丹皮酚噻唑类化合物的合成及其细胞毒性评价

引用本文: 王妙, 黄琳, 苏燕, 许英红, 黄铃月, 周小群, 李芳耀. 丹皮酚噻唑类化合物的合成及其细胞毒性评价[J]. 化学通报, 2019, 82(7): 630-635. shu

Citation: Wang Miao, Huang Lin, Su Yan, Xu Yinghong, Huang Lingyue, Zhou Xiaoqun, Li Fangyao. Syntheses and Cytotoxicity Evaluation of Novel Paeonol-Thiazoles Derivatives[J]. Chemistry, 2019, 82(7): 630-635. shu

丹皮酚噻唑类化合物的合成及其细胞毒性评价

王妙 ^1, ,
黄琳 ^1, ,
苏燕 ^1, ,
许英红 ^1, ,
黄铃月 ^1, ,
周小群 ^2, ,
李芳耀 ^{1,
,}

1.
桂林医学院药学院桂林 541004
2.
桂林医学院人文与管理学院桂林 541004

通讯作者: 李芳耀男, 博士, 副教授, 主要从事天然产物结构修饰及生物活性研究。E-mail:lifangyao2006@163.com

基金项目:

广西自然科学基金项目（2016GXNSFAA380323，2018GXNSFAA281200，2016GXNSFEA380001）、国家级大学生创新创业训练计划项目（201710601017）、桂林市科学研究与技术开发计划重点项目（20170108-10）、广西高校中青年科研基础能力提升项目（2019KY051）和广西肿瘤免疫与微环境调控重点实验室开放课题项目（2018KF010）资助

摘要: 本文以丹皮酚为原料合成了15个新型丹皮酚噻唑衍生物，利用IR、¹H NMR、¹³C NMR和MS对所得化合物的结构进行表征，采用MTT法考察了目标化合物对MGC-803（胃癌细胞）、LOVO（结肠癌细胞）、T-24（膀胱癌细胞）3种细胞的体外抗肿瘤活性。结果表明，部分化合物具有良好的细胞毒活性，其中化合物4b、4e、4f、4h、4l对MGC-803的细胞毒性优于阳性对照药顺铂，尤其是化合物4b对MGC-803、LOVO和T-24三种肿瘤细胞的IC₅₀值分别为11.39±4.46、2.06±1.27和6.03±0.86 μg/mL，值得进一步研究。

关键词:

丹皮酚
/ 噻唑
/ 合成
/ 细胞毒性

English

Syntheses and Cytotoxicity Evaluation of Novel Paeonol-Thiazoles Derivatives

1.
College of Pharmacy, Guilin Medical University, Guilin 541004
2.
College of Humanities and Management, Guilin Medical University, Guilin 541004

Corresponding author: Li Fangyao, lifangyao2006@163.com

Received Date: 31 January 2019
Accepted Date: 18 February 2019
Available Online: 01 July 2019

Abstract: Fifteen novel paeonol thiazole derivatives were synthesized using paeonol as starting material and their structures were confirmed by IR, ¹H NMR, ¹³C NMR and MS. All of them were evaluated for their cytotoxicity against three human cancer cell lines (MGC-803, LOVO and T-24) in vitro by standard MTT assay. The results presented that some of the target compounds exhibit significant cytotoxic activity, such as compounds 4b, 4e, 4f, 4h, 4l exhibite better antitumor activity than the positive reference cisplatin against MGC-803. In particular, compound 4b shows the most potent antitumor activities with IC₅₀ values of 11.39±4.46 μg/mL, 2.06±1.27 μg/mL and 6.03±0.86 μg/mL against MGC-803, LOVO and T-24 tumor cell lines, respectively. It suggestes that compound 4b might be the candidate for further investigation.

