); ¹³C NMR (125 MHz, DMSO-d₆) δ: 158.3, 154.8, 138.6, 137.1, 133.4, 130.5, 128.9, 126.5, 124.0, 116.9, 113.8, 109.9, 84.1, 66.5, 55.0, 49.8, 49.3, 45.1, 28.9, 24.8, 22.3, 22.2; HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₂₉N₄O₃ (M+H)⁺ 421.2234, found 421.2231.

  1-(4-氟-苄基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(5d):收率99%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.05 (s, 1H), 7.64 (d, J＝8.9 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.36~7.32 (m, 3H), 7.17 (t, J＝8.5 Hz, 2H), 5.81 (dd, J＝9.6, 2.5 Hz, 1H), 4.48 (s, 2H), 3.89~3.85 (m, 1H), 3.75~3.65 (m, 3H), 3.29 (t, J＝5.9 Hz, 2H), 2.45~2.35 (m, 1H), 2.10~1.88 (m, 4H), 1.78~1.69 (m, 1H), 1.60~1.55 (m, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ: 161.2 (d, J_C-F＝240.8 Hz), 154.8, 138.5, 137.1, 134.79, 134.77, 133.3, 129.4 (d, J_C-F＝7.9 Hz), 126.4, 124.0, 117.0, 115.2 (d, J_C-F＝21.2 Hz), 109.9, 84.1, 66.4, 49.8, 49.3, 45.3, 28.9, 24.8, 22.3, 22.2; HRMS (ESI) calcd for C₂₃H₂₆N₄O₂F (M+H)⁺ 409.2034, found 409.2014.

  1-(4-氰基-苄基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(5e):收率94%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.05 (s, 1H), 7.81 (d, J＝7.9 Hz, 2H), 7.64 (d, J＝8.9 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.48 (d, J＝7.9 Hz, 2H), 7.35 (dd, J＝8.9, 1.9 Hz, 1H), 5.81 (dd, J＝9.7, 2.4 Hz, 1H), 4.58 (s, 2H), 3.86 (d, J＝11.3 Hz, 1H), 3.75~3.68 (m, 3H), 3.33 (t, J＝6.4 Hz, 2H), 2.43~2.37 (m, 1H), 2.08~2.00 (m, 3H), 1.99~1.92 (m, 1H), 1.76~1.71 (m, 1H), 1.60~1.54 (m, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ: 154.8, 144.8, 138.4, 137.1, 133.3, 132.4, 128.1, 126.3, 124.0, 118.9, 117.0, 109. 9, 109.6, 84.1, 66.4, 50.5, 49.3, 45.9, 28.9, 24.8, 22.3, 22.2; HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₂₆N₅O₂ (M+H)⁺ 416.2081, found 416.2060.

  1-(2, 4-二甲基-苄基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(5f):收率97%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.04 (s, 1H), 7.64 (d, J＝8.9 Hz, 1H), 7.59 (d, J＝1.8 Hz, 1H), 7.34 (dd, J＝8.9, 1.9 Hz, 1H), 7.06 (t, J＝7.7 Hz, 1H), 7.08~6.98 (m, 2H), 5.81 (dd, J＝9.7, 2.5 Hz, 1H), 4.47 (s, 2H), 4.07 (q, J＝5.3 Hz, 1H), 3.87 (d, J＝11.6 Hz, 1H), 3.81~3.57 (m, 4H), 3.22 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 3.16 (d, J＝5.2 Hz, 3H), 2.14~2.35 (m, 1H), 2.31 (s, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.03 (p, J＝5.5 Hz, 3H), 1.98~1.93 (m, 1H), 1.77~1.72 (m, 1H), 1.59~1.55 (m, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ: 154.7, 138.7, 137.1, 135.8, 135.7, 133.4, 133.0, 130.9, 127.3, 126.5, 126.4, 124.0, 117.0, 109.9, 84.1, 66.5, 49.3, 48.6, 48.2, 45.2, 29.0, 24.8, 22.3, 22.2, 20.6, 18.6; HRMS (ESI) calcd for C₂₅H₃₁N₄O₂ (M+H)⁺ 419.2442, found 419.2430.

  1-(4-溴-苄基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(5g):收率95%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.04 (s, 1H), 7.71~7.57 (m, 2H), 7.54 (d, J＝7.9 Hz, 2H), 7.34 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 7.26 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 5.81 (dd, J＝9.7, 2.5 Hz, 1H), 4.47 (s, 2H), 3.87 (d, J＝11.2 Hz, 1H), 3.71 (dt, J＝23.1, 6.2 Hz, 3H), 3.30~3.15 (m, 1H), 2.41~2.36 (m, 1H), 2.03 (p, J＝5.4 Hz, 3H), 1.95 (d, J＝13.0 Hz, 1H), 1.75~1.72 (m, 1H), 1.59~1.55 (m, 2H); ¹³C NMR (125 MHz, DMSO-d₆) δ: 154.8, 138.5, 138.2, 137.1, 133.4, 131.3, 129.7, 126.4, 124.0, 119.9, 117.0, 109.9, 84.1, 66.5, 50.0, 49.3, 45.5, 28.9, 24.8, 22.3, 22.2; HRMS (ESI) calcd for C₂₃H₂₆N₄-O₂Br (M+H)⁺ 469.1234, found 469.1220.

  1-(4-甲氧羰基-苄基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(5h):收率81%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.05 (s, 1H), 7.95 (d, J＝7.8 Hz, 2H), 7.70~7.59 (m, 2H), 7.43 (d, J＝7.9 Hz, 2H), 7.36 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 5.82 (d, J＝9.3 Hz, 1H), 4.58 (s, 2H), 3.90~3.87 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.71 (dt, J＝11.2, 6.1 Hz, 3H), 3.33~3.31 (m, 2H), 2.44~2.35 (m, 1H), 2.13~1.88 (m, 4H), 1.76~1.71 (m, 1H), 1.60~1.55 (m, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ: 166.1, 154.9, 144.5, 138.5, 137.2, 133.4, 129.4, 128.3, 127.5, 126.4, 124.0, 117.1, 109.9, 84.1, 66.5, 52.1, 50.4, 49.4, 45.7, 29.0, 24.8, 22.3, 22.2; HRMS (ESI) calcd for C₂₅H₂₉N₄O₄ (M+H)⁺ 449.2183, found 449.2169.

