蛋白修饰定量质谱法研究两种不同作用模式基因毒化合物对组蛋白H3乙酰化的影响

瞿敏敏 陈佳 徐斌 李治 郭磊 徐华 谢剑炜

引用本文: 瞿敏敏, 陈佳, 徐斌, 李治, 郭磊, 徐华, 谢剑炜. 蛋白修饰定量质谱法研究两种不同作用模式基因毒化合物对组蛋白H3乙酰化的影响[J]. 分析化学, 2022, 50(6): 940-947. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.221025 shu
Citation:  QU Min-Min,  CHEN Jia,  XU Bin,  LI Zhi,  GUO Lei,  XU Hua,  XIE Jian-Wei. Determination of Genotoxic Compounds with Different Modes of Action on Histone H3 Acetylation by Protein Modification Quantitative Mass Spectrometry[J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2022, 50(6): 940-947. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.221025 shu

蛋白修饰定量质谱法研究两种不同作用模式基因毒化合物对组蛋白H3乙酰化的影响

    通讯作者: 徐华,E-mail:huarxu@163.com
  • 基金项目:

    国家自然科学基金项目(No.21974151)资助。

摘要: 建立了细胞中组蛋白H3的9位(H3K9ac)或14位(H3K14ac)赖氨酸乙酰化及其相应原型特征多肽片段的高效液相色谱-三重四极杆质谱同时定量分析方法。样品经胰酶消化、丙酰化衍生、除盐及肽段富集等前处理后,在ACQUITY UPLCBEH C18色谱柱上分离,采用质谱技术在正离子多反应监测模式(MRM)下检测。空白细胞样品中组蛋白H3的各特征肽段在1~250 ng/mL浓度范围内线性关系良好(R2> 0.99),检出限(LOD,S/N=3)均为0.1 ng/mL,准确度、精密度、基质效应及提取回收率均符合方法学要求。本方法具有操作简便、灵敏度高、检测速度快及定量分析准确等优势。将本方法应用于2种典型的不同作用模式的基因毒性化合物(喜树碱和秋水仙碱)对2种人源细胞株即肝癌细胞HepG2和宫颈癌细胞HeLa中组蛋白H3的9位或14位赖氨酸乙酰化修饰影响的研究,测得了组蛋白H3中H3K9ac及H3K14ac修饰含量的变化,探讨了其与不同基因毒性化合物作用模式的关系,为基因毒性化合物的DNA损伤/修复及转录研究提供了技术支持。

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    1. [1]

      PHILLIPS D H, ARLT V M. EXS, 2009, 99:87-110.PHILLIPS D H, ARLT V M. EXS, 2009, 99:87-110.

    2. [2]

      SZEKELY G, AMORES D, GIL M, FERREIRA F C, HEGGIE W. Chem. Rev., 2015, 115(16):8182-8229.SZEKELY G, AMORES D, GIL M, FERREIRA F C, HEGGIE W. Chem. Rev., 2015, 115(16):8182-8229.

    3. [3]

      QU Min-Min, CHEN Jia, XU Bin, ZHANG Ya-Jiao, XU Hua, XIE Jian-Wei. Chin. J. Anal. Chem., 2021, 49(9):1531-1539.瞿敏敏, 陈佳, 徐斌, 张雅姣, 徐华, 谢剑炜.分析化学, 2021, 49(9):1531-1539.

    4. [4]

      MISHIMA M. Front. Biosci., 2017, 9(1):1-16.MISHIMA M. Front. Biosci., 2017, 9(1):1-16.

    5. [5]

      MOTOYAMA S, TAKEIRI A, TANAKA K, HARADA A, MATSUZAKI K, TAKETO J, MATSUO S, FUJII E, MISHIMA M. Genes Environ., 2018, 40:10.MOTOYAMA S, TAKEIRI A, TANAKA K, HARADA A, MATSUZAKI K, TAKETO J, MATSUO S, FUJII E, MISHIMA M. Genes Environ., 2018, 40:10.

    6. [6]

      KOUZARIDES T. Cell, 2007, 128(4):693-705.KOUZARIDES T. Cell, 2007, 128(4):693-705.

    7. [7]

      SHIN D M, KUCIA M, RATAJCZAK M Z. Gerontology, 2011, 57(1):76-84.SHIN D M, KUCIA M, RATAJCZAK M Z. Gerontology, 2011, 57(1):76-84.

