毛细管电泳法筛选人IgG的Fc片段核酸适配体

杨歌 韩诗邈 赵丽萍 朱超 黄渊余 屈锋

引用本文: 杨歌,  韩诗邈,  赵丽萍,  朱超,  黄渊余,  屈锋. 毛细管电泳法筛选人IgG的Fc片段核酸适配体[J]. 分析化学, 2020, 48(5): 601-607. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.191761 shu
Citation:  YANG Ge,  HAN Shi-Miao,  ZHAO Li-Ping,  ZHU Chao,  HUANG Yuan-Yu,  QU Feng. Screening of Aptamer for Human IgG Fc Fragment by Capillary Electrophoresis-Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment[J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2020, 48(5): 601-607. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.191761 shu

毛细管电泳法筛选人IgG的Fc片段核酸适配体

  • 基金项目:

    本文系国家自然科学基金项目(Nos.21675012,21874010,21827810)资助

摘要: 基于毛细管电泳-指数富集配体系统进化技术(CE-SELEX)建立了免疫球蛋白G(IgG)的Fc片段的核酸适配体筛选方法。通过毛细管区带电泳方法分析IgG完整蛋白、Fc与Fab片段的样品的纯度、荷电性质及是否吸附的特征,并比较三者与核酸库的亲和力。结果表明,IgG与核酸库形成明显的复合物,而Fc和Fab片段与核酸库的亲和力很弱。在筛选Fc片段的适配体时,选择Fab片段作为反筛靶,对去除非特异性结合序列无显著作用。设计了针对Fc片段的适配体筛选方案,在优化的孵育条件(10 mmol/L Na2HPO4-KH2PO4 (pH 7.17),0.05 mmol/L Mg2+,37℃孵育25 min)下,经3轮筛选获得Fc片段的核酸适配体Seq Fc1-3,KD值为0.071-0.321 μmol/L,经胶体金比色分析方法验证了其亲和力与特异性。

English


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  • 收稿日期:  2019-12-24
  • 修回日期:  2020-01-15
通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com
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    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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