流体动力学逆流色谱分离柱研究进展

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流体动力学逆流色谱分离柱研究进展

浙江工业大学药学院杭州 310032

通讯作者: 童胜强 E-mail:sqtong@zjut.edu.cn

摘要: 近年来，以流体动力学为基础的逆流色谱仪在天然产物与生化药物分离中得到了广泛应用。柱设计是色谱体系的核心环节，分离柱管子的几何形状、安装方式，分离柱的位置、体积等因素都会对色谱行为和分离效率产生不同的影响。本文对基于流体动力学的现代逆流色谱分离柱的研制进展与应用情况进行综述，并对未来逆流色谱的改进进行了展望。

关键词:

逆流色谱
/ 分离柱

English

逆流色谱(CCC)是一种液液分配色谱技术，它不需要固定相的支撑，而是采用两相不互溶的液体或者溶液作为流动相和固定相，消除了样本在固定相的不可逆吸附^[1]。与传统的需要固定相支撑的色谱技术相比，它具有高效能、大装载量、样品变性风险低等优点。除此之外，逆流色谱仪还容易跟其他分离仪器在线联用^[2]。因此逆流色谱被广泛应用于复杂化合物的分离和纯化中^[3~6]。

自从1970年以来，各种不同的逆流色谱被研发出来。根据固定相的保留方式以及分离柱的设计不同，逆流色谱仪可以分为流体静力学逆流色谱仪和流体动力学逆流色谱仪。流体静力学色谱仪由一系列管体、腔体或小室组成，其间由管路或通道连接，只有一个旋转轴，可以产生连续不断恒定的离心力。第一台逆流色谱仪就是基于流体静力学的螺旋线圈逆流色谱仪(Toroidal coil CCC，TC-CCC)，它带有一个旋转密封塞，液体是通过旋转注射器引入的，它能够产生数以千计的理论塔板数，但是由于流体静力学只是通过重力而产生一个微弱的阿基米德螺旋力，因此分离一次样品需要仪器整晚的运作^[7]。为了解决这一问题，Ito等^[3]研发了一系列以流体动力学为基础的行星式分离仪系统。这些分离仪有一个或多个缠绕有多层聚四氟乙烯管的分离柱，不需要旋转密封接头，能够产生可变的离心力场。与流体静力学逆流色谱相比，流体动力学逆流色谱能提供更有效的混合以及更出色的分离效率。对这些逆流色谱仪的改造主要是通过对分离柱的改造来实现的，它的分离效率通过理论塔板数、分辨率以及固定相保留率来衡量。近年来，基于流体动力学逆流色谱分离柱的研究应用报道逐年增加，本文对以流体动力学为基础的逆流色谱分离柱研制现状进行了总结。

1.   分离柱结构与布局

根据分离柱的转动方向以及放置位置的不同，流体动力学逆流色谱仪可以分为J型、I型、X-L型等，现在使用最广泛的是J型和I型。

1.1   J型行星式分离柱

Ito等^[8]在1982年利用螺旋管J型行星式运动发展了目前广泛应用的高速逆流色谱(HSCCC)。它的自转角速度和公转角速度方向相同，故称为同向同步行星式运动，其的分离柱结构图如图 1(a)^[9]所示。虽然HSCCC在分离纯化天然和合成小分子方面取得巨大的成就，但是当它在溶液两相体系中分离多肽、蛋白质、氨基酸等生物大分子时，传统的多层螺旋管就无法保存足够的固定相从而使分离度较低。采用螺旋通道装置^[10]来代替多层盘绕的螺旋管柱就能很好地解决溶液两相体系的高粘度和低界面张力引起的低分离度这一问题。利用径向形成的离心力梯度，将较重的固定相保持在外围，较轻的固定相保持在内部螺旋通道，将螺旋效应和阿基米德螺旋力有效地结合起来^[11]，从而提高了固定相的保留能力，这就是螺旋高速逆流色谱仪(spiral HSCCC)。螺旋HSCCC又分为螺旋圆盘HSCCC和螺旋管柱HSCCC。图 1(b)是螺旋圆盘HSCCC的分离柱示意图，在圆盘上刻着螺旋槽，I是进入槽内部的入口，O是离开槽到外部的出口，螺旋圆盘HSCCC就是由多个这样的圆盘堆叠而成的。图 1(c)是螺旋管柱HSCCC的分离柱示意图，它是由一个容纳了聚四氟乙烯管的圆形柱支持件组成。