    8. [8]

      PETERSON C L, LANIEL M A. Curr. Biol., 2004, 14(14):R546-R551.PETERSON C L, LANIEL M A. Curr. Biol., 2004, 14(14):R546-R551.

    9. [9]

      KIMURA H. J. Hum. Genet., 2013, 58(7):439-445.KIMURA H. J. Hum. Genet., 2013, 58(7):439-445.

    10. [10]

      GRUNSTEIN M. Nature, 1997, 389(6649):349-352.GRUNSTEIN M. Nature, 1997, 389(6649):349-352.

    11. [11]

      WANG Z, ZANG C, ROSENFELD J A, SCHONES D E, BARSKI A, CUDDAPAH S, CUI K, ROH T Y, PENG W, ZHANG M Q. Nat. Genet., 2008, 40(7):897-903.WANG Z, ZANG C, ROSENFELD J A, SCHONES D E, BARSKI A, CUDDAPAH S, CUI K, ROH T Y, PENG W, ZHANG M Q. Nat. Genet., 2008, 40(7):897-903.

    12. [12]

      FUCHS S M, KRAJEWSKI K, BAKER R W, MILLER V L, STRAHL B D. Curr. Biol., 2011, 21(1):53-58.FUCHS S M, KRAJEWSKI K, BAKER R W, MILLER V L, STRAHL B D. Curr. Biol., 2011, 21(1):53-58.

    13. [13]

      SAWAN C, HERCEG Z. Adv. Genet., 2010, (70):57-85.SAWAN C, HERCEG Z. Adv. Genet., 2010, (70):57-85.

    14. [14]

      FISCHLE W, WANG Y, ALLIS C D. Curr. Opin.Cell Biol., 2003, 15(2):172-183.FISCHLE W, WANG Y, ALLIS C D. Curr. Opin.Cell Biol., 2003, 15(2):172-183.

    15. [15]

      ZHANG C, MOLASCON A J, GAO S, LIU Y, ANDREWS P C. Mol. Cell Proteomics, 2013, 12(6):1678-1688.ZHANG C, MOLASCON A J, GAO S, LIU Y, ANDREWS P C. Mol. Cell Proteomics, 2013, 12(6):1678-1688.

    16. [16]

      QU M M, XU H, CHEN J, ZHANG Y J, XU B, GUO L, XIE J W. Chem. Res. Toxicol., 2020, 33(8):2108-2119.QU M M, XU H, CHEN J, ZHANG Y J, XU B, GUO L, XIE J W. Chem. Res. Toxicol., 2020, 33(8):2108-2119.

    17. [17]

      QU M M, XU H, LI W J, CHEN J, ZHANG Y J, XU B, LI Z, LIU T, GUO L, XIE J W. Arch. Toxicol., 2021, 95(11):3559-3573.QU M M, XU H, LI W J, CHEN J, ZHANG Y J, XU B, LI Z, LIU T, GUO L, XIE J W. Arch. Toxicol., 2021, 95(11):3559-3573.

    18. [18]

      QU Min-Min, CHEN Jia, ZHANG Ya-Jiao, XU Bin, XU Hua, XIE Jian-Wei. Chin. J. Anal. Chem., 2021, 49(12):2039-2047.瞿敏敏, 陈佳, 张雅姣, 徐斌, 徐华, 谢剑炜.分析化学, 2021, 49(12):2039-2047.

    19. [19]

      LIN S, GARCIA B A. Methods Enzymol., 2012, 512(3):3-28.LIN S, GARCIA B A. Methods Enzymol., 2012, 512(3):3-28.

    20. [20]

      GARCIA B A, MOLLAH S, UEBERHEIDE B M, BUSBY S A, MURATORE T L, SHABANOWITZ J, HUNT D F.Nat. Protoc., 2007, 2(4):933-938.GARCIA B A, MOLLAH S, UEBERHEIDE B M, BUSBY S A, MURATORE T L, SHABANOWITZ J, HUNT D F.Nat. Protoc., 2007, 2(4):933-938.

    21. [21]

      US Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research Center for Veterinary Medicine.Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation[EB/OL]. www. fad. gov/cvm. 2019.US Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research Center for Veterinary Medicine.Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation[EB/OL]. www. fad. gov/cvm. 2019.

    22. [22]

      VEMPATI R K, HALDAR D. Mol. Biol. Rep., 2012, 39(1):303-308.VEMPATI R K, HALDAR D. Mol. Biol. Rep., 2012, 39(1):303-308.

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  • 收稿日期:  2022-01-14
  • 修回日期:  2022-03-31
通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com
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    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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