  1-(4-羧基-苄基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(5i):收率87%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ: 12.86 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.93 (d, J＝7.9 Hz, 2H), 7.68~7.59 (m, 2H), 7.40 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 7.36 (dd, J＝8.9, 1.9 Hz, 1H), 5.82 (dd, J＝9.7, 2.5 Hz, 1H), 5.74 (s, 1H), 4.58 (s, 2H), 3.87 (d, J＝11.5 Hz, 1H), 3.72 (dt, J＝11.3, 5.9 Hz, 3H), 2.43~2.36 (m, 2H), 2.09~1.88 (m, 4H), 1.77~1.74 (m, 2H), 1.57 (m, 2H); HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₂₇N₄O₄ (M+H)⁺ 435.2027, found 435.2020.

  3.2.4   1-取代苯基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(7a~7d)的制备通法

  将化合物4 (100 mg, 0.303 mmol), 取代溴苯(0.455 mmol)、碳酸铯(138 mg, 0.424 mmol)、醋酸钯(3 mg, 0.0112 mmol)溶于无水1, 4-二氧六环(5 mL)中, 氩气保护, 加入Xantphos (11 mg, 0.018 mmol), 于100 ℃下搅拌约2 h, TLC检测反应完全, 停止反应, 减压蒸除溶剂.硅胶柱层析分离纯化[V(二氯甲烷):V(甲醇)＝20:1].

  1-(4-硝基-苯基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(7a):收率86%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.17 (d, J＝8.9 Hz, 2H), 8.08 (s, 1H), 7.75~7.67 (m, 2H), 7.64 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 7.40 (dd, J＝8.9, 1.9 Hz, 1H), 5.83 (dd, J＝9.7, 2.4 Hz, 1H), 3.92 (t, J＝5.8 Hz, 2H), 3.93~3.85 (m, 1H), 3.78 (t, J＝5.9 Hz, 2H), 3.75~3.64 (m, 1H), 2.41~2.37 (m, 1H), 2.23 (p, J＝5.9 Hz, 2H), 2.06~1.94 (m, 2H), 1.77~1.72 (m, 1H), 1.61~1.55 (m, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆)δ: 153.3, 150.2, 142.5, 137.7, 137.5, 133.5, 126.5, 124.1, 123.62, 118.0, 110.3, 84.1, 66.5, 49.8, 47.8, 40.0, 28.9, 24.8, 22.5, 22.2; HRMS (ESI) calcd for C₂₂H₂₄N₅O₄ (M+H)⁺ 422.1823, found 422.1820.

  1-(4-氰基-苯基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(7b):收率87%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.07 (s, 1H), 7.76 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.68 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 7.56 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.39 (dd, J＝8.9, 1.9 Hz, 1H), 5.83 (dd, J＝9.7, 2.5 Hz, 1H), 3.88~3.85 (m, 3H), 3.76 (t, J＝6.2 Hz, 2H), 3.73~3.69 (m, 1H), 2.46~2.31 (m, 1H), 2.21 (p, J＝5.8 Hz, 2H), 2.06~1.93 (m, 2H), 1.77~1.71 (m, 1H), 1.60~1.55 (m, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ: 153.4, 148.3, 137.8, 137.5, 133.4, 132.2, 126.5, 124.7, 124.1, 119.0, 117.9, 110.3, 105.7, 84.1, 66.5, 49.8, 47.7, 28.9, 24.8, 22.5, 22.2; HRMS (ESI) calcd for C₂₃H₂₄N₅O₂ (M+H)⁺ 402.1925, found 402.1909.

  1-(4-氟-苯基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(7c):收率80%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.06 (s, 1H), 7.72~7.60 (m, 2H), 7.44~7.27 (m, 4H), 7.17~7.11 (m, 1H), 5.82 (dd, J＝9.6, 2.5 Hz, 1H), 3.87 (dd, J＝11.5, 3.9 Hz, 1H), 3.80~3.74 (m, 5H), 2.46~2.31 (m, 1H), 2.20 (p, J＝5.9 Hz, 2H), 2.06~1.92 (m, 2H), 1.77~1.71 (m, 1H), 1.60~1.56 (m, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ: 159.3 (d, J_C-F＝240.3 Hz), 154.05, 153.98, 144.4, 140.7, 138.3, 138.2, 137.3, 133.4, 128.3, 127.8 (d, J_C-F＝8.3 Hz), 126.6 (d, J_C-F＝8.3 Hz), 125.7, 124.8, 124.1, 117.6, 117.5, 115.0 (d, J_C-F＝22.2 Hz), 110.1, 84.2, 66.6, 49.7, 49.0, 48.8, 29.0, 24.8, 22.74, 22.68, 22.0; HRMS (ESI) calcd for C₂₂H₂₄-N₄O₂F (M+H)⁺ 395.1879, found 395.1866.

  1-(4-三氟甲基-苯基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(7d):收率77%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.07 (s, 1H), 7.69~7.65 (m, 4H), 7.57 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.39 (d, J＝8.9 Hz, 1H), 5.83 (d, J＝9.4 Hz, 1H), 3.88~3.85 (m, 3H), 3.79~3.64 (m, 3H), 2.41~2.36 (m, 1H), 2.22 (p, J＝5.8 Hz, 2H), 2.05~1.94 (m, 2H), 1.79~1.74 (m, 1H), 1.58~1.56 (m, 2H); HRMS (ESI) calcd for C₂₃H₂₄N₄O₂F₃ (M+H)⁺ 445.1830, found 445.1846.

  3.2.5   1-取代苯基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(9a~9c)的制备通法

  将化合物4 (100 mg, 0.303 mmol)、取代溴苯(0.46 mmol)溶于无水甲苯(10 mL)中, 氩气保护下快速加入碘化亚铜(462 mg, 2.42 mmol)及N, N-二甲基-1, 2-乙二胺(0.28 mL, 3.03 mmol), 于100℃下搅拌约36 h, TLC检测反应完全, 停止反应, 硅藻土过滤, 滤饼乙酸乙酯洗, 合并滤液, 减压蒸除溶剂.硅胶柱层析分离纯化[V(二氯甲烷):V(甲醇)＝100:1].