Key words:

Paeonol
/ Thiazole
/ Synthesis
/ Cytotoxicity

丹皮酚，又名牡丹酚、芍药酮，是中药牡丹皮和徐长卿的主要活性成分，药理研究表明丹皮酚具有抗氧化^[1]、抗菌消炎^{[2, 3]}、镇静催眠、解热镇痛、免疫调节、抗动脉粥样硬化^[4]及抗凝血^[5]等多种药理活性。近年来研究发现丹皮酚对肝癌、乳腺癌、宫颈癌、鼻咽癌和直肠癌等多种肿瘤细胞均具有增殖抑制作用，并且可诱导肿瘤细胞凋亡、增强肿瘤细胞对放化疗的敏感性^[6]。噻唑是三唑、咪唑、吡唑、噁唑等杂环的生物电子等排体，表现出广泛的生理活性，如抗真菌、抗肿瘤、抗菌、抗炎等^[7~10]。有研究表明一些药物结构中的咪唑、吡啶等杂环被噻唑替换后能够增强药物作用时间及药物作用效果，提高生物利用度^[11]。目前已有部分噻唑类抗肿瘤药物成功应用于临床，如噻唑呋林、达沙替尼、伊沙匹隆、达拉菲尼、博来霉素等，它们对肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)达到微摩尔水平，临床治疗效果良好^{[12, 13]}。

因此，为了获得具有较好抗肿瘤活性的化合物，在已有的研究^{[14, 15]}基础上，应用拼合原理设计并合成了一系列含有噻唑结构片段的丹皮酚衍生物(合成路线见图 1)。对目标化合物进行了初步体外抑制胃癌MGC-803、结肠癌LOVO和膀胱癌T-24肿瘤细胞增殖的活性测试。

图式 1

图式 1. 标题化合物的合成路线

Scheme 1. Synthetic routes of the titled compounds

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1. 实验部分

1.1 试剂与仪器

丹皮酚购置于上海宝曼生物科技有限公司；各种α-溴代苯乙酮从萨恩化学技术上海有限公司购得，其他试剂及溶剂均为市售分析纯级，实验前未进一步纯化。

WRX-4显微熔点仪(上海易测仪器设备有限公司)；Prestige-21 FTIR红外光谱仪(日本Simadzu公司)；AVANCE AV 600 MHz核磁共振谱仪(瑞士Bruker公司)；LCMS-8030液相色谱-质谱联用仪(日本Simadzu公司)。

1.2 化合物的合成

1.2.1 丹皮酚缩氨基硫脲2的合成^{[16, 17]}

在250mL干燥圆底烧瓶中加入33mmol硫代氨基脲和40mL无水乙醇，80℃条件下加热搅拌回流30min，将60mL热的丹皮酚(1, 30mmol)的无水乙醇溶液慢慢加入圆底烧瓶中，再加入15滴浓硫酸，继续加热反应20h后停止反应，加入80mL冰水，过滤、洗涤，得到淡黄色固体5.4g，产率75.2%；熔点187.2~189.0 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3562(OH)，3379(NH₂)，3271(NH)，3138，2976，2841，1624(C=N)，1589，1514，1479，1340，1253，1166，1080，970，837，792，744；MS(ESI)m/z：C₁₀H₁₃N₃O₂S，计算值239.2，实测值240.0 ([M+H]⁺)。

1.2.2 丹皮酚噻唑类化合物4a~4o的合成^[18~20]

在100mL圆底烧瓶中加入1mmol丹皮酚缩氨基硫脲、1mmol化合物3a~3o和20~80mL无水乙醇，80℃搅拌回流反应，TLC(石油醚:乙酸乙酯体积比3:1)监测至反应结束，冷却，过滤，无水乙醇洗涤沉淀，干燥，用无水乙醇和氯仿重结晶得固体产物4a~4o。

N-(4-苯基噻唑-2-基)-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4a：淡黄色固体，产率73.0%；熔点195.0~196.1 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3412(OH)，3232(NH)，3049，2931，2849，1620(C=N)，1591，1510，1454，1363，1282，1199，1155，1111，1025，975，858，754，671；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：7.86(d，J=7.5Hz，2H，H-2’，H-6’)，7.50(d，J=8.5Hz，1H，H-4’)，7.42(t，J=7.2Hz，2H，H-3’，H-5’)，7.32(t，J=7.1Hz，1H，H-6’)，7.28(s，1H，H-10)，6.49(d，J=15.1Hz，2H，H-5，H-3)，3.76(s，3H，OCH₃)，2.40(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：167.67，161.21，159.34，153.90，133.54，129.46，128.73，127.95，125.59，113.30，105.79，102.42，101.49，55.25，14.44；MS (ESI) m/z：C₁₈H₁₇N₃O₂S，计算值339.1，实测值338.1 ([M-H]^-)。