图 1

图 1. (a) J型行星式多层螺线管分离柱示意图^[9]；(b)螺旋圆盘分离柱结构示意图；(c)螺旋管柱支持件结构示意^[7]

Figure 1. (a) Design of type-J planetary motion of a multilayer coil separation column^[9]; (b) Design of spiral disk; (c) Design of spiral tube support (STS)^[7]

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1.2   I型行星式分离柱

尽管HSCCC有很高的分离效率，但它也存在一些因为阿基米德螺旋力而产生的内在的问题，如高柱压以及样品在管中的纵向混合导致的样品谱带展宽等。为了解决这些问题，I型逆流色谱被研发出来^[12]，与J型逆流色谱不同的是它的自转角速度和公转角速度方向相反(图 2为其分离柱示意图)。它在分离柱内产生均匀循环的离心力场，该系统对不互溶的两相溶液产生了著名的涡流效应，从而进行高效的分离。它的另一个重要特点是采用圆柱形分离柱(而不是线圈分离柱)，避免了阿基米德螺杆力的产生，从而可以在最小柱压下进行分离。

图 2

图 2. I型逆流色谱仪分离柱示意图^[13]

Figure 2. Column design of vortex CCC^[13]

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2.   对分离柱管子的研究

柱设计是色谱体系的核心环节，不同的分离柱管子的几何形状以及安装方式会产生不同的色谱行为和分离效率。因此对逆流色谱仪管子的研制主要是从管的形状、管壁的厚度、孔径的大小等方面来展开的。

2.1   改变管子孔径大小

Berthod等^[14]改变孔径大小，对体积18mL、孔径0.8mm的聚四氟乙烯管和体积19mL、孔径1.6mm的管以及传统的体积为54mL的单线圈分离管进行了比较。结果表明，窄孔径可以增加分离效率。但是由于液体通过1.6mm孔径的管时流速更高，因此1.6mm孔径的管子分离速度更快，在13min内就可以完成一次分离，而0.8mm孔径的管子分离时间是它的两倍。在分离度要求不高且需要快速得到分离结果时选用1.6mm孔径的管子更适合。Guan等^[15]用环形线圈取代了J型逆流色谱仪中的多层螺旋管线圈，并通过改变环形线圈管子的孔径来提高样品处理量。先前研发的1.6mm孔径的管柱比普通管柱的蛋白质处理量增加了10倍，而采用孔径5mm、壁厚0.5mm的316型不锈钢管子比普通管子的蛋白质处理容量增大了21倍。

从上述实验中可以看出，管子孔径越大分离量越高，分离时间越短，但是分离效果没有小孔径的好，因此要根据实验目的来选择管子孔径的大小。

2.2   对管子进行修饰

传统的管子是截面为圆形的平直管，分离效果不佳。为了提高分离效率，两种改进的螺旋管被研发出来，一种是间歇挤压管^[16]，另一种是扁平扭转管^[17]。两种管子的形状如图 3(a)和3(b)所示。这两种管子通过阻碍流动相在管中的层流并且不断地让两相混合从而提高分离效率。Ito等^[18]在流动相流速1~2 mL/min、仪器转速800r/min的条件下，在溶液两相体系中来比较10mm间距的间歇挤压管、平直管、平波管和平捻管分离蛋白质的效率。结果表明，平直管的分离效率最低，分离度为1.05和0.90；间歇挤压管的分离效率最高，分离度为1.82和1.43。得出如下结论：间歇挤压管和平捻管在半制备分离中可以提高分离效率，平直管和平波管可以在低流速下用于分离制备。

图 3

图 3. 不同类型的管子构造图^[20]

a：普通管；b：带有小室的管(每隔2cm进行挤压)；c：长通道小室管(每隔2cm进行0.8cm的压缩)；d：插入柱子的小室管

Figure 3. Construction of different types of tube^[20]

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在正交轴逆流色谱仪中，为了在分离过程中实现溶质的充分分区，两相需要在分离柱中进行多次混合沉淀。因此，一种改进的小室多层螺旋管装置(如图 4(b))被Kazufusa等^[19]研发出来。进一步研究发现^[20]，在双水相系统中分离高亲水性化合物如蛋白质时，延长管子压缩长度(如图 4(c))在流动相流速为0.4mL/min时可以增大固定相保留率并且将分离度提高到2.0左右；在有机-水两相溶剂系统中分离疏水化合物时，在每个腔室中插入珠子(如图 4(d))，在流动相流速为1.4mL/min时可以缩短分离时间并且将分离度提高到2.0左右。