  1-(4-甲氧基-苯基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(9a):收率57%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.05 (s, 1H), 7.65~7.63 (m, 2H), 7.37 (d, J＝9.1 Hz, 1H), 7.22 (d, J＝8.1 Hz, 2H), 6.87 (d, J＝8.3 Hz, 2H), 5.81 (d, J＝9.6 Hz, 1H), 3.88~3.83 (m, 1H), 3.78~3.76 (m, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.73~3.69 (m, 2H), 2.39 (q, J＝10.5, 9.9 Hz, 1H), 2.20~2.17 (m, 2H), 2.11~1.88 (m, 2H), 1.74 (s, 1H), 1.57 (s, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ: 156.5, 154.1, 138.3, 137.4, 137.2, 133.3, 127.2, 126.5, 124.0, 117.2, 113.6, 109.9, 84.1, 66.5, 55.2, 49.6, 49.3, 28.9, 24.8, 22.7, 22.2; HRMS (ESI) calcd for C₂₃H₂₇N₄O₃ (M+H)⁺ 407.2078, found 407.2063.

  1-苯基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(9b):收率59%. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.06~8.05 (m, 1H), 7.66~7.61 (m, 2H), 7.50~7.24 (m, 4H), 7.15~7.11 (m, 1H), 5.82 (d, J＝9.3 Hz, 1H), 3.87 (d, J＝11.4 Hz, 1H), 3.83~3.62 (m, 5H), 2.41~2.37 (m, 1H), 2.22~2.18 (m, 2H), 2.13~1.89 (m, 2H), 1.76~1.71 (m, 1H), 1.59~1.55 (m, 2H); ¹³C NMR (125 MHz, DMSO-d₆)δ: 153.9, 144.4, 138.2, 137.3, 133.4, 128.3, 126.6, 125.7, 124.7, 124.1, 117.5, 110.1, 84.1, 66.5, 49.7, 48.8, 28.9, 24.8, 22.7, 22.2; HRMS (ESI) calcd for C₂₂H₂₅N₄O₂ (M+H)⁺ 377.1972, found 377.1971.

  1-(4-甲基-苯基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(9c):收率76%. ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.05 (s, 1H), 7.66~7.65 (m, 2H), 7.37 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 7.20 (d, J＝7.5 Hz, 2H), 7.12 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 5.82 (d, J＝9.5 Hz, 1H), 3.86 (d, J＝11.0 Hz, 1H), 3.78~3.71 (m, 5H), 2.40~2.38 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.20~2.16 (m, 2H), 2.10~1.90 (m, 2H), 1.76~1.72 (m, 1H), 1.57 (s, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ: 154.0, 141.9, 138.3, 137.3, 134.0, 133.4, 128.8, 126.6, 125.7, 124.1, 117.5, 110.1, 84.2, 66.6, 49.7, 49.0, 29.0, 24.8, 22.8, 22.2, 20.5; HRMS (ESI) calcd for C₂₃H₂₇N₄O₂ (M+H)⁺ 391.2129, found 391.2114.

  3.2.6   1-取代-3-(1-(1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(6a~6i, 8a~8d, 10a~10c)的制备通法

  将化合物5a~5i, 7a~7d或9a~9c (0.418 mmol)溶于甲醇(10 mL)中, 滴加约9 mL 6 mol•L^－1 HCl溶液, 60℃下搅拌约1.5 h, TLC检测反应完全, 停止反应, 减压蒸除溶剂.水稀释, 调节pH使溶液为碱性, 二氯甲烷萃取, 合并二氯甲烷溶液, 饱和氯化钠溶液洗, 无水硫酸钠干燥.过滤, 减压蒸除溶剂, 得目标产物6a~6i, 8a~8d和10a~10c.

  1-苄基-3-(1-(1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(6a):白色固体, 收率96%. m.p. 229~231 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.01 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.46 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 7.36 (t, J＝7.5 Hz, 2H), 7.33~7.23 (m, 4H), 4.52 (s, 2H), 3.69 (t, J＝5.7 Hz, 2H), 3.30 (t, J＝6.4 Hz, 2H), 2.04 (p, J＝5.9 Hz, 2H); ¹³C NMR (125 MHz, DMSO-d₆)δ: 154.9, 138.7, 137.8, 137.7, 133.4, 128.5, 127.4, 126.9, 126.3, 122.8, 116.7, 109.6, 50.5, 49.4, 45.4, 22.4; HRMS (ESI) calcd for C₁₈H₁₉N₄O (M+H)⁺ 307.1553, found 307.1545.

  1-(4-甲基-苄基)-3-(1-(1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(6b):白色固体, 收率92%. m.p. 188~190 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.00 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.45 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 7.19~7.13 (m, 4H), 4.45 (s, 2H), 3.66 (t, J＝5.6 Hz, 2H), 3.26 (t, J＝5.9 Hz, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.00 (p, J＝5.7 Hz, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO) δ: 154.9, 137.8, 137.7, 135.9, 135.5, 133.4, 129.0, 127.5, 126.2, 122.7, 116.6, 109.5, 50.2, 49.4, 45.2, 22.4, 20.7; HRMS (ESI) calcd for C₁₉H₂₁ON₄ (M+H)⁺ 321.1710, found: 321.1712.

  1-(4-甲氧基-苄基)-3-(1-(1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(6c):浅黄色固体, 收率97%, m.p. 175~177 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.99 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.45 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J＝9.1 Hz, 1H), 7.22 (d, J＝8.2 Hz, 2H), 6.90 (d, J＝8.3 Hz, 2H), 4.42 (s, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.65 (t, J＝5.8 Hz, 2H), 3.26 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 2.00 (t, J＝6.0 Hz, 2H); ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-d₆) δ: 158.3, 154.9, 137.9, 137.7, 133.4, 130.5, 128.9, 126.3, 122.7, 116.6, 113.8, 109.5, 55.0, 49.8, 49.4, 45.1, 22.4; HRMS (ESI) calcd for C₁₉H₂₁N₄O₂ (M+H)⁺ 337.1659, found 337.1651.

