白芍为芍药科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall.)的根[1], 包含多种生物活性物质, 主要有苷类、萜类、黄酮类、酚类和糖类等化合物[2].植物内生菌(endophyte)是指一类存活于健康植物组织内部, 不引起宿主植物表现出明显病症的微生物[3].包括内生真菌和内生细菌, 而内生真菌在植物体内广泛存在于植物的根、茎、叶、种子等器官组织内[4].内生真菌(endophytic fungi)包括潜伏性病原菌、菌根菌和腐生菌等, 内生真菌与宿主植物在长期的共生演化过程中形成了互利共生关系, 宿主植物为内生真菌提供稳定的生活环境及生长必需的物质基础, 而内生真菌能产生具有促进植物生长、增强植物的抗性和适应不良环境等作用的次生代谢产物[5].除此之外, 内生真菌还可产生与寄主植物相同或相似的次生代谢产物[6].文献[7]报道从亳芍的内生真菌中发现一株细脚棒束孢种菌种, 能产生亳芍的主要成分芍药苷.因此本课题组一直致力于寻找能够产生与白芍相同或相似化学成分的内生真菌, 扩大天然产物探索途径.本实验在前期研究中从白芍中分离筛选出一个优势菌株Peni- cillium mariae-crucis, 利用多种色谱分离手段, 从该菌株发酵液的乙酸乙酯萃取物中分离得到10个化合物, 分别鉴定为penicmariae-crucis A (1)、penicmariaecrucis B (2)、penicmariae-crucis C (3)、penicmariae-crucis D (4)、(E)-2-甲基己-3-烯二酸(5)、2-乙酰基-3-羟基-5-甲氧基苯乙酸(6)、2-乙酰基-3-羟基-5-甲氧基苯乙酸甲酯(7)、2-乙酰基-3, 5-二羟基苯乙酸甲酯(8)、β-谷甾醇(9)、过氧化麦角甾醇(10); 其中化合物1~4为新化合物, 化合物5为新天然产物, 所有化合物均为首次从内生真菌P. mariaecrucis中分离得到, 并对所有化合物进行体外细胞毒活性试验.结果表明, 所有化合物对A549、MDA-MB-231、KB、KB-VINMCF-7等5种肿瘤细胞株的最小抑制浓度均大于40 µmol•L-1.
化合物1为白色片状结晶(甲醇), HR-ESI-MS给出化合物分子式为C7H8O4 (m/z 179.0311 [M+Na]+, calcd 179.0315), 不饱和度为4.在IR光谱中, 1756和1717 cm-1处的吸收峰表明化合物存在羰基. 13C NMR低场区给出的两个季碳信号δ 170.1和165.8表明分子有两个酯羰基. 1H NMR高场区中一个单峰信号δ 3.80 (s, 3H), 且HMBC谱中显示δ 3.80 (s, 3H)与165.8相关, 确定分子中存在一个与酯羰基相连的甲氧基.低场区的氢信号δ 6.77 (t, J=3.2 Hz, CH)和13C NMR中的δ 141.5, 124.1碳信号表明分子中存在一个双键.化合物1的13C NMR及DEPT谱提示, 化合物1结构中有7个碳原子, 其中3个季碳原子、1个次甲基碳原子、2个亚甲基碳原子、1个甲基碳原子.表明分子中只存在1个与酯羰基相连的端基碳, 其余五个碳原子以不饱和内酯环的形式存在.结合HMBC谱, δ 6.77 (t, J=3.2 Hz, CH)与δ 170.1, 165.8相关, 表明双键的位置与羰基相邻, 环外酯羰基与双键的另一个碳(δ 141.5)相连. COSY谱中δ 3.36~3.39 (m, CH2)与4.47 (t, J=7.1 Hz, CH2)相关, 说明两个亚甲基彼此相邻, 同时HMBC谱中两个亚甲基与双键碳δ 124.1 (C-2), 141.5 (C-3), 羰基碳165.8 (C-6)相关, 验证了不饱和内酯环的存在.所以确定该化合物为6-氧代-3, 6-二氢-2H-吡喃-4-羧酸甲酯(图 1), 命名为penicmariae- crucis A, 其1H NMR、13C NMR数据见表 1.