图 4

图 4. 6种不同的管子改造方案示意图^[16]

黑色的箭头指出卷曲方向，P:平行; S:交错; | |:在90°平行; //:在45 °平行; / \:反向45°

Figure 4. Schematic images of the six different tubing modifications^[16]

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由于分离柱的体积和长度的不同，导致以上报道的新型管子和未修饰的传统管子不便进行比较。因此Englert等^[21]发明了一种卷边工具，用以在同一台逆流色谱仪上改造管子形状从而直观地比较管子形状对分离度的影响。他们用这种工具将标准的管子改造成六种不同形状，如图 3所示。实验结果表明，修饰过的管子固定相保留率高于或等于未修饰的管子，其中错位修饰管\S/的固定相保留率是最高的，可以达到0.75。

近年来为了提高分离效率，间歇挤压管也被引入I型逆流色谱中^[22]。管柱的改造是通过带有一对旋转齿轮的挤压工具而得到。这个工具是手动旋转的，转动一圈手柄将会产生24cm的压缩，它对管柱每间隔1cm压缩1cm，如图 5(d)所示。改造过后的管子长仍为35m，体积变为75mL，小于未改造的管体积。分离度达到2.18的实验结果表明，改造过后的管对I型逆流色谱仪的分离度有提高。

图 5

图 5. 间歇挤压管(a)和扁平扭转管(b)^[31]以及标准管(c)间歇挤压管(d)^[20]

Figure 5. The cross-pressed (a) and the flat-twisted (b) tubing^[31]; The standard (c) and intermittently pressed (d) tubing^[20]

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2.3   改变管子厚度

传统的管子的横截面是圆形的，而Peng等^[23]制造了横截面为长方形的管子并且通过管子厚度的改变来改变分离柱的柱装载量和分离效率。他们制备了一根的比传统管要厚的0.8mm管子(相当于内径为1.6mm的圆管)和一根比传统管要薄的0.4mm管子(相当于内径为3.2mm的圆管)，在己烷/乙酸乙酯/乙醇/水(5:2:5:2，体积比)系统中分离厚朴酚与和厚朴酚。与传统的管子相比，0.8mm壁厚的管子柱容积从18.0mL增大到24.3mL，分离度从0.701增大到1.277，产量从0.13g/h增大到1.16g/h；0.4mm壁厚的管子柱容积又进一步增大到了56mL，分离度为1.072，产量显著增大到了4.11g/h。

实验结果说明，管壁变薄，相当于用较轻的流动相取代了较重的聚四氟乙烯管材，可以增大分离量，提高分离效率。

3.   对分离柱的改进

3.1   增加分离柱的数目

Shinomiya等^[24]设计了一种四柱型HSCCC。新的装置在距中轴线11.2cm处对称地旋转着4个螺旋分离柱，通过一组空转齿轮将中心轴上的固定太阳齿轮和柱支架上的行星齿轮啮合，一种(大齿轮)用于I型行星运动，两种(大齿轮和小齿轮)用于J型行星运动。两对对角定位的立柱支架同时围绕各自的轴向反向旋转：柱1和柱3是J型行星运动模式，另外一对是反方向的I型行星运动模式(如图 6所示)。该装置在旋转过程中不发生扭转，使溶剂不需要常规的旋转密封装置即可连续洗脱出柱。使用这种仪器可以很容易地比较相同条件下两种不同的行星运动之间的分配效率。

图 6

图 6. (A) 四柱HSCCC的设计原理图；(B)四柱HSCCC的实物装置图^[24]

Figure 6. (A)Schematic illustration of HSCCC with four column holders; (B) Photograph of HSCCC with four column holders^[24]

