液相色谱-质谱联用-定向进化酶组合技术应用于三萜类皂苷转化研究

孙红梅 陆泽林 赵幻希 郑飞 李晶 刘明 越皓 于珊珊

引用本文: 孙红梅,  陆泽林,  赵幻希,  郑飞,  李晶,  刘明,  越皓,  于珊珊. 液相色谱-质谱联用-定向进化酶组合技术应用于三萜类皂苷转化研究[J]. 分析化学, 2020, 48(1): 129-136. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.191501 shu
Citation:  SUN Hong-Mei,  LU Ze-Lin,  ZHAO Huan-Xi,  ZHENG Fei,  LI Jing,  LIU Ming,  YUE Hao,  YU Shan-Shan. Liquid Chromatography-Mass Spectrometry-Directed Evolution Enzyme Combination Technique for Investigation of Triterpenoid Saponin Transformation[J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2020, 48(1): 129-136. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.191501 shu

液相色谱-质谱联用-定向进化酶组合技术应用于三萜类皂苷转化研究

  • 基金项目:

    本文系吉林省科技发展计划项目(No.20170307029YY)和吉林省教育厅"十三五"科学技术项目(No.JJKH20181235KJ)资助

摘要: 利用定向进化技术重组糖苷酶ABQ,转化不同结构的三萜类皂苷(商陆皂苷甲、三七皂苷R1和柴胡皂苷A),通过高分离度液相色谱-四极杆飞行时间质谱鉴定转化的产物结构,阐明其转化机制。结果表明,重组糖苷酶ABQ能够催化商陆皂苷甲、三七皂苷R1和柴胡皂苷A侧链糖苷键的水解,转化为商陆皂苷乙、三七皂苷R2、柴胡次皂苷F和柴胡皂苷元F。根据色谱-质谱对反应产物的实时分析,ABQ对这3种三萜皂苷表现出不同的底物选择性,重组糖苷酶ABQ能够催化商陆皂苷甲C-3位外侧的葡萄糖水解,生成商陆皂苷乙;三七皂苷R1的C-20位葡萄糖被水解,生成三七皂苷R2;重组糖苷酶ABQ能够首先催化柴胡皂苷A的C-3位葡萄糖水解,生成柴胡次皂苷F,并继续催化C-3位的岩藻糖苷水解,生成柴胡皂苷元F。定向进化技术重组酶能够提高酶活力和作用环境适应能力,色谱-质谱联用通过原型和产物实时检测评价重组酶的作用。

English


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  • 收稿日期:  2019-08-15
  • 修回日期:  2019-11-08
通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com
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    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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