N-[4-(2-羟基苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4b：黄色固体，产率82.3%；熔点231.0~234.0 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3414(OH)，3097，2937，2841，1620 (C=N)，1516，1458，1361，1284，1193，1159，1107，1028，976，858，743；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：8.04(t，J=7.7、1.3Hz，1H，H-6’)，7.50(d，J=8.7Hz，1H，H-6)，7.40~7.36 (m，1H，H-4’)，7.33~7.27(m，2H，H-5’，H-10)，7.26(d，J=2.1Hz，1H，H-3’)，6.50 (dd，J=8.7、2.6 Hz，1H，H-5)，6.48 (d，J=2.5Hz，1H，H-3)，3.76(s，3H，OCH₃)，2.39(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：166.95，161.23，160.36，159.23，158.70，153.43，129.48，129.28，124.75，121.69，121.62，116.19，116.04，113.30，105.82，101.51，55.25，14.48；MS(ESI) m/z：C₁₈H₁₇N₃O₃S，计算值355.1，实测值356.0 ([M+H]⁺)。

N-[4-(4-羟基苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4c：黄棕色固体，产率55.1%；熔点238.2~238.7 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3412(OH)，3232(NH)，2827，1618(C=N)，1593，1550，1446，1369，1330，1257，1174，1112，1022，945，831，794，736，615；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：12.36(s，1H，OH)，11.36(s，1H，NH)，9.67(s，1H，OH)，7.66(d，J=7.6Hz，2H，H-2’，H-6’)，7.49(d，J=8.8Hz，1H，H-2)，7.07~6.86(m，1H，H-10)，6.80(d，J=8.7Hz，2H，H-3’，H-5’)，6.49(dd，J=8.7、2.6 Hz，1H，H-5)，6.47(d，J=2.5Hz，1H，H-3)，3.76(s，3H，OCH₃)，2.40(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：167.57，161.11，159.44，129.34，127.00，115.40，113.26，105.74，101.45，55.22，14.26；MS (ESI) m/z：C₁₈H₁₇N₃O₃S，计算值355.1，实测值356.0 ([M+H]⁺)。

N-[4-(2-甲氧基苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4d：黄色固体，产率87.9%；熔点239.4~240.6 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3560 (OH)，3412 (NH)，3003，2839，1612 (C=N)，1514，1433，1390，1255，1176，1099，1022，975，842，750，621；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：7.97 (d，J=7.6Hz，1H，H-6’)，7.50(d，J=8.7Hz，1H，H-4’)，7.38~7.33 (m，1H，H-5’)，7.31(s，1H，H-6)，7.12(d，J=8.1Hz，1H，H-3’)，7.03(t，J=7.5Hz，1H，H-10)，6.50(dd，J=8.7、2.6 Hz，1H，H-5)，6.48(d，J=2.5Hz，1H，H-3)，3.90(s，3H，OCH₃)，3.76(s，3H，OCH₃)，2.38(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：166.26，161.24，159.28，156.57，154.16，129.51，129.24，128.97，120.50，113.43，111.66，106.18，106.14，105.77，101.49，101.32，55.53，55.25，14.47；MS (ESI) m/z：C₁₉H₁₉N₃O₃S，计算值369.1，实测值370.0 ([M+H]⁺)。

N-[4-(3-甲氧基苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4e：黄色固体，产率58.3%；熔点211.6~213.3 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3417(NH)，2939，1604(C=N)，1517，1431，1280，1166，1105，1029，850，769，690；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：7.50(d，J=8.6 Hz，1H，H-6’)，7.43 (d，J=7.4Hz，2H，H-5’，H-6)，7.36~7.27(m，2H，H-2’，H-10)，6.89(d，J=7.9Hz，1H，H-4’)，6.49(d，J=8.8Hz，1H，H-5)，6.47(s，1H，H-3)，3.80(s，3H，OCH₃)，3.76(s，3H，OCH₃)，2.40(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：167.58(C-9)，161.21，159.55，159.34，154.04，134.81，129.80，129.48，117.95，113.78，113.30，110.85，105.79，102.70，101.48，55.25，55.15，14.47；MS (ESI) m/z：C₁₉H₁₉N₃O₃S，计算值369.1，实测值368.1 ([M-H]^-)。