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3.2   改变分离柱的形状

为了改进传统J型逆流色谱仪中缺少离心场轴向梯度的这一问题，Wu等^[25]设计了一种新型的锥形线圈，以形成逆流色谱在轴向和径向方向的离心力梯度。该装置是由三个完全相同的直立锥形分离柱组成(图 7(A))，每一个锥形分离柱都是通过将一根聚四氟乙烯(PTFE)管(1.8毫米内径和0.6毫米壁厚)直接缠绕而制成的(图 7(B))。他们使用此装置以己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(体积比5:5:7:3)的溶剂体系从500mg~1g丹参粗样品中提取出了4种丹参酮。使用这种新逆流色谱仪，4种提取物两两之间的分离度分别为1.03、2.00、2.33，均高于普通逆流色谱仪的0.70、1.40、1.88。实验结果证明，锥形线圈逆流色谱仪中额外的梯度离心力使流动相流动速度加快，使固定相的保留率增加从而使得锥形线圈逆流色谱仪具有更高的分离效率和更好的应用前景。

图 7

图 7. (A) 带有三个锥形分离柱的逆流色谱仪设计原理；(B)支持件和部分线圈的实物图片^[25]

Figure 7. (A) The design principle of tapered CCC apparatus with three upright conical coils connected in series and (B)The photographs of holder and a part of coils^[25]

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虽然锥形线圈中额外的离心梯度使流动相流动得更快，使得逆流色谱仪具有更高的固定相保留率、更高的理论板数和更好的分离度，然而由于这些管柱不对称难以保持机器平衡，于是一种新型的同心线圈逆流色谱仪^[26]被引入。该装置用三个圆盘形支持件(直径160mm)取代了原先的圆柱形支持件(图 8(A)和8(B))，它们的旋转半径是10cm。结果表明，同心螺线管柱具有良好的固定相保留率、较高的理论板数，对十多种丹参酮有较好的分离度。

图 8

图 8. (A) 同心线圈高速逆流色谱仪的设计原理图；(B)同心线圈高速逆流色谱仪的实物装置图^[26]

(A)The design principle of concentric coils CCC apparatus；(B)The photographs of concentric coils CCC apparatus^[26]

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为了提高I型逆流色谱仪的分离度，Ito等^[13]通过在离心机上安装涡流柱研制了一种新型逆流色谱系统。该柱的旋转半径增大到10cm，由高密度聚乙烯圆盘(直径16cm，厚度5cm)制成，圆盘上有排列成圆的孔，如图 9所示。通过改变圆盘上孔的大小来改变分离度。结果表明，孔直径最小的分离柱(直径3mm，容量42.8mL)分离效果最好。它产生最高分离度时需要2cm高的理论塔板，而普通HSCCC需要20cm高的理论塔板。除此之外，因避免了阿基米德螺旋力，该系统的柱压力较低，降低了溶剂的泄漏和柱的损害的风险。

图 9

图 9. 涡流分离柱^[13]

Figure 9. Vortex column^[13]

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随后Ito等^[27]对上述直径3mm的圆柱形分离柱(5cm深，总容量约为42mL)又进行了改造，将上面的分离柱用6~40个右旋螺帽孔状穿过内壁，而下面的分离柱用6~40个左旋螺帽孔状穿过内壁。每个单元由很窄的管道(约1mm内径)连接，通过增大两相之间的接触面积来提高分离度，如图 10所示。这就产生了弱阿基米德螺旋效应，使得洗脱可以根据旋转的方向从头到尾或者从尾到头，并且大大提高了分离柱的分离效率。之后，他们又将120个单元增加到966个，总长48m，总容积364mL。在分离DNP氨基酸、二肽、苏丹红这三个实验中证明，新设计的分离柱的分离度是原先的1.27倍。

图 10

图 10. 涡流逆流色谱仪的螺纹圆柱分离柱120个单元中的4个单元^[27]

Figure 10. Diagram of four of the 120 cells of the threaded cylindrical column for VCC^[27]

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3.3   改变分离柱螺旋槽

为了改进螺旋圆盘高速逆流色谱仪的流动相通过固定相时产生的层流减少了界面两相质量传递的这一缺点，Ito等^[28]发明了珠链螺旋圆盘装置。如图 11(A)所示，一系列小而圆的珠状分离孔被刻在圆盘上，并且由小而窄的通道相连。研究显示，连接通道的宽度以及每一个分离孔之间的距离都将影响分离效率。因此他们^[29]设计了两种不同类型的螺旋圆盘装置。一种叫做小腔螺旋圆盘，包括一系列独立的小腔，相邻的小腔由细小的通道连接，如图 11(B)所示。另一种叫做障碍螺旋圆盘，如图 11(C)所示，它是在通道中加入了障碍物，因此液体可以在障碍物两侧自由流动。

