毛细管电泳法筛选脱铁转铁蛋白的核酸适配体及筛选影响因素分析

杨歌 赵毅 韩诗邈 朱超 黄渊余 屈锋

引用本文: 杨歌,  赵毅,  韩诗邈,  朱超,  黄渊余,  屈锋. 毛细管电泳法筛选脱铁转铁蛋白的核酸适配体及筛选影响因素分析[J]. 分析化学, 2020, 48(5): 632-641. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.191694 shu
Citation:  YANG Ge,  ZHAO Yi,  HAN Shi-Miao,  ZHU Chao,  HUANG Yuan-Yu,  QU Feng. Screening Aptamer of Apo-transferrin via Capillary Electrophoresis-Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment and Environmental Factors Analysis[J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2020, 48(5): 632-641. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.191694 shu

毛细管电泳法筛选脱铁转铁蛋白的核酸适配体及筛选影响因素分析

  • 基金项目:

    本文系国家自然科学基金项目(Nos.21675012,21874010,21827810)资助

摘要: 核酸适配体是通过指数富集配体系统进化(SELEX)技术,在体外筛选获得的与目标分子有高亲和力与特异性的寡核苷酸序列。由于筛选过程周期长且影响因素复杂,使用常规筛选方法进行多因素影响的条件优化的工作量大,样品消耗多,目前还少有系统的研究报道。毛细管电泳(CE)具有高分辨率、快速分离、样品用量小、筛选成本低的优势,是核酸适配体筛选的有效方法。本研究以人血清中脱铁转铁蛋白(A-TF)为模式蛋白,利用CE方法研究核酸库长度、孵育温度、缓冲溶液的种类与pH值、金属离子等因素对靶蛋白与核酸库相互作用的影响。结果表明,较短序列的核酸库与靶蛋白的亲和力更高;孵育温度、缓冲液种类与pH值均影响靶蛋白与核酸复合物的形成;低浓度的K、Ca2+与Mg2+可促进复合物形成。基于优化的筛选条件,经过3轮毛细管电泳法筛选,获得了A-TF的适配体Seq A3,采用CE-LIF测得复合物的亲和常数KD=0.476 μmol/L。此适配体可用于人血清基质中A-TF的识别。

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  • 收稿日期:  2019-11-25
  • 修回日期:  2019-12-12
通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com
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    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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