  1-(4-氟-苄基)-3-(1-(1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(6d):白色固体, 收率76%. m.p. 229~231 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.00 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.45 (d, J＝8.7 Hz, 1H), 7.35~7.32 (m, 2H), 7.27 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 7.16 (t, J＝8.5 Hz, 2H), 4.48 (s, 2H), 3.67 (t, J＝5.6 Hz, 2H), 3.31~3.28 (m, 2H), 2.03 (q, J＝5.8 Hz, 2H); ¹³C NMR (125 MHz, DMSO-d₆) δ: 161.3 (d, J_C-F＝240.9 Hz), 154.9, 137.8, 137.7, 134.88, 134.86, 133.4, 129.4 (d, J_C-F＝7.9 Hz), 126.3, 122.7, 116.7, 115.2 (d, J_C-F＝21 Hz), 109.6, 49.8, 49.4, 45.4, 22.4; HRMS (ESI) calcd for C₁₈H₁₈N₄OF (M+H)⁺ 325.1459, found 325.1458.

  1-(4-氰基-苄基)-3-(1-(1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(6e):浅黄色固体, 收率77%. m.p. 212~215 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.00 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.82 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 7.59 (d, J＝1.9 Hz, 1H), 7.49~7.44 (m, 3H), 7.28 (dd, J＝8.9, 1.8 Hz, 1H), 4.58 (s, 2H), 3.70 (t, J＝5.7 Hz, 2H), 3.33 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 2.08~2.01 (m, 2H); ¹³C NMR (125 MHz, DMSO-d₆)δ: 154.9, 144.9, 137.8, 137.6, 133.4, 132.4, 128.1, 126.2, 122.7, 119.0, 116.8, 109.62, 109.60, 50.5, 49.4, 45.9, 22.4; HRMS (ESI) calcd for C₁₉H₁₈N₅O (M+H)⁺ 332.1506, found 332.1504.

  1-(2, 4-二甲基-苄基)-3-(1-(1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(6f):白色固体, 收率97%. m.p. 163~166 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.18 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.75 (d, J＝1.8 Hz, 1H), 7.63 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 7.44 (dd, J＝8.9, 1.9 Hz, 1H), 7.25 (d, J＝7.8 Hz, 1H), 7.17 (d, J＝5.9 Hz, 2H), 4.65 (s, 2H), 3.85 (t, J＝5.7 Hz, 2H), 3.38 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 2.20 (t, J＝5.9 Hz, 2H); ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-d₆) δ: 154.8, 137.9, 137.7, 135.74, 135.68, 133.4, 133.0, 130.9, 127.4, 126.4, 126.3, 122.8, 116.6, 109.6, 49.4, 48.2, 45.2, 22.4, 20.6, 18.7; HRMS (ESI) calcd for C₂₀H₂₃N₄O (M+H)⁺ 335.1866, found 335.1859.

  1-(4-溴-苄基)-3-(1-(1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(6g):白色固体, 收率90%. m.p. 225~226 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.01 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.53 (d, J＝7.8 Hz, 2H), 7.45 (d, J＝8.7 Hz, 1H), 7.26 (t, J＝8.1 Hz, 3H), 4.46 (s, 2H), 3.67 (t, J＝5.5 Hz, 2H), 3.29 (t, J＝5.8 Hz, 2H), 2.03 (q, J＝5.8 Hz, 2H); ¹³C NMR (125 MHz, DMSO-d₆)δ: 154.9, 138.2, 137.81, 137.76, 133.3, 131.3, 129.7, 126.3, 122.7, 119.9, 116.7, 109.7, 50.0, 49.4, 45.5, 22.4; HRMS (ESI) calcd for C₁₈H₁₈N₄OBr (M+H)⁺ 385.0659, found 385.0653.

  1-(4-甲氧羰基-苄基)-3-(1-(1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(6h):白色固体, 收率80%. m.p. 141~144 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.00 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.95 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 7.59 (d, J＝1.8 Hz, 1H), 7.44 (t, J＝9.4 Hz, 3H), 7.28 (dd, J＝8.9, 1.9 Hz, 1H), 4.58 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.69 (t, J＝5.7 Hz, 2H), 3.34~3.30 (m, 3H), 2.05 (t, J＝5.9 Hz, 2H); ¹³C NMR (125 MHz, DMSO-d₆) δ: 166.1, 155.0, 144.6, 137.7, 133.4, 129.4, 128.2, 127.5, 126.3, 122.7, 116.7, 109.6, 52.1, 50.4, 49.5, 45.7, 22.4; HRMS (ESI) calcd for C₁₉H₂₁N₄O₃ (M+H)⁺ 365.1608, found 365.1601.

  1-(4-羧基-苄基)-3-(1-(1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(6i):白色固体, 收率89%. m.p.＞250 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.94 (s, 2H), 8.01 (s, 1H), 7.93 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.46 (d, J＝8.9 Hz, 1H), 7.40 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 7.29 (d, J＝8.9 Hz, 1H), 4.57 (s, 2H), 3.69 (t, J＝5.6 Hz, 2H), 3.32 (t, J＝5.9 Hz, 2H), 2.05 (t, J＝5.9 Hz, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ: 167.3, 155.0, 144.0, 137.9, 137.8, 133.4, 129.6, 129.4, 127.4, 126.3, 122.8, 116.8, 109.7, 50.5, 49.5, 45.8, 22.4; HR-MS (ESI) calcd for C₁₉H₁₉N₄O₃ (M+H)⁺ 351.1452, found 351.1446.

  1-(1H-吲唑-5-基)-3-(4-硝基苯基)四氢嘧啶-2(1H)酮(8a):黄色固体, 收率98%. m.p.＞250 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.07 (s, 1H), 8.17 (d, J＝8.9 Hz, 2H), 8.04 (s, 1H), 7.69 (d, J＝1.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J＝9.0 Hz, 2H), 7.50 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 7.33 (dd, J＝8.8, 1.8 Hz, 1H), 3.92 (t, J＝5.8 Hz, 2H), 3.77 (t, J＝5.9 Hz, 2H), 2.23 (p, J＝5.9 Hz, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ: 153.5, 150.3, 142.6, 138.2, 137.0, 133.7, 126.4, 124.2, 123.7, 122.9, 117.8, 110.1, 50.0, 47.9, 22.6. HR-MS (ESI) calcd for C₁₇H₁₆N₅O₃ (M+H)⁺ 338.1248, found 338.1248.