图 11

图 11. 经修饰的螺旋圆盘逆流色谱仪的螺旋通道：(A)珠链螺旋圆盘；(B)小腔螺旋圆盘；(C)障碍螺旋圆盘^[30]

Figure 11. Modified channel configurations of the spiral disk. (A) bead-chain spiral disk; (B) locular spiral disk; (C) barricades spiral disk^[30]

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进一步的改进是在每个混合区域的空间中加入玻璃珠，这个装置被称为混合沉降逆流色谱仪^{[29, 31]}。当分离样品的时候，两相溶液会在有玻璃珠的地方剧烈混合，这里称为混合区，然而到下一个没有玻璃珠的区域分离，称为沉降区^[32]。用这种方式，两相溶液的接触面积大大增加从而增加了蛋白质的分离效率。研究显示，带有玻璃珠的障碍螺旋圆盘装置能显著提高固定相保留率和分离度。

和螺旋圆盘高速逆流色谱仪不同，改进螺旋管柱高速逆流色谱仪是通过增加分离柱上螺旋槽的个数来实现的。为了增加柱容积和分离蛋白质的分离效率，Dasarathy等^[33]将螺旋管柱的螺旋槽从4增加到了12(如图 12所示)，容纳了更多的螺旋层从而大大增加了柱容量。此外，增加的螺旋槽在每个循环回路中提供了更多的窄点，阻碍了层流从而使得样品带变宽。

图 12

图 12. 新型螺旋管柱支持件的设计原理图. (A)支架的鸟瞰图; (B)传统的(右边)和现在的(左边)径向槽的横截面比较示意图^[33]

Figure 12. Design of the novel spiral tube support: (a) aerial view of the support; (b)presentation of the cross-sectional view through the radial grooves for comparison between the conventional (right) and the present (left) designs^[33]

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3.4   减小分离柱体积

原始的I型行星式离心分离仪旋转半径37cm，柱高50cm，仪器的庞大限制了它的转速最高只能达到700r/min。为了改善性能，一种微型I型行星式离心分离仪被研发出来^[34]，它的旋转半径为10cm，柱高5cm。这使得它可以产生高达1200r/min的旋转速度，并且转子旋转的时候更稳定。实验结果表明，它的分离时间大大缩短，固定相保留率以及分离效率得到提高。

为减小分离柱体积以及增大样品装载量，引入了应用于HSCCC的多层螺旋管^[35]。这个多层螺旋柱是将一根内径为1.6mm的聚四氟乙烯管缠绕在柱支持件上，管子长35m，体积为80mL。在1-丁醇/乙酸/水(4:1:5，体积比)的溶液体系分离二肽以及在己烷/乙酸乙酯/甲醇/0.1mol/L HCl (1:1:1:1，体积比)的溶液体系中分离DNP氨基酸的结果表明，在转速为200r/min时，其性能最优，而HSCCC在800r/min时才有较高分离度。

3.5   改变分离柱位置

随后Ito等^[36]又通过改变微型I型行星式分离仪分离柱相对于离心力的位置方向来进一步提高分离效率。如图 13所示：一种是平行模式，分离柱相互平行，改变的是分离柱相对于竖直方向的角度；一种是之字形模式，相邻的分离柱对称的放置在柱支持件上。实验结果证明，在1-乙醇/乙酸/水(4.75:0.25:5，体积比)体系中分离二肽时，角度从90°到15°的平行模式固定相保留率和分离度更高；但在0°时之字形模式更好。在己烷/乙酸乙酯/甲醇/ 0.1mol/L HCl(1:1:1:1，体积比)体系中分离DNP-氨基酸时，角度从90°到30 °时平行模式固定相保留率和分离度更高，而30°到0°时结果相反。总体说来，不论哪一种体系，90°的倾斜角分离效果最好。

图 13

图 13. 螺旋分离柱在柱支持件上放置的方向：(A)平行模式；(B)之字形模式^[36]

Figure 13. The orientation of the coiled column mounted on the holder: (A) parallelconfiguration; (B) angular configuration^[36]

