基于核酸外切酶-Ⅲ和金片基底捕获循环策略用于锰超氧化物岐化酶DNA的检测

王海飞 唐英 闫晓梅 陈增萍 陈瑶

引用本文: 王海飞, 唐英, 闫晓梅, 陈增萍, 陈瑶. 基于核酸外切酶-Ⅲ和金片基底捕获循环策略用于锰超氧化物岐化酶DNA的检测[J]. 分析化学, 2022, 50(5): 720-727. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.210740 shu
Citation:  WANG Hai-Fei,  TANG Ying,  YAN Xiao-Mei,  CHEN Zeng-Ping,  CHEN Yao. Exonuclease Ⅲ and Gold Substrate Capturing Cyclic Strategy for Detection of Manganese Superoxide Dismutase DNA[J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2022, 50(5): 720-727. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.210740 shu

基于核酸外切酶-Ⅲ和金片基底捕获循环策略用于锰超氧化物岐化酶DNA的检测

    通讯作者: 唐英,E-mail:yingtang@hnu.edu.cn; 陈瑶,E-mail:chenyao717@hnu.edu.cn
  • 基金项目:

    国家自然科学基金项目(Nos.21705044,21804040)、湖南省自然科学基金项目(Nos.2018JJ3114,2019JJ50134)、湖南省教育厅科学研究项目(No.19C0554)和化学生物传感与计量学国家重点实验室开放课题项目(No.2018015)资助。

摘要: 利用核酸外切酶Ⅲ辅助信号放大技术和金片基底捕获循环策略,设计了一种灵敏且简单的锰超氧化物岐化酶基因序列(MnSOD DNA)检测方法。首先设计合成了标记荧光基团的发夹探针,在MnSOD DNA存在下,探针发夹结构被打开,然后在核酸外切酶Ⅲ的作用下,发夹探针部分被水解,释放出MnSOD DNA和标记荧光基团的残余发夹探针片段,MnSOD DNA可继续与剩余的完整发夹探针杂交,进入下一个循环。因此,反应一定时间后,反应液中含有大量的带有标记荧光基团的残余发夹探针片段,可与金片基底上修饰的捕获探针杂交而被捕获,通过检测其荧光,可实现对MnSOD DNA的定量分析,方法检出限为0.42 pmol/L。将本方法用于检测Hela、Jurkat和Ramos细胞裂解液中的MnSOD DNA,加标回收率在90.2%~111.2%之间。本方法可有效消除背景干扰和基质效应的影响,有望成为一种通用的短链DNA的检测方法。

English


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  • 收稿日期:  2021-09-13
  • 修回日期:  2021-12-01
通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com
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    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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