液相色谱-同位素稀释串联质谱法定量分析重组N末端B型利钠肽原

孙泽朋 王洪彬 陈金超 宋德伟 李红梅 肖鹏

引用本文: 孙泽朋, 王洪彬, 陈金超, 宋德伟, 李红梅, 肖鹏. 液相色谱-同位素稀释串联质谱法定量分析重组N末端B型利钠肽原[J]. 分析化学, 2023, 51(1): 120-129. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.221162 shu
Citation:  SUN Ze-Peng,  WANG Hong-Bin,  CHEN Jin-Chao,  SONG De-Wei,  LI Hong-Mei,  XIAO Peng. Quantitative Analysis of Recombinant N-terminal Pro-brain Natriuretic Peptide by Liquid Chromatography Coupled with Isotope Dilution Mass Spectrometry[J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2023, 51(1): 120-129. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.221162 shu

液相色谱-同位素稀释串联质谱法定量分析重组N末端B型利钠肽原

    通讯作者: 王洪彬,E-mail:whb@tust.edu.cn; 肖鹏,E-mail:xiaop@nim.ac.cn
  • 基金项目:

    国家重点研发计划项目(No.2019YFF0216505)和中国计量科学研究院基本科研业务费项目(Nos.AKYZD2115-2,AKYGH2002)资助。

摘要: N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)是心力衰竭临床诊断的重要生物标志物之一。目前,国际上尚没有NT-proBNP标准物质,无法在溯源链顶端开展量值传递,不利于下游测量结果的统一和对比。为了实现NT-proBNP的标准化检测,本研究针对重组NT-proBNP开展了溯源技术研究。首先采用蛋白免疫印迹和质谱法对被测物进行了分析。在绝对定量分析方法研究中,采用两种同位素稀释质谱法对NT-proBNP样品进行了定值。结果表明,重组NT-proBNP具有良好的抗体结合活性,并且分子量与理论值一致,可用于后续的定量分析方法研究。在氨基酸同位素稀释质谱法中,NT-proBNP水解48h后达到平衡,通过对水解样品中缬氨酸、异亮氨酸和精氨酸的测量,计算得到NT-proBNP溶液的质量分数为79.62μg/g(RSD=0.89%);在肽段同位素稀释质谱法中,当NT-proBNP与蛋白酶质量比为25∶1、酶解24h后,通过检测两条特征肽段,计算得到NT-proBNP溶液质量分数为76.04μg/g(RSD=1.85%)。两种方法测量结果基本一致。由于定量氨基酸是具有计量学溯源性的国家一级标准物质,因此基于本方法的NT-proBNP测量结果具备了溯源性,为标准物质的研制奠定了基础。

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  • 收稿日期:  2022-04-02
  • 修回日期:  2022-10-13
通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com
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    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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