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4.   结语

逆流色谱可以很好地规避因固相吸附剂而产生的问题，为传统的液相色谱提供了一种有益的补充技术，已成功地用于天然产物的分离和纯化，因此具有非常广阔的应用前景。逆流色谱仪的管子和分离柱是仪器的核心环节，对分离效率和固定相保留率起着关键作用，因此对逆流色谱仪器的改进主要是通过改变管子的形状、管壁的厚度、分离柱的个数、分离柱的形状等方面来实现。

第一，现有的文献对减小HSCCC柱体积的研究较少，而参考I型逆流色谱的文献，减小体积能够改进分离效率，因此可以对分离柱体积和分离效率的关系进行深入研究，找到体积减小到什么程度的时候分离效率最高，从而来简化HSCCC的仪器以及提高它的分离效率。第二，对逆流色谱仪器的改进除了改变管子形状、管壁厚度、分离柱个数等方面，还可以尝试减少管子缠绕圈数，缩短分离柱长度，这也可以作为制备微型逆流色谱的途径之一。除此之外，从不同角度增大两相接触面积从而提高分离度也是一种切实可行的方法，例如加深螺旋槽的深度等。
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图 1 (a) J型行星式多层螺线管分离柱示意图^[9]；(b)螺旋圆盘分离柱结构示意图；(c)螺旋管柱支持件结构示意^[7]

Figure 1 (a) Design of type-J planetary motion of a multilayer coil separation column^[9]; (b) Design of spiral disk; (c) Design of spiral tube support (STS)^[7]

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图 2 I型逆流色谱仪分离柱示意图^[13]

Figure 2 Column design of vortex CCC^[13]

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图 3 不同类型的管子构造图^[20]

Figure 3 Construction of different types of tube^[20]

a：普通管；b：带有小室的管(每隔2cm进行挤压)；c：长通道小室管(每隔2cm进行0.8cm的压缩)；d：插入柱子的小室管

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图 4 6种不同的管子改造方案示意图^[16]

Figure 4 Schematic images of the six different tubing modifications^[16]

黑色的箭头指出卷曲方向，P:平行; S:交错; | |:在90°平行; //:在45 °平行; / \:反向45°

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图 5 间歇挤压管(a)和扁平扭转管(b)^[31]以及标准管(c)间歇挤压管(d)^[20]

Figure 5 The cross-pressed (a) and the flat-twisted (b) tubing^[31]; The standard (c) and intermittently pressed (d) tubing^[20]

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图 6 (A) 四柱HSCCC的设计原理图；(B)四柱HSCCC的实物装置图^[24]

Figure 6 (A)Schematic illustration of HSCCC with four column holders; (B) Photograph of HSCCC with four column holders^[24]

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图 7 (A) 带有三个锥形分离柱的逆流色谱仪设计原理；(B)支持件和部分线圈的实物图片^[25]

Figure 7 (A) The design principle of tapered CCC apparatus with three upright conical coils connected in series and (B)The photographs of holder and a part of coils^[25]

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图 8 (A) 同心线圈高速逆流色谱仪的设计原理图；(B)同心线圈高速逆流色谱仪的实物装置图^[26]

(A)The design principle of concentric coils CCC apparatus；(B)The photographs of concentric coils CCC apparatus^[26]

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图 9 涡流分离柱^[13]

Figure 9 Vortex column^[13]

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图 10 涡流逆流色谱仪的螺纹圆柱分离柱120个单元中的4个单元^[27]

Figure 10 Diagram of four of the 120 cells of the threaded cylindrical column for VCC^[27]

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图 11 经修饰的螺旋圆盘逆流色谱仪的螺旋通道：(A)珠链螺旋圆盘；(B)小腔螺旋圆盘；(C)障碍螺旋圆盘^[30]

Figure 11 Modified channel configurations of the spiral disk. (A) bead-chain spiral disk; (B) locular spiral disk; (C) barricades spiral disk^[30]

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图 12 新型螺旋管柱支持件的设计原理图. (A)支架的鸟瞰图; (B)传统的(右边)和现在的(左边)径向槽的横截面比较示意图^[33]

Figure 12 Design of the novel spiral tube support: (a) aerial view of the support; (b)presentation of the cross-sectional view through the radial grooves for comparison between the conventional (right) and the present (left) designs^[33]

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图 13 螺旋分离柱在柱支持件上放置的方向：(A)平行模式；(B)之字形模式^[36]

Figure 13 The orientation of the coiled column mounted on the holder: (A) parallelconfiguration; (B) angular configuration^[36]

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