N-[4-(4-甲氧基苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4f：黄色粉末固体，产率97.6%；熔点240.0~241.1 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3456(OH)，2999，2835，1618(C=N)，1512，1363，1290，1253，1192，1147，1107，1020，827，769；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：7.78(d，J=8.8Hz，2H，H-2’，H-6’)，7.50(d，J=8.8Hz，1H，H-6)，7.11~7.05(m，1H，H-10)，6.98(d，J=8.8Hz，2H，H-5’，H-3’)，6.49(dd，J=8.8、2.5 Hz，1H，H-5)，6.47(s，1H，H-3)，3.78(s，3H，OCH₃)，3.76(s，3H，OCH₃)，2.40(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：167.64，161.26，161.19，159.38，159.30，159.10，129.44，129.03，126.97，114.08，113.95，113.31，105.76，101.47，55.24，55.19，14.43；MS(ESI) m/z：C₁₉H₁₉N₃O₃S，计算值369.1，实测值368.1 ([M-H]^-)。

N-[4-(2-氟苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4g：黄色固体，产率73.7%；熔点204.7~205.6 ℃；IR (KBr，cm^-1)：2997，2837，1624(C=N)，1510，1363，1257，1199，1105，1022，975，754，655；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：7.81(dd，J=7.8、1.5 Hz，1H，H-6’)，7.51(d，J=8.8Hz，1H，H-3’)，7.39(s，1H，H-4’)，7.18(t，J=8.5Hz，1H，H-6)，6.92(d，J=8.9Hz，1H，H-5’)，6.86(t，J=7.5Hz，1H，H-10)，6.50(dd，J=8.7、2.6 Hz，1H，H-5)，6.48(d，J=2.5Hz，1H，H-3)，3.76(s，3H，OCH₃)，2.40(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：167.02，161.34，159.19，155.14，153.96，129.62，129.26，127.35，119.20，118.43，116.74，113.37，105.88，103.64，101.50，55.27，14.70；MS(ESI) m/z：C₁₈H₁₆FN₃O₂S，计算值357.1，实测值358.0 ([M+H]⁺)。

N-[4-(4-氟苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4h：黄色固体，产率79.4%；熔点197.4~198.5 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3479(OH)，3412(NH)，2910，1618(C=N)，1512，1359，1284，236，1159，1105，1022，837，802，692；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：7.98~7.69(m，2H，H-2’，H-6’)，7.50(d，J=8.7Hz，1H，H-10)，7.31~7.12(m，3H，H-6，H-3’，H-5’)，6.55~6.44(m，2H，H-5，H-3)，3.76(s，3H，OCH₃)，2.39(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：167.69，162.58，161.21，160.96，159.29，153.59，130.40，129.46，127.66，127.60，115.64，115.50，113.28，105.79，102.43，101.49，55.24，14.43；MS(ESI) m/z：C₁₈H₁₆FN₃O₂S，计算值357.1，实测值356.1 ([M-H]^-)。

N-[4-(3-氯苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4i：乳白色粉末固体，产率65.6%；熔点215.9~216.7 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3412(OH)，3049，2920，1620(C=N)，1566，1477，1355，1255，1205，1101，1022，975，833，773，732，690；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：7.93 (t，J=1.8Hz，1H，H-2’)，7.83(d，J=7.8Hz，1H，H-6’)，7.52~7.48(m，2H，H-4’，H-5’)，7.45(t，J=7.9Hz，1H，H-6)，7.37(d，J=8.0Hz，1H，H-10)，6.50(dd，J=8.7、2.6 Hz，1H，H-5)，6.47(d，J=2.6Hz，1H，H-3)，3.76(s，3H，OCH₃)，2.39(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：167.69，161.24，159.23，153.51，136.06，133.54，130.63，129.49，127.53，125.30，124.12，116.53，113.29，105.83，101.49，79.21，55.26，14.47；MS (ESI) m/z：C₁₈H₁₆ClN₃O₂S，计算值373.1，实测值373.9 ([M+H]⁺)。