  4-(3-(1H-吲唑-5-基)-2氧四氢嘧啶-1(2H)-基)苯甲腈(8b):黄色固体, 收率95%. m.p.＞250 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.05 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.75 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.56 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.49 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 7.31 (dd, J＝8.9, 1.8 Hz, 1H), 3.87 (t, J＝5.8 Hz, 2H), 3.76 (t, J＝5.9 Hz, 2H), 2.21 (p, J＝5.9 Hz, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ: 153.5, 148.3, 138.1, 137.0, 133.5, 132.2, 126.3, 124.7, 122.8, 119.0, 117.6, 109.9, 105.6, 49.9, 47.7, 22.5; HRMS (ESI) calcd for C₁₈H₁₆N₅O (M+H)⁺ 318.1349, found 318.1335.

  1-(4-氟苯基)-3-(1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(8c):白色固体, 收率98%. m.p.＞250 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.01 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.64 (d, J＝3.6 Hz, 1H), 7.46 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 7.37~7.29 (m, 3H), 7.14 (t, J＝8.8 Hz, 2H), 3.80~3.74 (m, 4H), 2.19 (t, J＝6.0 Hz, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ: 159.6 (d, J_C-F＝240.0 Hz), 154.0, 153.9, 144.4, 140.7, 137.9, 137.44, 137.38, 133.5, 128.2, 127.7, 127.6, 126.4, 126.3, 125.6, 124.6, 122.8, 117.2 (d, J_C-F＝5.7 Hz), 114.9 (d, J_C-F＝22.4 Hz), 109.7, 49.8, 49.0, 48.7, 22.72, 22.66; HRMS (ESI) calcd for C₁₇H₁₆N₄OF (M+H)⁺ 311.1303, found 311.1291.

  1-(1H-吲唑-5-基)-3-(4-三氟甲基苯基)四氢嘧啶-2(1H)酮(8d):白色固体, 收率80%, m.p.＞250 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.04 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.66 (d, J＝9.9 Hz, 3H), 7.57 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.49 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 7.32 (d, J＝8.7 Hz, 1H), 3.86 (t, J＝5.7 Hz, 2H), 3.77 (t, J＝5.9 Hz, 2H), 2.23~2.20 (m, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆)δ: 153.6, 147.8, 138.0, 137.1, 133.5, 126.3, 125.1 (q, J_C-F＝4.1 Hz), 124.1 (q, J_C-F＝31.7 Hz), 122.8, 117.5, 109.9, 49.9, 48.0, 22.6; HRMS (ESI) calcd for C₁₈H₁₆N₄OF₃ (M+H)⁺ 361.1271, found 361.1258.

  1-(1H-吲唑-5-基)-3-(4-甲氧基苯基)四氢嘧啶-2(1H)酮(10a):白色固体, 收率94%. m.p. 232~234 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.02 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.45 (d, J＝9.5 Hz, 1H), 7.29 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 7.22 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 6.87 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 3.76 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.73~3.70 (m, 2H), 2.19~2.17 (m, 2H); ¹³C NMR (125 MHz, DMSO-d₆)δ: 156.5, 154.2, 137.8, 137.6, 137.4, 133.5, 127.3, 126.4, 122.8, 117.0, 113.6, 109.7, 55.2, 49.8, 49.3, 30.7, 22.8; HRMS (ESI) calcd for C₁₈H₁₉N₄O₂ (M+H)⁺ 323.1503, found 323.1497.

  1-(1H-吲唑-5-基)-3-(4-苯基)四氢嘧啶-2(1H)酮(10b):白色固体, 收率96%. m.p. 243~245 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.02 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.46 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 7.34~7.29 (m, 5H), 7.14~7.12 (m, 1H), 3.78 (q, J＝6.0 Hz, 4H), 2.20 (t, J＝6.0 Hz, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ: 153.9, 144.4, 137.7, 137.4, 133.4, 128.2, 126.3, 125.6, 124.6, 122.8, 117.2, 109.7, 49.8, 48.7, 22.7; HRMS (ESI) calcd for C₁₇H₁₇N₄O (M+H)⁺ 293.1397, found 293.1389.

  1-(1H-吲唑-5-基)-3-(4-甲基苯基)四氢嘧啶-2(1H)酮(10c):白色固体, 收率89%. m.p. 249~250 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.03 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.46 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 7.20 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 7.11 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 3.77~3.73 (m, 4H), 2.26 (s, 3H), 2.20~2.15 (m, 2H); ¹³C NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ: 154.0, 141.9, 137.8, 137.5, 133.8, 133.4, 128.7, 126.3, 125.6, 122.7, 117.1, 109.6, 49.7, 48.9, 22.7, 20.5; HRMS (ESI) calcd for C₁₈H₁₉N₄O (M+H)⁺ 307.1553, found 307.1542.

  3.2.7   1-(1-(叔丁氧羰基)-1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(11)的制备

  将化合物3 (100 mg, 0.463 mmol)、4-二甲氨基吡啶(DMAP) (1.2 mg, 0.01 mmol)溶于乙腈(2 mL)中, 加入二碳酸二叔丁酯(121 mg, 0.556 mmol), 室温下搅拌约3 h, TLC检测反应完全, 停止反应, 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析分离纯化[V(二氯甲烷):V(甲醇)＝50:1~20:1], 得108 mg化合物11, 收率74%.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.35 (s, 1H), 7.96 (d, J＝7.2 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.55 (d, J＝7.2 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 3.66 (t, J＝4.4 Hz, 2H), 3.25 (t, J＝4.8 Hz, 2H), 1.99~1.94 (m, 2H), 1.64 (s, 9H); HRMS (ESI) calcd for C₁₆H₂₀N₄O₃ (M+H)⁺ 317.1608, found 317.1602.