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| No. | 1 | 2 | 5 | |||||
| δH (J in Hz) | δC | δH (J in Hz) | δC | δH (J in Hz) | δC | |||
| 1 | — | 170.1 | — | 168.2 | — | 177.0 | ||
| 2 | 6.77 (t, 3.2) | 124.1 | 6.61 (t, 3.2) | 125.2 | 3.38 (q, 14.7, 8.2) | 46.0 | ||
| 3 | — | 141.5 | — | 143.3 | 5.62~5.71 (m) | 129.6 | ||
| 4 | 3.36~3.39 (m) | 27.8 | 3.34 (dt, 7.2, 3.2) | 28.8 | 5.45~5.51 (m) | 128.8 | ||
| 5 | 4.47 (t, 7.1) | 66.4 | 4.45 (t, 7.0) | 68.1 | 2.47 (dd, 16.7, 5.7) | 37.3 | ||
| 6 | — | 165.8 | — | 172.4 | — | 175.2 | ||
| 7 | — | — | — | — | 1.69 (d, 6.4) | 18.1 | ||
| OCH3 | 3.80 (s) | 52.2 | — | — | ||||
化合物2为白色片状结晶(甲醇), HR-ESI-MS给出化合物分子式为C6H6O4 (m/z 141.0198 [M-H]-, calcd 141.0193), 不饱和度为4.通过氢谱和碳谱可以发现, 化合物2与化合物1的结构极其相似, 化合物2仅比化合物1少一个甲氧基信号. IR光谱中2880~3094 cm-1强而宽的峰提示化合物存在羧基, 结合化合物1的结构, 推测化合物2为化合物1甲氧基被羟基取代后形成的羧酸. HMBC谱图中的相关信号验证了上述推测, 所以确定化合物2为6-氧代-3, 6-二氢-2H-吡喃-4-羧酸, 命名为penicmariae-crucis B.
HR-ESI-MS给出化合物分子式为C17H24N2O4 (m/z 343.1627 [M+Na]+, calcd 343.1628), 不饱和度为7. IR信号显示分子中含有氨基(3439 cm-1), 羰基(1734、1632 cm-1). 1H NMR低场区δ 7.19~7.29 (m)的5个氢信号, 提示分子结构中存在一个单取代苯环, 13C NMR低场区δ 173.2, 173.2, 173.6的三个季碳信号提示分子中存在3个羰基, 因此7个不饱和度分别由苯环和羰基分配, 剩下的片段应以链状形式存在. COSY谱中δ 0.72 (CH3, s)/1.85~1.87 (m, CH), 0.74 (CH3, s)/1.85~1.87 (m, CH), 1.85~1.87 (m, CH)/4.17 (d, J=6.8 Hz, CH)的相关, HMBC谱中δ 4.17 (m, CH)/173.6 (s)的相关提示化合物含有缬氨酸片段.同时HMBC谱显示δ 1.96 (s, CH3)/ 173.2 (s), 173.6 (s)相关, 表明该甲基周围有两个羰基碳, 且单峰甲基的化学位移偏向低场, 所以该甲基应连在氮原子上; 一个亚甲基δ 38.2 (t)上的两个氢信号δ 3.16 (dd, J=14.0, 5.1 Hz, CH), 2.96 (dd, J=13.9, 9.7 Hz, CH)分别与苯环上的两个碳信号δ 138.2 (s), 130.2 (d)相关, 表明该亚甲基δ 38.2 (t)应与苯环相连; COSY谱中δ 4.69 (dd, J=9.8, 5.1 Hz, CH)与3.16 (dd, J=14.0, 5.1 Hz, CH), 2.96 (dd, J=13.9, 9.7 Hz, CH)相关, 表示C-1' (δ 38.2)与C-2 (δ 55.1)相邻, 经查阅文献发现上述数据与化合物terretrione D[8]相似.不同的是化合物3的HMBC谱中δ 4.17 (m, CH)仅与一个羰基δ 173.6 (C-5)相关, 同时1H NMR中多了一个甲氧基δ 3.69 (s, CH3), 且与δ 173.2 (C-1)与有相关; 因此推断化合物3的结构可由terretrione D酰胺键断裂得到, 而两者的旋光值也较为接近, 均为左旋, 说明化合物terretrione D在开环时构型并未发生改变, 所以化合物3的构型应与terretrione D保持一致, 因此化合物3的结构确定为(R)-3-((R)-2-氨基-N, 3-二甲基丁酰胺基)-2-苄基-3-氧代丙酸甲酯, 命名为penicmariae-crucis C.