N-[4-(4-氯苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4j：黄色固体，产率42.4%；熔点221.0~223.6 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3417(OH)，3095，2935，1618(C=N)，1516，1361，1282，1149，1020，825，779，680；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：7.88(d，J=8.5 Hz，2H，H-2’，H-6’)，7.49 (dd，J=12.2、8.7 Hz，3H，H-5’，H-3’，H-6)，7.37(s，1H，H-10)，6.49(dd，J=8.8、2.5 Hz，1H，H-5)，6.47(d，J=2.5Hz，1H，H-3)，3.76(s，3H，OCH₃)，2.39(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：167.74，161.23，159.26，153.56，132.77，132.25，129.48，128.72，127.31，113.28，105.81，103.71，101.49，55.25，14.44；MS(ESI) m/z：C₁₈H₁₆ClN₃O₂S，计算值373.1，实测值374.0 ([M+H]⁺)。

N-[4-(3-溴苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4k：黄色固体，产率79.8%；熔点220.3~221.6 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3414(OH)，3232(NH)，2974，1616(C=N)，1514，1471，1431，1365，1257，1201，1111，1076，1026，950，835，767，729，682；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：8.08(s，1H，H-6’)，7.87(d，J=7.5Hz，1H，H-4’)，7.55~7.43(m，3H，H-2’，H-5’，H-6)，7.38(t，J=7.8Hz，1H，H-10)，6.53~6.45(m，2H，H-5，H-3)，3.76(s，3H，OCH₃)，2.39(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：167.72，161.24，159.22，153.53，136.22，130.90，130.41，129.50，128.21，124.47，122.15，113.29，105.84，104.43，101.49，55.26, 14.48；MS(ESI) m/z：C₁₈H₁₆BrN₃O₂S，计算值417.0，实测值416.0 ([M-H]^-)。

N-[4-(4-溴苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4l：淡黄色固体，产率93.6%；熔点226.8~227.9 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3560(OH)，3412(NH)，2924，1618(C=N)，1558，1516，1390，1280，1151，1109，1072，1004，823，781，732，613；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：7.81(d，J=8.5Hz，2H，H-2’，H-6’)，7.61(d，J=8.5Hz，2H，H-3’，H-5’)，7.50(d，J=8.7Hz，1H，H-6)，7.38(s，1H，H-10)，6.49(dd，J=8.7、2.6 Hz，1H，H-5)，6.47(d，J=2.5Hz，1H，H-3)，3.76(s，3H，OCH₃)，2.39(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：167.76，161.25，159.26，153.75，133.02，131.63，129.49，127.63，120.88，113.33，105.82，103.59，101.53，55.27，14.48；MS (ESI) m/z：C₁₈H₁₆BrN₃O₂S，计算值417.0，实测值416.0 ([M-H]^-)。

N-[4-(2-硝基苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4m：黄色固体，产率52.3%；熔点187.8~190.6 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3315(NH)，3107，2835，1627(C=N)，1558，1519，1396，1373，1282，1161，1026，981，912，842，777，729；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：11.87(s，1H，OH)，11.28(s，1H，NH)，7.89(s，1H，H-2’)，7.77(d，J=7.1Hz，1H，H-5’)，7.73(t，J=7.5Hz，1H，H-3’)，7.60(t，J=7.5Hz，1H，H-4’)，7.50(d，J=8.8Hz，1H，H-6)，7.24(s，1H，H-10)，6.50(dd，J=8.7、2.6 Hz，1H，H-5)，6.47(d，J=2.6Hz，1H，H-3)，3.77(s，3H，OCH₃)，2.37(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：168.04，161.31，159.15，153.50，151.43，148.58，132.59，130.92，129.57，129.24，128.56，123.99，113.35，107.36，105.87，101.51，55.27，14.69；MS(ESI) m/z：C₁₈H₁₆N₄O₄S，计算值384.1，实测值383.1 ([M-H]^-)。