  3.2.8   1-苄基-3-(1-苄基-1H-吲唑-5-基)-四氢嘧啶酮啶-2(1H)-酮(12)、3-(1-苄基-1H-吲唑-5-基)-2-氧四氢嘧啶酮啶-1(2H)-甲酸叔丁酯13, 14的制备

  将化合物11 (100 mg, 0.316 mmol)溶于无水1, 4-二氧六环(2 mL)中, 0 ℃下依次加入60% NaH (19 mg, 0.474 mmmol)和溴苄(65 mg, 0.379 mmmol), 室温下搅拌约3 h, TLC检测反应完全.加入饱和氯化铵中止反应.二氯甲烷稀释, 依次用水和饱和氯化钠溶液洗, 无水硫酸钠干燥.过滤, 减压蒸除溶剂, 制备TLC分离纯化[V(二氯甲烷):V(甲醇)＝25:1], 得45 mg化合物12, 46 mg化合物13, 10 mg化合物14, 9 mg化合物15, 总收率86%.

  3-(1-苄基-1H-吲唑-5-基)-2-氧四氢嘧啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(12): ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.09 (s, 1H), 7.68~7.66 (m, 2H), 7.29~7.20 (m, 6H), 5.65 (s, 2H), 3.70 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 3.60 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 2.07~2.00 (m, 2H), 1.41 (s, 9H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆)δ: 152.7, 151.7, 137.7, 137.5, 136.8, 133.1, 128.5, 127.5, 127.3, 126.3, 123.8, 118.4, 110.0, 81.1, 51.9, 49.7, 43.9, 27.7, 22.6; HRMS (ESI) calcd for C₂₃H₂₆N₄O₃ (M+H)⁺ 407.2078, found 407.2067.

  3-(2-苄基-1H-吲唑-5-基)-2-氧四氢嘧啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(13): ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.49 (s, 1H), 7.59~7.51 (m, 2H), 7.34~7.27 (m, 5H), 7.13 (dd, J＝2.0, 9.2 Hz, 1H), 5.64 (s, 2H), 3.67 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 3.60 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 2.05~2.02 (m, 2H), 1.41 (s, 9H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ: 152.7, 151.6, 146.7, 137.1, 137.0, 128.5, 127.8, 127.7, 126.2, 124.5, 121.2, 117.4, 117.3, 81.0, 56.3, 49.5, 43.9, 27.7, 22.7; HR-MS (ESI) calcd for C₂₃H₂₆N₄O₃ (M+H)⁺ 407.2078, found 407.2064.

  1-苄基-3-(1-苄基-1H-吲唑-5-基)-四氢嘧啶酮-2(1H)-酮(14): ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.05 (s, 1H), 7.62~7.58 (m, 2H), 7.36~7.20 (m, 11H), 5.64 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 3.67 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 3.28 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 2.05~1.98 (m, 2H); HRMS (ESI) calcd for C₂₅H₂₅N₄O (M+H)⁺ 397.2023, found 397.2023.

  1-苄基-3-(2-苄基-1H-吲唑-5-基)-四氢嘧啶酮-2(1H)-酮(15): ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.42 (s, 1H), 7.55~7.45 (m, 2H), 7.36~7.25 (m, 10H), 7.17 (dd, J＝9.2, 2.0 Hz, 1H), 5.62 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 3.66 (t, J＝5.6 Hz, 2H), 3.28 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 2.03~1.97 (m, 2H); HRMS (ESI) calcd for C₂₅H₂₅N₄O (M+H)⁺ 397.2023, found 397.2022.

  3.2.9   3-叔丁氧羰基-1-(1H-吲唑-5-基)四氢嘧啶-2(1H)酮(16)的制备

  将化合物11 (50 mg, 0.158 mmol)溶于无水1, 4-二氧六环(1 mL)中, 0 ℃加入60% NaH (10 mg, 0.237 mmmol)室温下搅拌约3 h, TLC检测反应完全.加入饱和氯化铵中止反应.二氯甲烷稀释, 依次用水, 饱和氯化钠溶液洗, 无水硫酸钠干燥.过滤, 减压蒸除溶剂, 硅胶柱层析分离纯化[V(二氯甲烷):V(甲醇)＝50:1], 得44 mg化合物12, 收率88%.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 13.08 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.65 (d, J＝1.2 Hz, 1H), 7.51 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 7.25 (dd, J＝1.6, 8.8 Hz, 1H), 3.72 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 3.61 (t, J＝6.0 Hz, 2H), 2.07~2.00 (m, 2H), 1.42 (s, 9H); HRMS (ESI) calcd for C₁₆H₂₀N₄O₃Na (M+Na)⁺ 339.1428, found 339.1423.

  3.3   药理活性实验

  3.3.1   ROCK I激酶抑制活性

  采用酶联免疫吸附方法(ELISA)对ROCK I激酶活性进行检测.使用商品化ELISA试剂盒(CY-1160), 其中包含已用ROCK I磷酸化底物MBS (MYPT1)包被的96孔板, 在三磷酸腺苷(ATP)存在下ROCK I可与底物反应, 使底物696位苏氨酸残基磷酸化.应用辣根过氧化物酶(HRP)标记苏氨酸磷酸化特异性单克隆抗体作为探针, 与磷酸化的苏氨酸残基特异性结合, 通过显色, 测定其吸光度, 以反映ROCK I的活性.

  3.3.2   脑基底膜血管舒张活性

  采用Danish Myo Technology (DMT)公司620M四通道微血管张力测定系统对大鼠离体脑基底动脉血管张力进行测定, 通过高K⁺刺激血管收缩, 加入化合物, 观察其舒张血管活性.

  取一个100 mL烧杯, 倒入少量配制好的预冷生理食盐水(PSS)缓冲液, 通入95% O₂和5% CO₂混合气预饱和, 并将培养皿置于冰上预冷.断头处死大鼠, 取大脑, 固定, 剥开脑膜, 分离脑基底血管, 将血管条剪成长度约为2 mm的血管环.