HR-ESI-MS给出化合物分子式为C11H12O5 (m/z 247.0585 [M+Na]+, calcd 247.0577), 不饱和度为6.由IR信号确定含有羟基(3420 cm-1), 羰基(1740 cm-1). 13C NMR显示有11个碳信号, 6个季碳原子, 2个次甲基碳原子, 3个甲基碳原子. 1H NMR中显示含有两个甲氧基δ 3.89 (s, CH3), 3.85 (s, CH3), 一个甲基δ 1.60 (d, J=6.6 Hz, CH3), 一个烯氢δ 6.92 (s, CH).除去3个甲基碳原子, 该化合物是由8个碳原子组成不饱和度为6的骨架分子, 其中一个C原子为羰基, 因此推测该化合物的骨架是苯并五元内酯环. δ 6.92 (s, CH)为苯环上的烯质子氢, HMBC谱中δ 6.92 (s, CH)与羰基δ 173.0 (s)相关, 表明该质子氢与羰基同侧且相近; 此外两个甲氧基δ 3.89(s, CH3), 3.85 (s, CH3)分别与苯环上两个碳δ 156.4 (s), 143.0 (s)相关, 表明两个甲氧基连在苯环上, 同时烯质子氢δ 6.92 (s, CH)也与δ 143.0 (s), 156.4 (s)相关, 鉴于该烯质子氢与环外羰基(δ 173.0)相近, 所以苯环上与甲氧基相连的两个碳应在烯质子氢的同一侧, 彼此相邻.甲基δ 1.60 (d, J=6.6 Hz, CH)与δ 78.2 (d)相关, 表明其在五元内酯环上.通过查阅文献[9]发现, 化合物4的结构与化合物(S)-3-Ethyl-5, 6, 7-trimethoxyphthalide非常相似, 只是6位羟基与甲氧基取代的不同, 8位甲基与乙基取代的不同.通过两者的数据比对再次确定化合物4的结构, 同时通过比较两者的旋光值, 均为左旋, 推断化合物4的8位构型为S构型.综上所述, 确定化合物4为(S)-4-羟基-5, 6-二甲氧基-3-甲基异苯并呋喃- 1(3H)-酮, 命名为penicmariae-crucis D.
HR-ESI-MS给出化合物分子式为C7H10O4 (m/z 181.0470 [M+Na]+, calcd 181.0471), 不饱和度为3.由IR谱显示结构中含有羟基(3422 cm-1)、羰基(1712 cm-1). 13C NMR及DEPT显示7个碳信号, 其中2个季碳原子, 3个次甲基碳原子, 1个亚甲基碳原子, 1个甲基碳原子. 1H NMR中显示含有一个甲基δ 1.69 (m, CH3), 两个烯氢δ 5.66 (m, CH), 5.48 (m, CH). HMBC相关谱中1.69 (m, CH3)/177.0 (s), 5.66 (m, CH)/177.0 (s), 37.3 (t), 5.48 (m, CH)/175.2 (s), 2.47 (dd, 16.7, 5.7)/175.2 (s)相关, COSY谱中1.69 (d, J=6.4 Hz, CH3)/3.38 (q, CH, 14.7, 8.2), 3.38 (q, J=14.7, 8.2 Hz, CH)/5.66 (m, CH), 5.48 (m, CH)/2.47 (dd, J=16.7, 5.7 Hz, CH2)相关, 结合烯质子氢的偶合常数为15.4 Hz, 确定化合物中双键为反式.根据上述数据确定化合物5为(E)-2-甲基己-3-烯二酸.
正相柱层析硅胶(200~300目, 由青岛海洋化工厂), 反相柱层析硅胶[RP-18 (45~70 μm), 日本富士化工有限公司], Sephadex LH-20(GE), MCI柱层析硅胶[MCI gel CHP-20P(75-150 μm)日本三菱化工]; 制备型HPLC(型号: Agilent 1260型; 色谱柱: Zorbax SB-C18, 5 μm, 9.4 mm×150 mm, 流速8 mL/min; 21.2 mm×150 mm, 流速16 mL/min); MPLC Sepacore System (配备泵控制系统C-615, 泵模块C-605, 自动接收器C-600, 填料RP-18, 45~70 μm, 4.5~50 cm; 瑞士B CHI实验室技术服务有限公司); NMR谱由Bruker AVIII-600、DRX- 500或者AV-400型核磁共振波谱仪在室温下测定(内标: TMS); 质谱由Waters Auto Premier P776质谱仪、Agilent G6230AA TOF LC/MS质谱仪或者Agilent UPLC/Q- TOF质谱质谱仪测定; 比旋光度是由Jasco P-1020自动数字旋光仪测定; 红外光谱由Bruker tensor-27傅里叶变换红外光谱仪测定, KBr压片.