N-[4-(3-硝基苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4n：黄色固体，产率95.2%；熔点242.6~243.0 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3300(NH)，2935，1624(C=N)，1535，1344，1255，1199，1103，1016，896，835，732；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：8.74~8.67(m，1H，H-2’)，8.31(d，J=7.9Hz，1H，H-4’)，8.15(dd，J=8.1、1.7 Hz，1H，H-6’)，7.72(t，J=8.0Hz，1H，H-5’)，7.67(s，1H，H-6)，7.50(d，J=8.8Hz，1H，H-10)，6.50 (dd，J=8.8、2.6 Hz，1H，H-5)，6.47 (d，J=2.6Hz，1H，H-3)，3.76(s，3H，OCH₃)，2.39(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：168.08，161.42，161.28，159.12，153.36，148.30，135.77，131.67，130.32，129.56，122.26，120.06，113.32，105.86，101.49，55.26，14.59；MS(ESI) m/z：C₁₈H₁₆N₄O₄S，计算值384.1，实测值383.1 ([M-H]^-)。

N-[4-(4-硝基苯基)噻唑-2-基]-2-羟基-4-甲氧基苯乙酮腙4o：橙色固体，产率76.8%；熔点251.9~254.0 ℃；IR (KBr，cm^-1)：3414(OH)，3346(NH)，2839，1624(C=N)，1560，1506，1338，1255，1201，1112，1024，975，835，715，638；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ：11.98(s，1H，OH)，11.48(s，1H，NH)，8.30(d，J=8.9Hz，2H，H-3’，H-5’)，8.14(d，J=8.3Hz，2H，H-2’，H-6’)，7.77(s，1H，H-6)，7.51(d，J=8.8Hz，1H，H-10)，6.51(dd，J=8.8、2.6 Hz，1H，H-5)，6.48(d，J=2.4Hz，1H，H-3)，3.77(s，3H，OCH₃)，2.39(s，3H，CH₃)；¹³C NMR (151MHz，DMSO-d₆)δ：168.14，161.31，159.05，153.05，148.88，146.35，140.57，129.58，126.46，124.20，113.36，108.31，105.87，101.52，55.27，14.59；MS(ESI) m/z：C₁₈H₁₆N₄O₄S，计算值384.1，实测值383.0 ([M-H]^-)。

1.3 目标化合物的抗肿瘤活性测定

将MGC-803、LOVO和T-24细胞在DEME培养基:胎牛血清:双抗(青链霉素)=100:10:1的完全培养基中培养，置于37℃、5%CO₂的培养箱内培养，以每孔1×10⁵细胞的密度接种在96孔板中培养，在96孔板的四周加入相同体积的PBS，轻轻拍打96孔板的周围，使细胞分布均匀，分别按不同计量浓度加入顺铂、丹皮酚及合成的丹皮酚噻唑类化合物，孵育44h后每孔加入20μL的MTT(5mg/ml)处理4h，终止培养。离心，小心吸弃孔内培养上清液，最后每孔加入150μL的DMSO，振荡10min，使结晶物充分溶解。用酶联免疫监测仪在490nm的波长下测定每孔吸光度OD值，计算结果并按公式计算细胞生长抑制率：生长抑制率(%)=(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值×100%。所有实验均重复3次后取平均值。IC₅₀利用SPSS 23.0计算，结果见表 1。

表 1

表 1 化合物4a~4o的抗肿瘤活性

Table 1. Antitumor activity of compounds 4a~4o against different cell lines (IC₅₀, μg/mL)^a

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Compd.	IC₅₀
Compd.	MGC-803	LOVO	T-24	LO2
4a	19.24±0.82	＞20	＞20	＞20
4b	8.39±0.46	2.06±1.27	6.03±0.86	＞20
4c	17.02±1.53	＞20	12.57±0.57	＞20
4d	＞20	＞20	＞20	＞20
4e	11.86±3.35	＞20	2.95±0.36	＞20
4f	3.63±0.76	15.74±0.83	＞20	＞20
4g	＞20	＞20	＞20	＞20
4h	3.74±0.01	＞20	14.83±0.45	＞20
4i	＞20	＞20	＞20	＞20
4j	18.47±2.32	8.66±0.38	10.22±1.33	＞20
4k	＞20	12.42±0.48	＞20	＞20
4l	7.14±2.27	＞20	＞20	＞20
4m	16.84±0.53	＞20	＞20	＞20
4n	＞20	18.23±2.43	3.26±0.11	＞20
4o	＞20	＞20	12.05±0.29	＞20
丹皮酚	＞20	＞20	＞20	＞20
Cisplatin	14.13±0.55	10.28±0.94	8.73±1.62	18.07±0.48
^aIC₅₀ values are presented as the mean±SD (standard deviation) from three separated experiments.

