基于毛细管电泳法-指数富集配体系统进化筛选维吉霉素M1适配体及其检测应用

蔡先洪 孙强 吴谦 叶浩楠 巫沁芳 区文卉 陈锦灿 陈兰美

引用本文: 蔡先洪, 孙强, 吴谦, 叶浩楠, 巫沁芳, 区文卉, 陈锦灿, 陈兰美. 基于毛细管电泳法-指数富集配体系统进化筛选维吉霉素M1适配体及其检测应用[J]. 分析化学, 2022, 50(5): 728-738. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.210827 shu
Citation:  CAI Xian-Hong,  SUN Qiang,  WU Qian,  YE Hao-Nan,  WU Qin-Fang,  OU Wen-Hui,  CHEN Jin-Can,  CHEN Lan-Mei. Screening of Virginiamycin M1 Aptamer Based on Capillary Electrophoresis-Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment and Application[J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2022, 50(5): 728-738. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.210827 shu

基于毛细管电泳法-指数富集配体系统进化筛选维吉霉素M1适配体及其检测应用

    通讯作者: 陈锦灿,E-mail:jincanchen@126.com; 陈兰美,E-mail:lanmeichen@126.com
  • 基金项目:

    南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江)重大项目(No.ZJW-2019-007)、湛江市竞争性分配项目(No.2021A05037)和2021年国家级大学生创新训练项目(No.202110571028)资助。

摘要: 毛细管电泳(Capillary electrophoresis,CE)是一种高效筛选核酸适配体的方法,具有分离效率高、样品用量少、筛选成本低等特点。本研究基于毛细管电泳-指数富集配体系统进化技术(CE-SELEX)建立了维吉霉素M1(VGM-M1)适配体的筛选方法。将初始ssDNA库与VGM-M1混合孵育,通过毛细管电泳-紫外检测器(CE-UV)分离并收集结合物,通过PCR扩增和ssDNA制备,得到下一轮的子库ssDNA。经过4轮筛选后,获得富集程度较高的前10条候选适配体序列,选择富集程度最高的前4条候选序列进行亲和力及特异性评估,得到亲和力最大以及特异性最强的VGM-M1适配体Seq 1,其平衡常数(Kd)为49 nmol/L。将适配体Seq 1进行结构修饰改造,得到剪短候选适配体序列,并对其进行亲和力以及特异性评估。结果表明,结构修饰后的适配体Seq 1-1具有更高的亲和力及特异性,其Kd低至45 nmol/L。使用竞争性酶联适配体可视化检测方法对VGM-M1进行检测,检出限低至51 ng/mL,低于国标对VGM-M1的最高残留限量(100 μg/L)。进一步对牛奶中VGM-M1进行检测,加标回收率达到97.8%~103.2%。研究结果表明,基于CE-SELEX筛选的适配体Seq 1-1可特异性识别VGM-M1,可以应用于实际样品中VGM-M1的检测。

English


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  • 收稿日期:  2021-11-04
  • 修回日期:  2022-02-12
通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com
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    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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