白芍植株采集于安徽省亳州市谯城区谯东镇崔柳行村农户亳芍种植园(北纬33°51′12.74, 东经115°53′ 24.06), 经安徽中医药大学方成武教授鉴定为芍药科芍药属芍药(P. lactiflora Pall), P. mariae-crucis菌株从新鲜白芍中分离得到, 内生真菌分子鉴定由上海生工生物工程有限公司完成.菌株活化好后放入4 ℃冰箱, 菌种保存于安徽中医药大学天然药物化学研究室.
取保存在斜面试管中的P. mariae-crucis菌株进行活化, 将活化3代后的菌株用灭菌后的打孔器打取菌饼置于装有1 L PDB (称取马铃薯粉5 g加入葡萄糖15 g, 蛋白胨10 g以及5 g氯化钠, 然后加蒸馏水定容至1 L)培养基的锥形瓶中, 放入恒温振荡培养箱中, 于28 ℃、135 r/min振荡培养7 d.将发酵液以10%的比例分别加入已灭菌的大米培养基中置于28 ℃恒温培养箱共培养, 待菌丝长满大米培养基后取出用乙酸乙酯提取, 得发酵提取物, 提取物减压浓缩得到待分离浸膏.
乙酸乙酯提取部位浸膏31 g, 经硅胶柱色谱分离(石油醚-丙酮, V:V=20:1)梯度洗脱, TLC检识, 合并相同组分得13个组分(P1~P13). P2经MPLC (甲醇-水, V:V=10:90~100:0)梯度洗脱, 再经硅胶柱色谱(石油醚-丙酮, V:V=20:1)系统洗脱, 经Sephadex LH-20柱(氯仿-甲醇, V:V=1:1)纯化得化合物9 (13 mg)和10 (5.0 mg). P3析出沉淀, 沉淀经反复重结晶和Sephadex LH-20柱(甲醇, 100%)纯化得化合物4 (2.6 mg). P4经硅胶柱色谱(石油醚-丙酮, V:V=20:1)系统洗脱, 经Sephadex LH-20柱(氯仿-甲醇, V:V=1:1)、高效液相色谱(CH3CN/H2O, V:V=35:65→50:50, 25 min)制备得化合物5 (3.1 mg). P5经反向中压色谱(甲醇-水, V:V=10:90~100:0)梯度洗脱, 再经硅胶柱色谱(石油醚-丙酮, V:V=15:1), 系统洗脱, 析出片状结晶, 结晶经反复重结晶得化合物2 (5.2 mg). P6经反向中压色谱(甲醇-水, V:V=20:80~100:0)梯度洗脱, 再经硅胶柱色谱(石油醚-丙酮, V:V=12:1)系统洗脱, 析出片状结晶, 结晶经Sephadex LH-20柱(氯仿-甲醇, V:V=1:1)纯化得化合物1 (4.7 mg). P7经硅胶柱色谱(石油醚-丙酮, V:V=12:1)系统洗脱, 经高效液相色谱(CH3CN/H2O, V:V=5:95→30:70, 36 min)制备, 再经Sephadex LH-20柱(丙酮, 100%)纯化得化合物6 (1.1 mg), 7 (3.2 mg), 8 (5.7 mg). P8经反向中压色谱(甲醇-水, V:V=30:70~100:0)梯度洗脱, 再经硅胶柱色谱(石油醚-丙酮, V:V=10:1)系统洗脱、高效液相色谱(CH3CN/H2O, V:V=25:7→40:60, 25 min)制备得化合物3 (2.2 mg).