2. 结果与讨论

2.1 合成部分

以丹皮酚和硫代氨基脲为起始原料，通过缩合反应合成丹皮酚缩氨基硫脲席夫碱，为了增加羰基的反应活性，以浓硫酸为催化剂，产率为75.2%，只需简单处理，即可用于下一步反应。丹皮酚缩氨基硫脲与不同取代基的α-溴代苯乙酮在无水乙醇中回流反应，经无水乙醇和氯仿混合溶剂重结晶即可得到目标化合物4，产率为42.4%~97.6%。

2.2 目标化合物的抗肿瘤活性分析

从表 1可知，部分目标化合物对受试的三种癌细胞均有良好的抑制活性。对于人胃癌细胞MGC-803，4b、4e、4f、4h、4l表现出明显的抑制活性，活性优于常用抗癌药物顺铂，其中以化合物4f活性最佳，IC₅₀值达3.63±0.76 μg/mL。对于人结肠癌细胞LOVO，化合物4b和4j显示了良好的细胞毒活性，IC₅₀值分别为2.06±1.27和8.66±0.38 μg/mL。对于人膀胱癌细胞T-24，化合物4b、4e和4n活性优于阳性对照药，同时，令人振奋的是目标化合物对人正常肝细胞LO2的毒性皆小于顺铂。可见，在丹皮酚骨架中引入噻唑杂环，有利于丹皮酚抗肿瘤活性的提高。尤其是化合物4b对MGC-803、LOVO和T-24三种肿瘤细胞的细胞毒性均强于顺铂，可考虑作为先导化合物，对其进一步研究。

3. 结论

以中药活性成分丹皮酚为原料，在浓硫酸催化与硫代氨基脲缩合得到丹皮酚缩氨基硫脲，然后与不同取代的α-溴代苯乙酮进行缩合、环合反应合成了15个新型丹皮酚噻唑类化合物，采用IR、¹H NMR、¹³C NMR和MS对目标化合物的结构进行了鉴定。体外抗肿瘤活性结果表明，部分化合物具有显著的细胞毒活性，化合物4b对肿瘤细胞增殖抑制活性最佳，对MGC-803、LOVO和T-24三种肿瘤细胞增殖抑制活性均强于顺铂，并且对正常肝细胞LO2毒性较低，具有进一步研究的价值。

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图式 1 标题化合物的合成路线

Scheme 1 Synthetic routes of the titled compounds

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表 1 化合物4a~4o的抗肿瘤活性

Table 1. Antitumor activity of compounds 4a~4o against different cell lines (IC₅₀, μg/mL)^a

Compd.	IC₅₀
Compd.	MGC-803	LOVO	T-24	LO2
4a	19.24±0.82	＞20	＞20	＞20
4b	8.39±0.46	2.06±1.27	6.03±0.86	＞20
4c	17.02±1.53	＞20	12.57±0.57	＞20
4d	＞20	＞20	＞20	＞20
4e	11.86±3.35	＞20	2.95±0.36	＞20
4f	3.63±0.76	15.74±0.83	＞20	＞20
4g	＞20	＞20	＞20	＞20
4h	3.74±0.01	＞20	14.83±0.45	＞20
4i	＞20	＞20	＞20	＞20
4j	18.47±2.32	8.66±0.38	10.22±1.33	＞20
4k	＞20	12.42±0.48	＞20	＞20
4l	7.14±2.27	＞20	＞20	＞20
4m	16.84±0.53	＞20	＞20	＞20
4n	＞20	18.23±2.43	3.26±0.11	＞20
4o	＞20	＞20	12.05±0.29	＞20
丹皮酚	＞20	＞20	＞20	＞20
Cisplatin	14.13±0.55	10.28±0.94	8.73±1.62	18.07±0.48
^aIC₅₀ values are presented as the mean±SD (standard deviation) from three separated experiments.

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通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com

1.
沈阳化工大学材料科学与工程学院沈阳 110142