  打开微血管张力测定仪开关, 仪器加热至37℃.取下测定仪上的一个通道置于解剖镜下, 剪取一段直径为40 μm的钨丝, 钨丝一端置于在浴槽内固定架的右端, 用上端螺丝固定紧, 血管环于钨丝的另一端套入, 该端同样固定在固定架右端, 用下端螺丝固定好.另剪取一段钨丝, 先穿进已固定的血管环中, 钨丝两端固定在固定架左端, 拧紧上下螺丝将钨丝拉紧.最后调整左右端钨丝, 使两根钨丝处于水平状态.将微血管仪显示器上各通道张力调零后进行4个通道最佳初始张力的调整.稳定1 h, 期间每20 min换一次预先温浴的PSS缓冲液.用KCl-PSS溶液(60 mmol•L^－1)刺激血管收缩到达平台期后, 累积给予0.1~100 μmol•L^－1的衍生物, 测定其EC₅₀值.

  3.4   分子对接实验

  分子对接采用BIOVIA公司的Discovery Studio 2016程序, 所使用的蛋白质晶体结构的PDB编号为3NDM (www.rcsb.org)^[33].利用Receptor-Ligand Interactions模块下的Dock ligands (Libdock)程序进行分子对接, 以共晶配体小分子的坐标作为参数定义活性位点, 其他参数采用缺省值.

  辅助材料(Supporting Information) 化合物6a~6i, 8a~8d和10a~10c的¹H NMR, ¹³C NMR谱图, 化合物11的¹H NMR、NOE谱图以及化合物12, 13的HSQC, HMBC图谱.这些材料可以免费从本刊网站(http://sioc-journal.cn/)上下载.

• 1. [1]

     Zhang, X. F.; Hu, D. Y.; Ding, R. J.; Wang, H. C.; Yan, L. X. Chin. J. Cardiol. 2012, 40, 179. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22801260

  2. [2]

     Matozaki, T.; Nakanishi, H.; Takai, Y. Cell. Signalling 2000, 12, 515. doi: 10.1016/S0898-6568(00)00102-9

  3. [3]

     Mueller, B. K.; Mack, H.; Teuseh, N. Nat. Rev. Drug Discovery 2005, 4, 387. doi: 10.1038/nrd1719

  4. [4]

     Riento, K.; Ridley, A. J. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2003, 4, 446. doi: 10.1038/nrm1128

  5. [5]

     Nakagawa, O.; Fujisawa, K.; Ishizaki, T.; Saito, Y.; Nakao, K.; Narumiya, S. FEBS Lett. 1996, 392, 189. doi: 10.1016/0014-5793(96)00811-3

  6. [6]

     Wirth, A. Biochim. Biophys. Acta 2010, 1802, 1276. doi: 10.1016/j.bbadis.2010.05.002

  7. [7]

     Barbara, E. R.; Nathalie, F. W.; Cameron, J. W.; Julie, H. C.; Gordon, R. C. Atherosclerosis 2005, 183, 1. doi: 10.1016/j.atherosclerosis.2005.04.023

  8. [8]

     Surma, M.; Wei, L.; Shi, J. J. Future Cardiol. 2011, 7, 657. doi: 10.2217/fca.11.51

  9. [9]

     Sauzeau, V.; Le, M. E.; Bertoqlio, J.; Scalbert, E.; Pacaud, P.; Loirand, G. Circ. Res. 2001, 88, 1102. doi: 10.1161/hh1101.092034

  10. [10]

      Shin, H.; Salomone, S.; Ayata, C. Expert Opin. Ther. Targets 2008, 12, 1547. doi: 10.1517/14728220802539244

  11. [11]

      Hu, E.; Lee, D. Curr. Opin. Invest. Drugs 2003, 4, 1065. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14582450

  12. [12]

      Nakahara, T.; Moriuchi, H.; Yunoki, M.; Sakamato, K. Y Eur. J. Pharmacol. 2000, 389, 103. doi: 10.1016/S0014-2999(99)00891-2

  13. [13]

      Oka, M.; Fagan, K.; Jone, P.; McMutry, I. Br. J. Pharmacol. 2008, 155, 444. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18536743

  14. [14]

      Ying, H.; Biroc, S. L.; Li, W.; Alicke, B.; Xuan, J. A. Mol. Cancer Ther. 2005, 5, 2158. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16985048

  15. [15]

      Somlyo, C.; Phelps, C.; Dipiperro, M.; Eto, M.; Read, P.; Barrett, M.; Gibson, J. FASEB J. 2003, 17, 223. doi: 10.1096/fj.02-0655com

  16. [16]

      Feng, Y. B.; Cameron, M. D.; Frackowiak, B.; Evelyn, G.; Li L.; Claudia R.; Thomas, S.; Philip, L. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2007, 17, 2355. doi: 10.1016/j.bmcl.2006.12.043

  17. [17]

      Chen, Y. T.; Thomas, D. B.; Weiser, A.; Griffin, E.; Lin, L.; Ruiz, C.; Michael, D. C.; Stephan, S.; Derek, D.; Thomas, S.; LoGrasso, P.; Feng, Y. B. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2008, 18, 6406. doi: 10.1016/j.bmcl.2008.10.080

  18. [18]

      Sessions, E. H.; Yin, Y.; Thomas, D. B.; Weiser, A.; Griffin, E.; Pocas, J.; Cameron, M. D.; Ruiz, C.; Lin, L.; Schurer, S. C.; Schroter, T.; LoGrasso, P.; Feng, Y. B. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2008, 18, 6390. doi: 10.1016/j.bmcl.2008.10.095

  19. [19]

      Sessions, E. H.; Smolinski, M.; Wang, B.; Frackowiak, B.; Chowdhury, S.; Yin, Y.; Chen, Y. T.; Ruiz, C.; Lin, L.; Pocas, J.; Schroter, T.; Cameron, M. D.; LoGrasso, P.; Feng, Y. B.; Bannister, T. D. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2010, 20, 1939. doi: 10.1016/j.bmcl.2010.01.124

  20. [20]

      Yin, Y.; Lin, L.; Ruiz C.; Cameron, M. D.; Pocas, J.; Grant, W.; Schroter, T.; Chen, W.; Duckett, D.; Schurer, S.; LoGrasso, P.; Feng, Y. B. Bioorg. Med Chem. Lett. 2009, 19, 6686. doi: 10.1016/j.bmcl.2009.09.115