Penicmariae-crucis A (1):白色片状结晶(甲醇), 熔点: 206~208 ℃. [α]D23.7-2.7 (c 0.92, CHCl3); UV (MeOH) λmax[log ε/(L•mol-1•cm-1)]: 241 (2.60), 228 (3.25), 220 (3.26), 202 (3.32) nm; 1H NMR和13C NMR数据见表 1; IR (KBr) νmax: 3411, 1756, 1717, 1231 cm-1. HR-ESI-MS calcd for C7H8O4Na [M+Na]+ 179.0315, found 179.0311.
Penicmariae-crucis B (2):白色片状结晶, 熔点: 316~318 ℃. [α]D23.3-4.4 (c 0.12 MeOH); UV (MeOH) λmax[log ε/(L•mol-1•cm-1)]: 224 (4.15), 195 (2.89) nm; 1H NMR和13C NMR数据见表 1; IR (KBr) νmax: 3423, 3056, 2998, 1763, 1427, 1255 cm-1. HR-ESI-MS calcd for C6H5O4- [M-H]- 141.0193, found 141.0198.
Penicmariae-crucis C (3):白色粉末, 熔点: 187~188 ℃. [α]D25.5-79.3 (c 0.011, MeOH); UV (MeOH) λmax[log ε/(L•mol-1•cm-1)]: 202 (2.98) nm; 1H NMR和13C NMR数据见表 2; IR (KBr) νmax: 3439, 2962, 2927, 1632, 600 cm-1. HR- ESI-MS calcd for C17H24N2O4Na[M+Na]+ 343.1627, found 343.1628.
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| Position | 3 | 4 | ||||
| δH (J in Hz) | δC | δH (J in Hz) | δC | |||
| 1 | — | 173.2 | — | 173.0 | ||
| 2 | 4.69 (dd, 9.8, 5.1) | 55.1 | — | 121.9 | ||
| 3 | — | 173.2 | 6.92 (s) | 99.6 | ||
| 4 | — | 156.4 | ||||
| 5 | — | 173.6 | — | 143.0 | ||
| 6 | 4.17 (d, 6.8) | 59.9 | — | 146.7 | ||
| 7 | 1.85~1.87 (m) | 31.9 | — | 133.5 | ||
| 8 | 0.74 (s) | 19.6 | 5.52 (q, 13.1, 6.5) | 78.2 | ||
| 9 | 0.72 (s) | 18.1 | 1.60 (d, 6.6) | 19.5 | ||
| 1' | 3.16 (dd, 14.0, 5.1); 2.96 (dd, 13.9, 9.7) | 38.2 | — | — | ||
| 2' | — | 138.2 | — | — | ||
| 3' | 7.25~7.29 (m) | 130.2 | — | — | ||
| 4' | 7.19~7.21 (m) | 129.5 | — | — | ||
| 5' | 7.19~7.21 (m) | 127.9 | — | — | ||
| 6' | 7.19~7.21 (m) | 129.5 | — | — | ||
| 7' | 7.25~7.29 (m) | 130.2 | — | — | ||
| 1-OCH3 | 3.69 (s) | 52.7 | — | — | ||
| 4-OCH3 | — | — | 3.89 (s) | 61.2, q | ||
| 5-OCH3 | — | — | 3.85 (s) | 56.7, q | ||
| NCH3 | 1.96 (s) | 22.4 | — | — | ||
Penicmariae-crucis D (4):白色粉末, 熔点: 234~235 ℃. [α]D23.7-20.3 (c 0.10, MeOH); UV (MeOH) λmax[log ε/(L•mol-1•cm-1)]: 215 (4.39), 263 (3.74), 295 (3.36) nm; 1H NMR和13C NMR数据见表 2; IR (KBr) νmax: 3420, 2936, 1740, 1354, 1117 cm-1; HR-ESI-MS calcd for C7H8O4Na [M+Na]+ 247.0577, found 247.0585.
(E)-2-甲基己-3-烯二酸(5):白色粉末, 熔点: 161~163 ℃. UV (MeOH) λmax [log ε/(L•mol-1•cm-1)]: 542 (1.30), 473 (1.30), 204 (3.20) nm; 1H NMR和13C NMR数据见表 1; IR (KBr) νmax: 3422, 3108, 1712 cm-1. HR-ESI-MS calcd for C17H24N2O4Na[M+Na]+ 181.0471, found 181.0470.
磺酰罗丹明B (SRB)法评价化合物的抗肿瘤活性[10].取处于指数增长期细胞进行预培养24 h, 使细胞贴壁, 去除上清加已配好的药物(初筛药物浓度为40 µmol•L-1, 在该浓度对肿瘤细胞抑制率大于50%的化合物进行复筛)进行处理, 2 d后先用三氯醋酸(TCA)固定1 h, 再用蒸馏水洗5遍, 干燥后加SRB染色15 min, 然后用醋酸洗5遍干燥后Tris溶解.最后选择490 nm波长下, 读取各光吸收值, 并记录结果.
辅助材料(Supporting Information) 化合物1~5的1H NMR, 13C NMR, UV, IR, HR-ESI-MS, 1D NMR和2D NMR原始谱图.这些材料可以免费从本刊网站(http://sioc-journal.cn/)上下载.
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图 2
化合物1~5主要的1H-1H COSY(
Figure 2 Key 1H-1H COSY and HMBC relevant of compounds 1~5
表 1 化合物1 (400/125 MHz, CDCl3)、2 (400/125 MHz, CD3OD)和5 (500 /125 MHz, CD3OD)的NMR数据
Table 1. NMR data of compounds 1 (400/125 MHz, CDCl3), 2 (400/125 MHz, CD3OD) and 5 (500/125 MHz, CD3OD)
| No. | 1 | 2 | 5 | |||||
| δH (J in Hz) | δC | δH (J in Hz) | δC | δH (J in Hz) | δC | |||
| 1 | — | 170.1 | — | 168.2 | — | 177.0 | ||
| 2 | 6.77 (t, 3.2) | 124.1 | 6.61 (t, 3.2) | 125.2 | 3.38 (q, 14.7, 8.2) | 46.0 | ||
| 3 | — | 141.5 | — | 143.3 | 5.62~5.71 (m) | 129.6 | ||
| 4 | 3.36~3.39 (m) | 27.8 | 3.34 (dt, 7.2, 3.2) | 28.8 | 5.45~5.51 (m) | 128.8 | ||
| 5 | 4.47 (t, 7.1) | 66.4 | 4.45 (t, 7.0) | 68.1 | 2.47 (dd, 16.7, 5.7) | 37.3 | ||
| 6 | — | 165.8 | — | 172.4 | — | 175.2 | ||
| 7 | — | — | — | — | 1.69 (d, 6.4) | 18.1 | ||
| OCH3 | 3.80 (s) | 52.2 | — | — | ||||
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表 2 化合物3和4 (400/125 MHz, CD3OD)的NMR数据
Table 2. NMR data of compounds 3 and 4 (400/125 MHz, CD3OD)
| Position | 3 | 4 | ||||
| δH (J in Hz) | δC | δH (J in Hz) | δC | |||
| 1 | — | 173.2 | — | 173.0 | ||
| 2 | 4.69 (dd, 9.8, 5.1) | 55.1 | — | 121.9 | ||
| 3 | — | 173.2 | 6.92 (s) | 99.6 | ||
| 4 | — | 156.4 | ||||
| 5 | — | 173.6 | — | 143.0 | ||
| 6 | 4.17 (d, 6.8) | 59.9 | — | 146.7 | ||
| 7 | 1.85~1.87 (m) | 31.9 | — | 133.5 | ||
| 8 | 0.74 (s) | 19.6 | 5.52 (q, 13.1, 6.5) | 78.2 | ||
| 9 | 0.72 (s) | 18.1 | 1.60 (d, 6.6) | 19.5 | ||
| 1' | 3.16 (dd, 14.0, 5.1); 2.96 (dd, 13.9, 9.7) | 38.2 | — | — | ||
| 2' | — | 138.2 | — | — | ||
| 3' | 7.25~7.29 (m) | 130.2 | — | — | ||
| 4' | 7.19~7.21 (m) | 129.5 | — | — | ||
| 5' | 7.19~7.21 (m) | 127.9 | — | — | ||
| 6' | 7.19~7.21 (m) | 129.5 | — | — | ||
| 7' | 7.25~7.29 (m) | 130.2 | — | — | ||
| 1-OCH3 | 3.69 (s) | 52.7 | — | — | ||
| 4-OCH3 | — | — | 3.89 (s) | 61.2, q | ||
| 5-OCH3 | — | — | 3.85 (s) | 56.7, q | ||
| NCH3 | 1.96 (s) | 22.4 | — | — | ||
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