  21. [21]

      Fang, X. G.; Chen, Y. T.; Sessions, E. H.; Chowdhury, S.; Vojkovsky, T.; Yin, Y.; Pocas, J. R.; Grant, W.; Schroter, T.; Lin, L.; Ruiz, C.; Cameron, M. D.; LoGrasso, P.; Feng, Y. B. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2011, 21, 1844. doi: 10.1016/j.bmcl.2011.01.039

  22. [22]

      Chowdhury, S.; Chen, Y. T.; Fang, X. G.; Grant, W.; Pocas, J.; Cameron, M. D.; Ruiz, C.; Lin, L.; Park, H.; Schroter, T.; Bannister, T. D.; Feng, Y. B. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2013, 23, 1592. doi: 10.1016/j.bmcl.2013.01.109

  23. [23]

      Takami, A.; Iijima, H.; Iwakubo, M.; Okada, Y. EP 1256574, 2001. http://www.google.com/patents/EP1256574A4?cl=en

  24. [24]

      Iwakubo, M.; Takami, A.; Okada, Y.; Kawata, T.; Tagami, Y.; Sato, M.; Sugiyama, T.; Fukushima, K.; Taya, S.; Amano, M.; Kaibuchi, K.; Iijima, H. Bioorg. Med. Chem. 2007, 15, 1022. doi: 10.1016/j.bmc.2006.10.028

  25. [25]

      Henderson, A. J.; Hadden, M.; Guo, C.; Douglas, N.; Decornez, H.; Hellberg, M. R.; Rusinko, A.; McLaughlin, M.; Sharif, N.; Drace, C.; Patril, R. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2010, 20, 1137. doi: 10.1016/j.bmcl.2009.12.012

  26. [26]

      Feng, Y. B.; Philip, V. L.; Olivier, D.; Li, R. S. J. Med. Chem. 2016, 59, 2269. doi: 10.1021/acs.jmedchem.5b00683

  27. [27]

      Yao, Y. Y.; Li, R. Z.; Liu, X. Y.; Yang, F. L.; Yang, Y.; Li, X. Y.; Shi, X.; Yuan, T. Y.; Fang, L. H.; Du, G. H.; Jiao, X. Z.; Xie, P. Molecules 2017, 22, 1766. doi: 10.3390/molecules22101766

  28. [28]

      Li, R. S.; Martin, M. P.; Liu, Y.; Khan, S.; Cameron, M. D.; Grant, W.; Pocas, J.; Eid, N.; Park, H.; Schroter, T.; LoGrasso, P.; Feng, Y. B. J. Med. Chem. 2012, 55, 2474. doi: 10.1021/jm201289r

  29. [29]

      陈仲强, 李泉, 现代药物的制备与合成, 化学工业出版社, 北京, 2011, p. 55.Chen, J. Q.; Li, Q. Preparation and Synthesis of Modern Drugs, Chemical Industry Press, Beijing, 2011, p. 55(in Chinese).

  30. [30]

      Marco, B.; Astrid, E.; Michele, T.; Achille, U. R. Angew. Chem., Int. Ed. 2008, 47, 3238. doi: 10.1002/(ISSN)1521-3773

  31. [31]

      Mathieu, G.; Olivier, B. Org. Lett. 2012, 14, 398. doi: 10.1021/ol2031763

  32. [32]

      Bian, C. C.; Yan, R.; Yu, X. M. Tetrahedron 2014, 70, 2982. doi: 10.1016/j.tet.2014.03.020

  33. [33]

      Bosanac, T.; Hickey, E. R.; Ginn, J.; Kashem, M.; Kerr, S., Kugler, S.; Li, X.; Olague, A.; Schlyer, S.; Young, E. R. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2010, 20, 3746. doi: 10.1016/j.bmcl.2010.04.069

• 

  图 1  化合物Ⅰ, Ⅱ和Ⅲ的结构

  Figure 1  Structure of compounds Ⅰ, Ⅱ and Ⅲ

  下载: 全尺寸图片 幻灯片
  

  图式 1  化合物6a~6i, 8a~8d和10a~10c的合成

  Scheme 1  Syntheses of compounds 6a~6i, 8a~8d and 10a~10c

  下载: 全尺寸图片 幻灯片
  

  图式 2  化合物12~15的合成

  Scheme 2  Synthesis of compounds 12~15

  下载: 全尺寸图片 幻灯片
  

  Scheme 3  Boc基迁移的可能的机理

  Scheme 3  Possible mechanism of Boc group shift

  下载: 全尺寸图片 幻灯片
  

  图 2  化合物8a, 8b和I与ROCK I的对接结构

  Figure 2  Docking structure of compounds 8a, 8b and I

  下载: 全尺寸图片 幻灯片

  表 1  20 μmol•L^－1浓度下化合物6a~6i, 8a~8d, 10a~10c的ROCK I的抑制率^a

  Table 1.  Inhibition ratio of 6a~6i, 8a~8d, 10a~10c for ROCK I at the concentration of 20 μmol•L^－1

  Compound	Inhibition/%
  6a	10.3
  6b	23.1
  6c	13.4
  6d	19.4
  6e	NA
  6f	NA
  6g	29.3
  6h	NA
  6i	NA
  8a	48.4
  8b	35.7
  8c	18.1
  8d	NA
  10a	NA
  10b	30.1
  10c	NA
  I	77.7
  Fasudil	71.1
  a These data were obtained by single determination. NA: no activity.

  下载: 导出CSV

  表 2  化合物8a和8b的ROCK I的IC₅₀值和舒张血管的EC₅₀值^a

  Table 2.  IC₅₀ value of compounds 8a and 8b for ROCK I and the EC₅₀ value of vasorelaxant activity

  Compound	IC50/(μmol•L－1)	EC50/(μmol•L－1)
  8a	6.01	15.92
  8b	9.46	20.61
  I	0.17	ND
  Fasudil	0.36	ND
  a These data were obtained by single determination. ND: no determination.

  下载: 导出CSV
•